Средство для определения перекиси водорода в биологических жидкостях Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

I

Изобретение относится к средствам экспресс-анализа перекиси водорода, преимущественно определения скрытой крови и глюкозы в биологических жидкостях.

Цель изобретения - удлинение срока хранения средства, связьшание ионов тяжелых металлов, препятство- вание эффекту вымывания и увеличение скорости проникновения водного тестового раствора.

Изобретение представляет собой индикаторные полоски бумаги (фильтровальная бумага, целлюлоза или искус

ственный нетканьй материал), на которые нанесены: индикатор окисления (соединения бензидинового ряда, гетероциклические азины, а также гваяковая кислота), глубина окраски которого является мерой определяемого вещества и количество которого составляет 3-10-кратный избыток количества субстрата, т.е. 0,05 - 1 г на 100 мм раствора; стабилизатор общей

О II формулы Ap-NH-NH-C-NHj для защиты

индикаторов окисления от быстрого

4 СП

00

со

ы

окисления, т.е. для увеличения сох- . ранности средств, например 1-арилсе- микарбазид, в котором арильная группа заменена на метилфенил/оксиметил- фенил или хлорфенил в качестве 0,005- 0,9 г на 100 мл; пероксидаза (75 и/мг), катализатор реакции, в количестве 0,1-0,2 г на 100 мл раствора; буферный раствор с рН 5,0-5,5 в количестве 0,05-0,5 г на 100 мл раствора; комплексообразователь (нат- рийметафосфат или соль этилендиамин- тетрауксусная кислота) в количестве 0,05-0,5 г на 100 мл для связьшания ионов тяжелых металлов, п|)исутствие которых может дать ложнопротивополож- ную реакцию; загуститель (метилцел- люлоза ши желатин, или поливинил- пирролидин) в количестве 0,5-5 г на 100 мл ДЛЯ предотвращения вьадветания поверхности индикаторной бумажки; смачиватель в количестве 0,1-0,5 г на 100 мл.

В качестве смачив ающих.веществ применяют органические сульфаты или сульфонаты с длинными цепями, такие как натрийдодецилбензолсульфонат, диоктилнатрийсульфосукцинат или нат- рийлаурилсульфат, которые наносят на индикаторную бумажку для увеличения скорости проникновения водного тес- того раствора.

Пример 1, Опыт для доказательства скрытой крови в кале.

Фильтровальную бумагу (Шляйхерн иЬолль 597, № F-Ind) последовательно пройитьшают следующими растворами.

Раствор I: 0,34 М КЭДТА буфер 5,5 Ю мл; поливинилпирролидон 300 мг дистиллированная вода до 100 мл, Раствор II: гваяковая кислота 1% АЕ . 260 130 мг; 1-феиилсеми/Clie

карбазид 65 мг; ацетон до 100 мл.

Вместо 1-фенилсемикар0азида может использоваться метилфенилсемикарба- зид, оксиметилфенилсемикарбазид или зшорфенилсемикарбазид в эквимолярном количестве.

Индикаторные бумажки, изготовленные в.соответствии с указанным способом, стабильны в отношении воздействия света и воздуха. С целью иден- тификации крови кал наносят на индикаторную бумажку, дают ему подсохнуть и проявляют с обратной стороны с помощью перекисно-водородного раствора в спирте. При наличии патологического количества крови на индикаторной бумажке возникает по кругу отходящая от анализируемой пробы лучисто-голубая зона.

Пример 2. Идентификация крови в кале.

Фильтровальную бумагу (ватман № 1) последовательно подвергают пропитке следующими растворами и высушивают.

Раствор I: 0,34 М К.ЗДТЛ буфер рН 5,0 10 мл; диоктилнатрийсульфосукцинат 500 мл; метиловый спирт 20 мл дистиллированная вода 80 мл.

Раствор II: 3,3-5.5 -тетраметил- бензидин 400 мг; 1-фенилсемикарба- аид 100 мг; ацетон 100 мл.

После проявления нанесннного на индикаторную бумажку анализируемого вещества с помош,ью спиртового раствора перекцри водорода определяют патологические количества крови- в кале по появлению вокруг анализируемого образца зеленой окраски. Такая индикаторная бумажка стабильна в отнощёнии воздействия света и окиления воздухом.

Индикаторная бумажка, изготавливаемая по указанной рецептуре, но без -Нарилсемикарбазида приобретает под воздействием света и воздуха в течение короткого времени голубовато-зеленую окраску, не пригодную для диагностических целей.

Пример 3. Индентификация крови в кале.

Фильтровальную бумагу (Шляйхер и Шлль 597 NF-Ind) поочередно подвергают пропитке следуюодами растворами и высушивают.

Раствор I: соответствует раствору из примера 2.

Раствор II: 1- р-этилб ензтиазо- лон (2)j -2- l-фeнил-3-мeтил-4-этил- l, 2 4-триазолон (5)-азин 100 мг; 1.-фенилсемикарбазид 70 мг; ацетон 100 мл.

Такая индикаторная бумажка, но без 1-арилсемикарбазида, меняет сво окраску уже в ходе реакции так, что в кале здоровых лиц может возникнут неправильная положительная реакция. Пример 4. Идентификация крови в моче, в лимфе.

Фильтровальная бумага (111ляйхер и 11Лолль 23 SY) подвергается последо

5

вательно пропитке следующими растврами, а также высушивается.

Раствор I: 1,2 М натрийиитратны буфер р Н 5,25 35 мл; этилендиамин- тетрауксусная кислота, двунатриева соль 0,1 г; диоктилнатрийсульфосук ционат 0,5 г; 2,5-диметилгексан- 2,5 дигидропароксид (приблизительно 70%) 1,6 г; фосфорно-кислый тримор- фолид 12,7 г; этанол 30 мл; дистиллрованная вода до 100 мл.

Раствор II: 3,3,5,5 -тeтpaмeтил бeнзин 0,3 г; фенантридин 0,2 г; 1-фенилсемикарбазид 0,05 г; метанол толуол (40:60) до 100 мл.

Индикаторная бумага такого рода практически не испытывает воздейств света и воздуха. Индикаторная бумаг без 1-семикарбазида приобретает зеленую окраску после 5-10-минутной экспозиции на свету. Аналогичными нприятными свойствами обладает индикторная бумага, которая пропитана вместо 1-арилсемикарбазида, соответствующего предлагаемому изобре,теник) эквимолярными количествами аминогуа нидина или семикарбазида, введенног в раствор..

1-Фенилеемикарбазид может быть заменен эквимолярными количествами 1-(парахлорфенил)-семикарбазида, 1 -(р-толила)-семикарбазида, 1-(р-ме токсифенил)-семикарбазида, что не мняет свойств указанных индикаторных бумаг.

С помогаю индикаторных бумаг, полученных в соответствии с указанным примером, кровь в моче и лимфе може быть идентифицирована с достаточной точностью и чувствительностью.

Пример 5. Индикаторные бумаги для идентификации глюкозы в моче.

Фильтровальн то бумагу (111ляйхер, иЬлль, 2312) подвергают пропитке и высушиванию с помо1цью следуювщх растворов.

Ра-створ I: глюкозооксидаза (55 и/мг) 500 мг; пероксидаза (75 и/мг) 200 мг; тетразин 100 мг; дистиллированная вода 100 мл.

Раствор 11: 3,3,5,5 -тетраметил- бензидин 600 мг; 1-фенилсемикарбазид 50 мг; натрийлаурилфаркозинат 100 мг дистиллированная вода 100 мл.

Изготовленная таким образом бумага является стабильной в отношении воздействия света, воздуха, а также

0

5

влаги воздуха и проявляет в пределах концентрации глюкозы 30 - 2000 мг на 10 мл мочи возрастающую по интенсивности зеленую индикаторную окра- шиваю1чую реакцию.

Пример 6. Индикаторная бумага для идентификации глюкозы в моче.

Фильтровальная бумага (111ляйхер, 111юлль, 2316) подвергается обработке пропиткой и высушиванию с помощью раствора следуюр1;его состава: динат- риевая соль 2,2 -азкноди- 1-этилхино5 линон (2)-дисульфоновой кислоты (f«)J 100 мг; 1-фенилсемикарбазид 50 мг; поливинилпирролидон 250 мг; глюкозооксидаза (50 U/мг) 400 мг; пероксидаза (75 U/мг) ЮО мг; 0,4 М

0 натрийцитратный буфер рН 5,0 100 мл. Изготовленная таким образом индикаторная бумага позволяет определять концентрацию глюкозы в моче, начиная с 50 мг/10 мл за счет изменения ок- раски при, увеличении интенсивности фиолетового цвета.

Формула изобретения

1. Средство для определения перекиси водорода в биологических жидкостях, содержащее нанесенные на впитываюр1ую подложку пероксидазу, бу- буферный ра;створ с рН 5,0-5,5, ин- дикатор окисления, выбранный из

группы: бензидин, гетероциклический зин или гваяковая кислота, а также стабилизатор и дистиллированную воду, отлича.ющеес я тем.

что, с целью удлинения срока хранения, оно содержит 1-арилсемикарбазид, в котором арильная группа может быть замер;ена на метилфенил, аксиме- тилфенил или хлорфенил, при следую- щем соотношении компонентов, г: Пероксидаза. 0,1-0,2 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 0,05-0,5 1-Арилсемикарба- зид .0,005-0,9

Указанный индикатор окисления 0,05-1,0 Дистиллированная вода До 100 мл 2. Средство по п. 1, о т л и ч а- D; е е с я тем, что, с целью связывания ионов тяжелых металлов, оно ополнительно содержит комплексооб- азователь, выбранный из группы:

7

натрийметафосфат или соль этилендиа минтетрауксусной кислоты при следую щем соотношении компонентов, г: Пероксидаза 0,1-0,2 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикар- базид

Указанный комп- лексообразо- ватель

Указанный индикатор окисления Дистиллированная вода

3. Средство по п. 1, о т л и - чающееся тем, что, с целью препятствования эффекта вьшивания, оно дополнительно содержит загуститель, выбранный из группы: желатин метилцеллюлоза или поливинилпирро- лидон, при следующем соотношении компонентов, г: Пероксидаза Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикарба- зид

0,05-0,5 0,005-0,9

0,05-0,5 0,05-1,0 До 100 мл

0,1-0,2

0,05-0,5

0,005-0,9

0,5-5,0 0,05-1,0

578198

Указанный загуститель

Указанный индика- с тор окисления

Дистиллированная водаДо 100 мл

4. Средство по п. 1, отличающееся тем, что, с целью 10 повышения качества целевого продукта за счет увеличения скорости проникновения водного тестового раст- вЪра в средство, оно дополнительно содержит смачиватель, выбранный из 15 группы: натрийдодецилбен олсульфо- нат, диоктилнатрийсульфосукцинат, натрийлаурилсульфонат, при следующем соотношении компонентов,

Пероксидаза

20 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикарба- зид Указанный смачи25 ватель

Указанный индикатор окисления Дистиллированная вода

г: 0,1-0,2

0,05-0,5 0,005-0,9

0,1-0,5 0,05-1,0

До 100 мл

Изобретение относится к средствам экспресс-анализа перекиси водорода. Цель изобретения - удлинение срока хранения средства. Средство представляет собой индикаторные полоски бумаги, на которые нанесены индикатор окисления, стабилизатор ДЛЯ загциты индикаторов от быстрого окисления, пероксидаза, буферный раствор с рН 5,0-5,5, комплексообра- зователь для связывания ионов тяжелых металлов, загуститель для предотвращения выцветания индикаторной бумажки и смачиватель. Индикаторная бумага проявляет в пределах концентрации глюкозы 30 - 2000 мг на 10 мл мочи возрастаюп15то по интенсивности зеленую окраску. 3 з.п. ф-лы. § сг с