Способ разделения смеси нейтральных аминокислот Советский патент 1979 года по МПК C07C99/12 

п 200-300,

а в качестве элюента при этом используют дистиллированную воду, иричем жидкостную хроматографию ведут иутем последовательного пропускания исходных аминокнслот, вначале через монофункциональную смолу указанной выше общей формулы, содержащую ионы медн в количестве 40- 50 вес. % от состояния насыщения, затем- через эту же смолу в нейтральной форме.

Отличительными признаками способе являются использование в качестве ионообменной смолы монофункциональной смолы с аминоднацетатными группами указаиной общей формулы, а также использование в качестве элюента дистиллированной воды, причем жидкостную .хроматографию ведут нзтем последовательного пропускания исходных аминокислот: вначале через указанную монофункщюнальную смолу, содерл ащую ионы меди в количестве 40-50 вес. % от состояния насыщения, затем - через эту же смолу в нейтральной форме.

Порцию смеси аминокислот, полученных в результате гидролиза белоксодержащего сырья или подготовленных искусственно, пропускают последовательно через две колонки (первая заполнена комплексообразующей смолой, содержащей 40-50% ионов меди, вторая - нейтральной формой этой же смолы) и элюируют дистиллированной водой. Разделение аминокислот происходит в первой колонке, а возможные проскоки комплексообразующего иона металла устраняют во второй колонке с нейтральной формой смолы. Эдюат отбирают порциями. Определение чистоты полученных фракций продукта производят методом бумажной хроматографии.

Комплексообразующую смолу в медной форме (смолу ХКА-2) готовят следующим образом. Из гидроацидной формы смолу

переводят 0,5 М раствором ацетата аммония в нейтральную форму и обрабатывают раствором нитрата меди. Например, 10 г смолы ХКА-2 обрабатывают 250 мл раст5 вора меди, содержащего 3,7 г Си(МОз)2 ЗН2О, что равно половинному насыщению смолы ионами меди.

Подготовленную смолу помещают в ко0 лонку. Размеры термостатированной разделительной колонки во всех опытах постоянны и составляют: диаметр 14 мм, длина 200 мм. Короткая колонка, содержащая нейтральную форму смолы, н.меет диаметр 5 14 мм и длину 20 мм. Элюат отбирают порциями по 20 мл, которые затем подвергают анализу. Определение аминокислот в элюате производят методом бумажной хроматографии и на спектроэлектрофотометре 0 с зеленым светофильтром при 570 нм. Результаты каждого опыта разделения смеси аминокислот показаны на фиг. 1 и фиг. 2.

Пример 1. На фиг. 1 представлена

5 .xpoMaTorpa:viMa разделения нейтральных аминокислот - глицина, аланина, лейцина, и валина. Для разделения но 17 мг каждой аминокислоты растворяют в 10 мл дистиллированной воды, а затем эту смесь аминокислот помещают в верхиюю часть колонки для хроматографического разделения. Для разделения применяют комнлексообразурощую смолу с аминодиацетатными функциональными группами, которая

5 наполовину насыщеиа иоиами меди. Термостатируемая разделительная колонка са смолой в медной форме имеет длину 200 мм и диаметр 14 мм. Вторая колонка с нейтральной формой комплексообразующей смолы ХКА-2 нмеет длииу 20 мм и диаметр 14 мм. Разделение производят при температуре 20° С; элюентом во всех случаях служит дистиллированная вода. Скорость элюировання 10 мл/мин. Элюат отбнрают

5 фракциями по 20 мл и определяют в нем содержание аминокислот методом бумажной хроматографии и на спектроэлектрофотометре с зеленым светофильтром при длине волны 570 нм. Из хроматограммы на

фиг. 1 видно, что аминокислоты разделяются в следующей последовательности: глицин, аланин, валин, лейцин (см. также табл. 1).

Материальный баланс процесса разделения смеси нейтральных аминокислот

Т а о л 11 ц а

Пример 2. На фиг. 2 представлена хроматограмма разделения смеси нейтральных аминокислот - глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина, содержащихся в гидролизате шерсти. Для разделения берут 150 мг смеси аминокислот, содержащей 36,75 мг глицина, 30,6 мг аланина, 32,7 жг валина, 24,6 мг лейцина и 23,85 мг изолейцина. Смесь аминокислот растворяют в 20 мл дистиллированной воды и затем помещают в верхнюю часть колонки для хроматографического разделения. Для разделения применяют термостатируемую разделительную колонку с комплексообразующей смолой ХКА-2 в медной форме, которая имеет длину 200 мм и диаметр 14 мм.

Вторая колонка с нейтральной формой смолы имеет длину 20 мм и диаметр 14 мм. Разделение производят прп температуре 20° С, элюентом во всех случаях служит дистиллированная вода. Скорость элюировапия 10 мл/мин. Элюат отбирают фракциями по 20 мл и определяют в нем содержание аминокислот методом бумажной хроматографии и на фотоэлектрокалориметре с зеленым светофильтром при длине волны 570 нм. Из хроматограммы на фнг. 2 видно, что аминокислоты разделяются в следующей последовательности: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин. Разделенные аминокислоты находятся в элюате хроматографически чистые (табл. 2).

Т я б л и ц а 2

Материальный баланс процесса разделения смеси нейтральных аминокислот

Разделение смеси аминокислот предложенным способом позволяет получать аналитически чистые нейтральные аминокислоты, пригодные для использования в

медицинской, пищевой и фармацевтической промыщленности. Чистота аминокислот, по-видимому, объясняется тем, что прочность связывания ионов металла со смолой больше связывания ионов металла и аминокислоты, что и определяет их отсутствие в элюате.

Применение в качестве элюента дистиллированной воды и проведеппе процесса разделения в нормальных условия.х

делает его петрудоемким, улучшает условия труда, а применение смолы ХКА-2, содержащей 40-50 вес. % ионов металла от состояния насыщения, страняет необходимость ее регенерации и наполнения

после каждого цикла разделения, что позволяет снизить себестоимость полученных продуктов.

Формула изобретения

Способ разделения смеси нейтральных аминокислот путем жидкостной хроматографии с использованием ионообменной смолы, содержащей ионы переходного металла, с последующим элюированием целевых продуктов, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевых продуктов, в качестве ионообменной смолы используют монофункциональную смолу с аминодиацетатными группами общсп формулы

- сн-сн ICHjCOOH

. п

« 200-300,

а в качестве элюента используют дистиллированную воду, причем жпдкостную хроматографию ведут путем последовательного пропускания исходных аминокислот: вначале через монофункциональную смолу с аминодиацетатными грзшпами указанной выше формулы, содержащую ионы меди в количестве 40-50 вес. % от состояния насыщения, затем через эту же смолу в нейтральной форме.

по 200 28ff 310 wo

„ I..II111rIjJ11-LU11 H I11a-

80 iSn 210 320 too VSO Sfff 610

8

Источник информации, принятый во внимание ири экспертизе:

i. Патент Швеции 318423, кл. 42 3/09, оиубл. 08.12.69 (ирототип).

Leu

Ijl lЗлюат,мл

Элюат, мл

ftJZ.Z