Штамм продуцент противогрибкового антибиотика тернатина Советский патент 1979 года по МПК C12K1/06 C12D9/00 

Изобретение относигсЯ к защите рас тений и представляет собой щтамм-продуцент антигрибковых антибиотиков. Cidi|4tioc oicltum tet naitum описан как микрофильный гриб, но не было известно, что у вида имеются формыt продуцирующие биологические активные вещества. Предлагаемый штал® получен в результате рассева штамма-предшественника на ряд плотных сред с последующим отбором и изучением характера роста и антибиотической активности. Идентифицирован по определителю Засca otSy 2.Pung IV: 187 (1886J иТгаЬеп bonafc «Papt. Pe. VIII: 390 (1907j Содержится в коллекции ВНИИ фито-. патологии под №14. Морфолого-культуральные признаки, На агаризованной среде Чапека с 1% кукурузного экстракта образует колонии белые войлочные, размерил колоний .в разные сроки роста достигают в диаметре; на третьи-четвертые сутки 912 мм, на пятые 30-45 мм, на восьмые 80-85 мм, гифы прямые шириной до 8 ммк, конидиеносцы мутовчато-разветвленные септированные, бесцветные, в массе белые, конидии с одной перегородкой, располагаются двумя-четырьмя маленькими цепочками на фиалидах, с ;гладкой оболочкой, овальные, груше-, видные или продолговато-цилиндрические, диаметр (12-17)х(7-12) ммк, бесцветные, в массе восковые с кремоватым оттенком. При инкубации при начало роста мицелия отмечено на вторые сутки, появление спор на четвертые-пятые сутки, массовое спороношение на седьмые-восьмые сутки прекращение роста гриба наблюдается по мере освоения субстрата (в стандартных чашках Петри на десятые-тринадцатые сутки). На агаризованной среде с соевой мукой, кукурузным экстрактом, глюкозой колонии круглые, хлопьевидные, пушистые, слегка кремоватого оттенка, обусловленного обильным спороношением, в центре зоны пушистого складочного мицели я вершина выпуклая, край ровный, пигмент в субстрат не выделяют, диаметр колонии на восьмые сутки роста 75-80 мм. На среде с сахарозой, NHiNOj и кукурузным экстрактом воздушный мицелий паутинистый, .сероватый, спороношение умеренное, дигмент в субстрате не выделяет. На среде с маннитом я аспарагином воздушный мицелий очень плотный войлочный, коричяеватого оттенка, образует эКсудат, в субстрат выделяет коричневаты пигмент. . На сусло-агаре воздушный мицелий войлочный, спороношение обильное, по краю колонии выделяют ярко-оранжевый пигмент. Температурный оптимум роста штамм 22-2В°С, рН среды 5,5. Биохимические признаки. Отнесение к азоту: наблюдается хороший рост в присутствии кукурузного и дрожжевого экстрактов, пентона, соевой муки, ас парагина, гидролизата казеина; недос таточный рост в присутствии минераль ных источников азота lilHjCK, МШ(О«, . (И 04 , К аМОа , KHOj . Отношение к углероду: утилизирует глюкозу, Сахарозу, маниит, крахмал, глицерин, растительное масло. Предлагаемый штамм продуцирует ан тибиотик тернатин , обладающий; фунгидидньш действием против многих видов грибов и дрожжей in vHco . Анти биотик не действует на граммположительные и граммотрицательные бактерии и актиномицеты. Состав питательных сред и услЬвия культивирования, при которых получают антибиотик с наивысшей активностью. а) Среда для получения вегетативного посевного материала,: Глюкоза. Соевая мука KH.POj K.j,S 04 Mg504 Кукурузной 1,0 экстракт Раствор микро0,1 элементов рН до стери6,0 лизации Режим стери0,75 атм, 30 ми лизации б) ферментационная среда, %: Пептон Глюкоза рН до стерилизацииРежим стерили0,75 атм,30 ми зации , в) Условия /культивирования .у Вегетативный посевной материал в ращивают на приведенной выше среде глубинным способом в колбах Эрленме йера емкостью 750 мл. Объем среды в коЛбе 100 мл. Колбы засевают культу рой гриба 1 пробирка .на 1 колбу) , производят посев агарово-мицелиальн ми кусочками. Продолжительность выр щивания вегетативного посевного материала 72 при 27±1 С и скорости вращения качалки 220-240 об/мин. Жи кий посевной материал в момент пере дачи в ферментационную среду образо ван многочисленными разросшимися ми околониями, имекнцими вид уплотненных гранул различных размеров или крмпактной деточки гиф. Культивирование в приведенной вьше ферментационной. среде произво/1ится также на качалке в указанных выше условиях: продолжительность Ферментации 96-120 ч. Вегетативный посевной материал вносят в ферментационные колбы в количестве 5-7% к объему загруженной среды. Антибиотическую активность в процессе ферментации контролируют мето-. диффузии в агар с использованием в качестве тес -организма уредоспорРи coin4а gramines . В указанных условиях Ферментации содержание антибиотика в культуральном фильтрате составляет 100 мг/л. Пример культивирования.D.tennoriuniПредлагаемый штамм D.tet naiumBupaщивали на плотной питательной среде при в течение 20 суток. Состав среды,%: Сахароза5 ,5 Кукурузный экстракт 1,0 К HjPOj0,2 Mg6040,02 Раствор микроэлементов 0,1 Аг,ар-агар. 2,5 рН до стерилизации 5,5. Режим стерилизации 6,5 атм,30мин. Для получения вегетативного поревного материала культуру в виде агарово-мицелиальных кусочков вносили в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл со 100 мл среды следующего состава,%: Глюкоза Соевая мука KHjPO Кг©04 М|© 04 кукурузный экстракт Раствор sикpoэлeмeнтoв рН до стерилизации Режим стерилизации атм,30 мин, в одну колбу внЬсили культуру из. одной пробирки. Вегетационный посевной материал выращивали в течение 72 ч при на качалке со скоростью вращения 220-240 об/мин. По истечеиии указанного срока посевной материал имел вид уплотненных гранул разного размера Полученный посевной материал использова : для засеваферментационных колб (емкость 750 мл, объем среды в крлбе 100 мл). В каждую колбу вносили по 5 мл посевного материала {т.е. 5% от объема среды в ферментационной колбе), Продолжительность ферментации 96 ч при . Антибиотическую активность культу-, рального фильтра в конце ферментации определяли методом диффузии в агар с использованием в качестве тест-организма ypeflOcnopP.graininftB . Из 120 ферментационных колб получили 9 л культурального фильтрата с содержанием антибиотика; 90 мг/л. Антибиотик вьзделяют известным спЬсобом. Формула изобретения UtraMMDidyniocEadium ternOttum Засс (etjn.CaCdotrtchum ternatum Ъопор еи продуцент противогрибкового ан.тибиотика тернатина. Выделен во , ВНИИ фитопатологии и выделен по опред€5лителю SaccatxJo SuMTung. iVj 187 (18860 и V llqibenboret t fjjpt Pe.Dilze.. :; VIII:390(1907)iJ , Хранится в кол}ieKU.K ВНИИ фитопатологии под Id. Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде Чапека с 1% кукурузного экстракта Образует колонии белые войлочные, размеры колоНИИ в разные сроки роста достигают в диаметре: на третьи-четвертые сутки 9-12 мм, на пятые 30-45 мм, на восыш 80-85 кем; гифы прягвле шириной до 8 « конидиеносцы мутовчато-разветвленные септированные, бесцветные в массе белые, конидии с одной перегородкой, располагаются двумя-четырьмя маленЪки хи цепочками на фигшидах,с гладкой оболочкой, овальные, грушевидные или продолговато-цилиндрическ ие, диаметр 12- 17x7 - 12 ммк, бесцветные, в массе восковые с кремоват оттенке. :При инкубации при начало роста мицелия отмечено на вторйе сутки, появление спор на четвертые-пятые сутки массовое спороношение на седь 1евосьмые сутки, прекращение роста гриб в стандартных чашках Петри на десятые тринадцатые сутки. На агаризованной среде с соевой мукой, кукурузные экстрактом, глюкозой колонии круглые, хлопьевидные, пушистые слегка кремоватого оттенка, обус-i ловленного обильным спороношением, в центре зона пушистого складчатого мицелия, вершина выпуклая, край ровный, пигмент в субстрат не вьаделяют, диаметр колонии на восьмые сутки роста «. На среде с сахарозой, кукурузным экстрактом воздушный мицелий паутинистый, сероватый, спороношенне отмеренное, пигмент в субстрат не выделяет, На среде с маннитом и аспарагином воздушный мицелий очень плотный, войлочный, коричневатого оттенка образует эксудат, в субстрат выделяет коричневатый пигмент. На сусло-агаре воздушный мицелий войлочный, спороношение обильное, по краю колонии выделяет ярко-оранжевый П1сгмент. Темпёратуриь(й оптимум роста штамма 22-28 С. Биохимические признаки. Отношение к азоту; наблюдается хороший рост в присутствии кукурузного и дрожжевого экстрактов, пентона, соевой муки, аспарагииа, гидролизата казеина; недостаточный рост в присутствии минеральвых источников азота ,, ИНдКОз, (УН )jSO , Via W О , KNO ; отнсинение к углероду: утилизирует глюкозу, сахарозу, маннит, крахмал, глицерин, растительное масло. Антагонистические свойства. Штамм обладает антагонистическими свойствами против целого ряда фитопатоген НЫХ грибов. : Средняя активность штамма в лабораторных условиях 60-100 мгк/мл.