Способ выращивания микроорганизмов Советский патент 1979 года по МПК C12B3/14 

is,Mvcobacteriurn otcticoeum,FEavobcicterium suoveoe-ens rpnOax AspergnfEu niOfer, актиномицетах - ActinoinifCetes o(ureo ciciens. Способ выращивания вьтшеперечиспенных микроорганизмов состоит в спепующем. Проводят инкубацию микроорганизмов при 28°С в течение 4-5 суток при по мощи аэрации в питательной среде, со пержащей источник угперодгэ, азота и фосфора, Опновременно сравнивают выход биомассы с выращиванием микроорганизмов в контрольной среде, содержащей диметипсупьфоксид. Выход биомассы в контрольной среде с диметипсупьфоксидом во всех примерах принят за 1ОО%. Пример 1. Проводипась инкубация культуры Pseudovnonas E.uorescens 31О при 28 С в течение 5 суток на качалках (1ОО об./мин) в питательной среде спепующего состава: К НРОд-ЗН О .0,05%, Mg-SO -THgO О,003%, янтарная ..кислота О,1%, гпиперин 0,4%, смесь микроэлементов 1 мл/п {Н,ВО О,5%, NH МО 0 0,5%, 7 0,О4%, MhSqj -4 0,6%,CU90 5H20 |0,ОО4%; COSO4 ,0,5%), , дрожжевой автолизат 0,001%, { НН)ЗО ОД%, ТеСВд -б О,ООО1%, пирофосфорнокиспый натрий гидрат О,1%. рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: KgHPQ XT 3H.jO 0,05%, 0,003%,ян тарная кислота 0,1%, глицерин 0,4%, смесь микроэлементов 1 мл/п, прожжевой автолизат О,О01%, (NH4)2 ,1% 0,0001%, диметипсупьфок сид 1ОО рр1 . рН среды 7,2-7,3. Эффект стимуляции пирофосфорнокислого натрия гидрата на рост Рз-fCuoi es сепзна 3 сутки 186% (0,80 г/л), что больше биомассы в контрольной среде (0,43 г/л), а на 4 сутки - 125% (1,60 г/л). Г1 р и м е р 2. Проводилась инкубация Pseudomonas fEuorescens 31О при 28 С в течение 5 суток на качалка (100 об./мин) в питательной среде следующего состава: Kg . 3 Н20 О,05%, M Sqj-7 0,003%, янтарная кислота 0,1%, глицерин 0,4%, смесь мик роэлементов 1 мп/п, дрожжевой автопизат 0,001%, ( NH4) 0,1% .fece HgO 0,., пирофосфорнокислый натрий гидрат О,2%. рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: К2НРО4 0,05%, МдзОд- О,ООЗ%, янтарная кислота 0,1%, глицерин 0,4, смесь микроэлементов 1 .мл/л, дрожжевой автолизат 0,ОО1%, (NH. ))j 0,1%, Fece,,- 6HgO 0,001%, диметйлсульфоксид 1ОО p.p. mПрирост биомассы Ps.f6uorescens3iO в среде с пирофосфорнокислым натрием гидратом на 3 сутки 0,79 г/л, что на 183,7% больше биомассы в контрольной среде (0,43 г/л), а на 4 сутки 12О% (1,53 г/л). П р и м е р 3. Проводилась инкубация Pseudomonas feuprescens 31О при 28 С в течение 5 суток на качалках (100 обУмин) в питательной среде следующего состава: HgO 0,О5%, ЛЛ§-504 7 Н,0 0,003%, янтарная кислота О, l%j глицерин 0,4°о, смесь микроэлементов 1 мп/п, дрожжевой автолизат 0,001%, (N44)2504 о,1%,РесезН20 О,ООО1%, пирс фосфорнокислый натрий гидрат О,1%. рН среды 7,2-7,3. Сосгав контрольной среды: КМРОл 0,05%,М§гЗОд -7 0,ООЗ%, янтарная кис/юта О,1%, глицерин 0,4%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автолизат 0,ОО1%, (04 0,1%, 0,0001%, диметилсульфоксид 1ОО p.p.tn Прирост биомассы Ps.f6uore$cens310 в ореаде с пирофосфорнокислым натрием гидратом на 3 сутки 0,49 г/л, что на 116% больше биомассы в контрольной среде (0,43 г/п), а на 4 сутки 112% 1,43 г/л). П р и м е р 4. Проводилась инкубация AA cofeacteriunn eacticoEuw при 28 С в течение 5 суток на качалках (1ОО об./мин) в питательной среде следующего состава: 3 0,05%, M SO4-7 Н20 О,ООЗ%, янтарная кислота 0,1%, глицерин 0,4%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автопизат 0,001%, ( NH4).504 О,1%, Fe Сг5-Н20 О,ОО01%. рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: K2HPQ| « О,О5%,Мд-5О4-7Н2О О,ООЗ%, янтарная кислота 0,1%, глицерин О,4%, смесь микроэлементов 1 мл/п, дрожжевой автошзат 0,OOl%V(NH4)oS04 0,1%, FeC«j 6 HjO Q,QOO1%, диметилсульфоксвд 100 p.p.m . рН среды .7,3. Эффект стимуляции пирофосфорнокиспого натрия гидрата на рост M.CoiCtiCoKuiTl на 2 сутки 2ОО% (1,4О г/п), а на 3 сутки 120;., (1,(;5 г/п) по сравнению с контропыюй срецой. Г р и м е р 5. Провопипась инкубация BociEEus subtiEig ijpH в течение 5 суток на качалках ( 100 об./ми в питательной среде следующего состава: Н2О 0,О5%, Mg-SO - О,ООЗ%, янтарная кислота 0,1%, гпииерин О,4% смесь микроэлементов 1 мл/п, дрожжевой автопизат 0,201%, ( NH4 )/,SO 0,1%, FecSj о,ооо1%, рН среаы 7,2-7,3. Состав контрольной среды: , X 3 Н2О 0,05%, Mg-SO -7H20 О,ООЗ%, янтарная кислота 0,1%, глицерин 0,4%, смесь микроэлементов 1 мл/л, арожжевой автолизат 0,001%, .(NH)2 SO 0,1%, Fe Сез 6Н2О 0,OOOl%, аиметилсульфоксид 100 p.p.m.pH среды 7,27,3. Эффект стимуляции пирофосфорнокиспого натрия гидрата на рост B-SubtiCis на 12О,4% (0,53 г/л) больше количества биомассы в контрольной среде (0,44 г/л), а на 5 сутки 119% (0,76 г/п). П р и м е р 6. Проводилась инкубация FEavobactenum suoveotensripH 28 С в течение 24 ч на качалках (1ОО об./мин) в питательной среде следующего состава: К2НРО ЗН О О,059о, MgSO 7 HgO О,ООЗ%, сахароза 6%, пептон 1%, civJecb микроэлеменгов 1 мл/ дрожжевой авголизаг 0,О01%, ( )230 0,1%, Fece3 -eHgO 0,0001%, пирофосп 10Л Сррр- .«н п п nnni4i r,,,r f форнокислый ;натрий гидрат 0,01%. рН ср ды 7,2-7,3. Состав контрольной среды : К2НРОл «3 0,05%, ТНйО О,ООЗ%, сахароза 6%, пептон 1%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автолизат 0,ОО1%, (МНд) 504 0,1%, ® HjO 0,001%, диметилсульфоксид 50О p.p.w. рН среды 7,2-7,3. Эффект стимуляции пирофосфорнокисло- го натрия гидрата на рост F.SuoveoEens на 11 ч О,6О г/л, что на 162,1% превышает прирост биомассы в контрольной среде (0,37 г/л), а через 18 ч 1,13г/л (). П р и м е р 7. Проводилась инкубация Pseudomonas fGuorescens 31O при 28 С в течение 24 ч на качалках ( ЮО об./мин) в питательной среде следующего состава: К2НРО4 ЗН,,0 О,О5%, gSO4-7 0,ОООЗ%, сахароза 6%, пептон 1%, смесь микроэлементов -1мп/п дрожжевой автопизат О,ОО1%, ()2 SO О,1%, О,ОО01%, пирофос- -- - - -...„„.„, форнокисльтй натрий гидрат О,1%. рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: К2НРрф-31 2 0,05%, §-5047 0,ООЗ%, сахароза , пептон 1%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автслизат 0,О01%, {КН4)г304 0,1%, FecBj- Н/) О,ООО1%, диметилсульфоксиа 500 pip.т. рИ срецы 7,2-7,3. Эффект стимуляции пирофосфорнокислого натрия гидрата на рост Ps-f CuorSSCens 31О на 14 ч 112,7% (0,71 г/л) по сравнению с контрольной средой(О,63г/л), а на 18 ч 125% (1,50 г/л). Пример 8. Проводилась инкубация bac-iCEus SubtiEis при 28 С в те чение 26 ч на качалках (ЮО об./мин)в Питательной среде следующего состава: К2НР04-ЗН2О О,О5%, 7 0,ОООЗ%, сусло (,O28) 25 об.%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автолизат 0,001%, (NH4)2S04 0,1%, 6Н20 0,0001%, пирофосфорнокислый натрий гидрат О,1%. рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: К НРСХЗН О O,05%,MgS04 -7 HgO О.ООЗ, сусло (d 1,028) 25 об.%, смесь микроэлементов 1 мл/п, дрожжевой автолиэат o,ooi(NH4)2 304. 0,1%, О,ОО01%, диметилсульфоксид 500 p.p. hiP среды 7,2-7,3. Эффект, стимуляции пирофосфорнокислого натрия .гидрата на рост B-SubtiCis на 12 ч 133% (1,57 г/п) по сравнению с контрольной средой (1,18 г/л), а на 15 ч 12О% (1,63 г/л). р У. Проводилась инкубаПримеция M cobacterium EacticotutnnpH в течение 26 ч на качалках (ЮО об./мин) в питательной среде следующего состава: КзНРО -ЗН О 0,05%, Mg50 -7H20 0,ООЗ%; сусло ( d 1,О28) 25 об.%, смесь микроэлементов 1 мл/л, дрожжевой автолизат О,ОО1%, ( N Н4)2 3040,%, FeCtaj 6Н2О 0,0001%, пирофосфорнокислый натрий гидрат О,1%.рН среды 7,2-7,3. Состав контрольной среды: К2НРО.ЗН2О 0,O5%,MgS047H20 0,ООЗ%, сусло (d - 1,О28) 25 об.%, смесь микроэлементов 1 мл/а, дрожжевой автолизат 0,О01%, ( NH4 )2(4 ОД%. Hj,O 0,0001%, диметилсульф оксид 500 p.p.w . рН среды 7,2-7,3. Эффект стимуляции пирофосфорцокнспо го натрия гидрата на рост M-C-CfctiCoEuw на 15 ч 144,2% (0,88 г/п) по сравнению с контропы-юй средой (0,71 r/ri), а на 26 ч 104% (1,70 г/п). Пример 10. Проводилась инкубация Asperg-i&Eus nigrer при 28 с в течение 9 суток на качапках (10О об./мин) в питатепьной среде спедующего состава: K HFD jSHg OO, 1% 0,О5%; КСе О,050%, янтарная киспота О,1%; смесь микроэпементов 1 мп/п, гпицерин 3 мп/п; FeS04 0,001%;( NH )2 SO 0,1%; (см. в примере 6); пирофосфорнокиспый натрий гинрат О,1%. рН среды 4,5-5,0. Состав контрольной среды: KgHPO -SHgO 0,1%; Mg-gO4 7Н2О 0,05%| КСе О,О5% Fes04 0,001%; (НЕ)0 0,1%; янтарная кислота 0,1%; гпицерин 3 мп/п; смесь микроэпементов 1 мп/п, диметипсупьфоксиц 5ОО p.p. m .рН среды 4,55,0. Эффект стимуляции пирофосфорнокиспо .го натрия гидрата на рост А. higher на 5 сутки 1,18 г/п, что на 215% бопьше количества биомассы А- nigfei в контр ной среде (0,55 г/п), а на 9 сутки 106 (1,75 г/п). П р и м е р, 11. Проводилась инкубация Actinowifceies-aureofaciens при28 С Б течение 5 суток на качапках (1ОО об./мин) в питатепьной среде спедукяцего состава: магиьтоза 3%, NOC6 0,25%, ( NH4)2SO4 О,2О%, КН2РО4 0,05%, СаСО 0,1%, меласса 0,5%, кукурузный экстракт 0,5%, смесь микро элементов 1 мп/п, дрожжевой автолизат О,О1%, пирофосфорнокислый натрий гидрат 0,1%. рН среды 6,8-7,8. Состап коктропьной среды: мальтоза У..., NaCe 0,25%, (NH4)2S04 0,2%, K}i2PO O,O5%,,l%, меласса О,5% кукурузный экстракт 0,5%, смесь микроэпементоп . мп/п, дрожжевой авголизат 0,01%, диметипсупьфоксиц 5ОО p.p. m , рМ среды 6,8-7,0. Эффект сти упяции пирофссфорнокис- (ТОГО натрия гидрата на pocrAcJureofcjciens на 2 сутки 1,84 г/л, что на 121% превышает прирост биомассы в контрольной среае (1,52 г/л), а через 3 сутки 2,29 г/л (125,8%) Пример 12. Проводилась инкубация А. nigfe г при 28 С в течение 7 суток на качалках (100 об./мин) в питатепьной среде следующего состава; сахароза 7%, кукурузный экстракт 0,5%, К2НР04-ЗН20 0,1%, 0,05%, ксео,о5%, 0,001%, ()230д 0,1%, смесь микроэлементов 1 мп/п, пирофосфорнокислый натрий гидрат 0,1%. рН среды 4,5-5,0. Состав контрольной среды: сахароза 0,7%, кукурузный экстракт 0,5%, К2НР04-ЗН20 0,1%, М 5047НдО О,О5%, кое 0,05%, Feso4 0,001%, (NN4)2504 0,1%, смесь микроэлементов 1 МП/л, диметилсульфоксид 5ОО p.p. W. рН среды 4,5-5,6. Эффект стимуляции пирофосфорнокислого натрия гидрата на рост A.hlger на 6 сууки 9,03 г/л, что на 128% больше количества биомассы A. контрольной среде (7,О5 г/л), а на 8 сутки .124,6% (10,68 г/л). Стимулирующий эф4юкт (%) пирофосфорнокислого натрия гидрата по сравнению с диметилсульфоксидом (ЛМСО) на рост микроорганизмов показан в таблице. Формула изобретения 1. Способ выращивания микроорганизмов, преимушественно бактерий; BcsciEEus 5ubtitiS,F c«vot acteHum 3Uoveo6ens,Mvco 1 - . rt.. r.J, bacteriuin 6cicticotum,P9eu«3omor ois fEuorescens 3 lO, грибов Aepergriceus mger. vr, актиномицетов: Actindmscetes сяиrfto Qlciens I в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источник углерода, азота и фосфора в присутствии стимуляторов роста химической природы, отлич аюдийс я тем, что, с целью увеличения в ускорения выхода биомассы, в качестве стиь упятсра используют неорганический пирофосфорнокиспый на1рий гнпрат. 2. Способ по п. 1, отличаюший, . .„ , с я тем, что пирофосфорнокиспый натрий гидрат вводят в питательную срецу в . ,„, Г.ГЧЛГТ-ЧП количестве О,О1-О,2% от ее обьема. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе. 1.Авторское свидетельство СССР hfc 145875, кл. С 12 В 3/14, 1961. 2.Авторское свидетельство СССР № ЗО2361, кп. С 12 В 3/14, 1969. 3.П д-ент США № 3558434, кл. 195-в1, 1971.