Штамм 541-р/47-продуцент глутаминовой кислоты Советский патент 1979 года по МПК C12D13/06 C12K1/02 

Картофелк на помтиках картофеля образует мелкие колонии с желтым пигментом.

Желатину не разжижает.

Отношение к источникам азота.

Использует нитраты, мочевину, соли аммония.

Отношение к источникам углерода: ассимилирует сахарозу, глюкозу, фруктозу, пактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, трегалозу, глицерин,.этаноп, маннит, глуконовую кислоту, лимонную кислоту, янтарную кислоту, салициловую кислоту, уксусную кислоту, крахмал, гидропизаты крахмала.

Ассимилирует биотин, тиамин, тиазолную и пиримидиновую части тиамина, niгиарокси - бензольную кислоту.

1ндол не образует.

Сероводород не образует.

Реакции на уреазу и каталазу поло- жительные.

Состав питательной среды при вьфащивании посевного материала

Штамм выделен из донных сапропелевых огложений озер Латвийской ССР. После выделения готовят суспензию концентрацией 10 бактерий в 1 мл, облучают ее в качающихся чашках Петри. Для облучения используют лампу БУФ-30 доза облучения 1930 эрг/мм в мин, время облучения - 5 мин.

Штамм идантифидирован по определителю:

Bergfeus Маппслб of petei-minoitive Васterfoeog-,Eig--t Edition BoiEtimore.,1974. В дальнейшем изобретение поясняется примером.

Осуществляют выращивание посевного материала в колбах на качалке ипи в малом инокуляторе. Полученный посевной материал (1 стадия) используют для засева посевных ферментеров (2 стадия); содержимое последних -.для засева основных ферментёров.

Таблица

Калий фосфорнокислый . однозамещенный

Капий фосфорнокислый двузамещенный

Меласса, содержащая 200

биотина на .1 кг

Дозировку мелассы осуществляют по содержанию в ней биотина. Концентрация биотина в посевной среде должна соста-, вить 3,О-3,5 мкг/л.

рН среды (7,О-7,2) устанавливается с помсяцью 25%-ной аммиачной воды. Мочевину стерилизуют отдельно под давлением 0,3 атм. 3 раза или иным способом, например фильтрацией.

Стерильный раствор мочевины добавляют к питательной среде после ее стерилизации.

0,1 ОД 2,0

Засев питательной среды в посевных ферментерах производят посевным материаJJJ лом, вьфащенным в колбах на качапке ипи в малом инокуляторе.

Односуточный инокулят дпя засева среды для-выращивания посевного материала должен содержать 5,,0,10® 55 клеток продуцента в 1 мл, что соответствует 6,О-7,0 мг сухой биомассы.

Односуточная культура посевного материала из посевного ферментера содержит 6-8 г сухой биомассы в 1 л среды.

5,3546816

Выращивание посевного материалапродолжительность каждой стадии - 22проводяг при температуре 29-30 С;26 час,

Состав питательной среды при основной ферментации

Компонент

Сахар пищевой или сахар-сырец8,5-9,5

МочевинаС), 8

Магний сернокислый0,О5

Марганец сернокислый0,О1

Цинк сернокислый

Капий фосфорнокислый однозамещенныйОД

Калий фосфорнокислый двузамещенныйО,1

Меласса, содержащая 2ОО мкг биотина на 1 кг1,5

В начале ферментации в среду вводятвспенивания используют нормальные ал5О% от общего количества сахара и мо-.каны (С, 24 количестве О,О2-

чевины; оставшиеся 509& используютсяО,О8% от объема питательной среды

ппя дробной подкормки в течение всейили другой пеногаситель. .

ферментации. Интенсивный биосинтез глутаминовой

рН среды - 6,8 ... 7,8кислоты начинается на 18-2О час ферПосевной материал вводят в копичест-у. ментации и продолжается 68-70 час.

ве 5-6% от объема среды.В конце ферментации культурапьный

Температура ферментации 29-ЗО С.раствор содержит 6О г/л гпутаминовой

Во время ферментации поддерживаюткислоты. рН в пределах 6,8-7,8 путем добавления

стерильного раствора 4р%-ной мочевнкы.jj Вьщепёние глутаминовой кислоты или

Через 10-12 час основной ферментации гпутамата натрия осуществляют одним из

в среду вводит дилудин в количестве 8О-известных способов, например, путем

1ОО мг/п, а через 18-2О час - тиаминпрямой кристаллизации из осветленных

в количестве 10О-150 мкг/л или его .упаренных растворов или путем сорбции

пиримидиновую часть. Для ограничения на ионообменных смолах.

Ативность биосинтеза L-глутаминовой кислоты штаммом Copvnebacterium grButafnic.Um 541-Р/47 на различных средах

Сырье Сахар пищевой Глюкоза Гидролизат крахмала Исходная культура в тех же условиях образует U -глутаминовую кислоту в среднем до 35 г/л, в то время как предТаблица2

Количество, % вес.

ТаблицаЗ

Выход

-глутаминовой кислоты, г/л.

средние данные 6О О 45 О 45,0 лагаемый штамм Corsnebacterium geutamicum541 P/47 дает выход ка i3O-6O% выше. Формула изобретения Штамм Cori)nebacierium g-Cu-totmicum 541-Р/47- продуцент L-гпутаминовой киспоты. Хранится в коппекции института микробиопогии имени А. Кирхенштей АН Латвийской ССР. Морфологические признаки. Кпетки мелкие, короткие палочки, неподвижные. Скоплений не образует. Размер клеток (0,5-0,8)х( 1,0-1,5) мк, клетки грамположительньг. Мясо-пептонный агар. Колонии вьтутслые в центре, непрозрачные, края ровные поверхность гладкая, блестящая, яркожелтые. Рост при посеве уколом в столбиках агара вблизи поверхности. На жидких мясо-пептонных средах поверхностную пленку не образует. Мутность равномерная, образует осадок. Физиологические признаки. . Картофель; на ломтиках картофеля образует мелкие колонии с желтым пигментом. Желатину не разжижает. Отношение к источникам азота. Использует нитраты, мочевину, соли аммония. Отношение к источникам углерода. Ассимилирует сахарозу, глюкозу, фруктозу, пактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, трегалозу, глицерин, этанол, маннит, глуконовую кислоту, лимонную кислоту, янтарную кислоту, салициловую кислоту, уксусную кислоту, крахмал, гидролиааты крахмала. Ассимилирует биотин, тиамин, тиазольную и пиримидиновую части тиамина, ГП-гидрокси-бензольную кислоту. Индол не .образует. Сероводород не образует. Реакции на уреазу и каталазу положительные. Отношение к кислоорду: аэроб, максимум роста при 29-ЗО С, рН - 6,8-7,8. Предлагаемый штамм дает выход кислоты на 30-60% выше, чем известный. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1..Авторское свидетельство СССР № 328164 кл. С 12 D 13/О6, 197О. 2. Микробиологический синтез № 6, 1965.