Изобретение относится к области почвенной микробиологии и энзимологии, в частности к способу подготовки образца почвы для определения активности внеклеточных ферментов - нитратредуктаз и нитритредуктаз, например, колориметрическим методом. Известен способ определения активности почвенных -ни1ратредуктаз и нитритредуктаз I. Однако извесхный способ, предусматривающий исполь зование глюкозы в качестве донатора электронов, не позволяет выявить активность внеклеточных нитратредуктаз и нитритредуктаз почвы. К другим недостаткам этого способа относятся длительность анализа и невоспроизводимость его для образцов почв с pasHbUvOi свойствами. Цель изобретения заключается в разработке удобного и быстрого спосо ба подготовки образцов почвы для определения активности нитратредуктаз и нитритредуктаз, функционирующих вне клеток микроорганизмов, с учетом особенностей почв. Поставленная цель достигается использованием гидросульфита щелоч. ноге металла в качестве донатора электронов для активации ферментов. фосфатного буфера и насыщенного раствора бикарбоната натрия для поддержания рН в интервале 7,8-8,4. установлено, что дерновоподзолкстая почза не стимулирует химическую активность, гидросульфита при определении нитратредуктазной и нит-. ритредуктазной активности данной почвы, поэтому можно проводить анализ в отсутствии ингибиторов нитритредуктазы и нитратредуктазы. В случае анализа почв другого ти.па следует использовать в качестве ингибиторов насыщенный раствор фтористого натрия или сулему в концейтрации 5,5- Ю ммоль на 1 г почвы. Пример .В коническую колбу емкостью 50 к-ш помещают 1 г растертой и пропущенной через сито с отверстиями 0,25 мм воздушно-сухой целинной дерново-подзолистой почвь} и навеску ги,цросульфита натрия 5060 мг при определении нитратредуктазы и 40 мг при определении нитритредуктазы) . Добавлянзт I мл 1/6 М фосфатного буфера с оптимальным значением рН и несколько капель насыщенного раствора NaHCO для создания рН 7,75-8,35, К почвенной суспензии добавляю-г I мл 1%-ного раствора KNO ИЛИ 1 мл 0,4%-ного раствора NaNO и 2 мл дистиллированной воды. В контрольные колбы такого же объема добав ляют все компоненты опытной смеси, кроме почвй. Кроме того, параллельно в другие контрольные колбы такого же объема вносят эквивалентную опытным Образцом навеску почвы, фосфатный буфер и компенсирующее количество дистиллированной воды вместо остальных реактивов. Затем колбы помещают в анаэростат или в вакуум-эксикатор и выдерживают в анаэробных условиях при 25 мин. По окончании экспозиции устанавливают содержание нитратов или нитритов во всех колбах. Для этого содержимое колб фильтруют через двойно фильтр с синей лентой в мерные колбы емкостью 100 мл. После многократного промывания почвы на фильтре дистиллированной во дой фильтрат доводят до метки дистиллированной водой. Содержимое конт рольных колб обрабатывают таким же образом. Количество нитратов в фильт ратах определяют колориметрическим методом с помощью ФЭК-Н-57 при 453 нм по методике . Грандваля и Ляжу количество нитритов устанавливают по методу Илосвея-Гриссу также с помощ ю ФЭК-Н-57 при 536 нм (расчет осуществляют по калибровочной кривой). Активность фермента определяют по разнице между количеством нитрато или нитритов в контрольных: колбах (сумма азота этих соединений в исход ной почве и контроле реактивов) и их содержанием в опытных почвенных образцах и выражают в мг восстановленного азота нитратов или нитритов на 100 г почвы. Для того, чтобы исключить влияние почвенных ингредиентов на величину активности внеклеточных ферментов, следует в контрольные образцы вводить в качестве ингибиторов нитратредуктаз и нитритредуктаз соответственно насыщенный раствор фтористого натрия или солему в концентрации 5,510 ммоль на 1 г почвы. Формула изобретения Способ подготовки образца почвы для определения активности внеклеточных нитратредуктаз и нитритредуктаз, например, колориметрическим методом, отличающийся тем, что, с целью более полной оценки азотного режима почв, в образец почвы вводят донатор электронов - гидросульфит щелочного металла, -акцептор электронов - нитрат или нитрит щелочного металла и выдерживают смесь при 20-25с в анаэробных условиях при рН 7,8-8,4 в течение 15-60 мин. Источники информации, принятые во Ьнимание при экспертизе 1. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Ереван, Айстан, 1974, с. 19-21.
