Способ получения инфекционного материала Советский патент 1979 года по МПК C12K1/00 

1

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и фитопатологии. Оно может быть использовано для получения инфекционного материала фитопатогенных грибов с целью искусственного заражения сельскохозяйственных растений для получения высокоустойчивых сортов путем создания инфекционного фона.

Известен способ получения инфекционного материала грибов на твердом субстрате 1.

Известен также способ получения инфекционного материала фитопатогенных грибов выращиванием их на зерновом материале 2.

Однако ряд грибов, в том числе Thielaviopsis, почти не дают роста на зерновом материале (усваиваются лишь имеющиеся в небольшом количестве простые сахара и аминокислоты, а полисахариды и белки зерна не усваиваются).

Целью изобретения является производственный способ получения инфекционного материала, не требующий отделения био.массы от субстрата, обеспечивающий сохранение жизнеспособности материала и его вирулентности в течение длительного периода времени, повышающий выход эндоконидий и хламидоспор.

Поставленная цель достигается тем, что гриб Thielaviopsis basicola выращивают на пшене, пропитанном в соотношении 1 : 1 раствором, содержащим ферментативные гидролизаты казеина, дрожжей и/или крови в количестве 100-150 мг % аминного азота и дрожжевой экстракт в количестве 0,05- 0,1% к весу пшена.

Питательной средой могут служить: 1) смесь картофельного отвара и белкового гидролизата, например, гидролизата крови - аминопептида - при следующем соотношении компонентов:

Пшено0,9-1,1 кг

Картофельный отвар

(200 г/л)750-850 мл

Аминопептид190-210 мл

2) смесь дрожжевого экстракта и белкового гидролизата, например аминопептида при соотношении компонентов:

Пшено0,9-1,1 кг

Дрожжевой экстракт0,9-1,1 г

Аминопептид190-210 мл

Вода дистиллированная 750-850 мл Пример. 1 кг пшена заливают 200 мл аминопептида и 800 мл картофельного отвара (200 г/л), либо 200 мл аминопептида и 1 г дрожжевого экстракта в 800 мл воды и кипятят в закрытом сосуде на слабом огн

в течение 15-20 мин до полного поглощения жидкости пшеном. После этого пшено рассыпают в кюветы, охлаждают, разминают образовавшиеся комки и помещают в стерильные сосуды, предназначенные для выращивания - колбы, бутыли. Сосуды заполняют пшеном на 30-40% объема и закрывают ватными пробками или тампонами. Стерилизуют при 1,2 ати в течение 45 мин. Стерильный субстрат равномерно инокулируют (из расчета 200 мл на 1 кг пшена) 24-36-часовой вегетативной культурой гриба, полученной глубинным методом на смеси картофельного отвара (либо дрожжевого экстракта) н аминонептида, взятых в той же пропорции, что и для импрегнирования зерна.

Культуру Thielaviopsis вырашивают при 24-36°С в течение 10 суток нри перемешивании встряхиванием в первые трое суток. После завершения выращивания культуру гриба вместе с пшеном сущат одним из известных способов, а нри тепловой сушке - нри температуре не выше 40°С, растирают комочки. Жизнеспособность полученного препарата определяют проращиванием на картофельно-глюкозном агаре.

Препарат, полученный описанным способом, обладает высокой вирулентностью по

отношению к растениям при длительном хранении (сухого препарата) в обычных условиях.

Формула изобретения

Способ получения инфекционного материала Thielaviopsis basicola, включающий выращивание гриба на твердых питательных средах, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода эндощнидий и хламидоснор, а также повышения вирулентности нренарата, гриб выращивает на пшене, пропитанном в соотношении 1 : 1 раствором, содержащим ферментативные гидролизаты казеина, дрожжей и/или крови в количестве 100-150 мг % аминного азота и дрожжевой экстракт в количестве 0,05- 0,1% к весу пшена.

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

1.Калунянц К. А. и др. Ферменты, получение и применение в народном хозяйстве. Труды ВНИИсинтезбелок, вып. 1. М., 1972,

с. 270.

2.Мирзаев М. Н. Роль почвенной микрофлоры в токсикозе винограда, пораженного филлоксерой. Автореф. канд. дисс. М., 1973, с. 5.