Способ получения 7L-oR -эстрадиолов Советский патент 1981 года по МПК C07J11/00 A61K31/565 

ридбв или хлорангидридов кислот в . прибутствии катализаторов. Ц левце

Лр(5Яук Ы вйреляют и очищают известными методами. .

Пример 1. Микробиологическре7 об-гйдрОксилирование.

Колбу Эрленмейера емкостью 2л, 5 содержащую 500 мл стерилизованного в т ечение 30 мин при 120 С в автоклаве питательного раствора содержащего, %: глюкоза 3; Corn steep 1 j; NaNO3 0,2, KH2POj 0,1; 0,2, О MgSO 0,05; FeS04 0,002, и KCl 0,05, засевают лиофильной культурой biplodia hatalensis (ATCC 9055) и встряхивают 72 ч при на ротационном аппарате для встряхивания. Этой пред- 15 варительной культурой затемзасевают ферментер емкостью 20 л, который заполнен 15 л стерилизованной при и давлении 1,1 атм. Среды того жесостава,.что и предварительная 20 культура.

При добавке силикона SH в качестве противовспенивателя гермийируют при , при аэрации 10 л/мин, давлении 0,7 атм и перемешивании . -, 220 об/мин в течение 24 ч 1 л,бульона культуры при стерильных условиях переносят в 14 л стерилизованной

как и выше питательной среды такого жесостава и выращивают при таких же словиях. Спустя 12ч добавляют ста- 30 ильно профильтрованный раствор; из 3 г этинилэстрадиола в 100 мл диме- илсульфоксида.

За протеканием превращения следят

утчем анализа с , помощью тонкослойной 35 роматографии метилизрбутилкетоновых кстрактов проб ферментера. После полного превращения (45 ч времени онтактирования) содержимое ферменерадвукратно перемешивают с мети- 40 лизобутилкетрном,беря каждый раз по 10 л, и экстракт выпаривают в вакуме при температуре бани .

Остаток Для удаления противовспенивателя растворяют в метаноле. СиггйкЬновое масло. отделяют в делительной воронке, затем раствор фильтруют через складчатый фильтр и снрва выпа зивают досуха. Остающийся

Продукт теперь растворяют в хлористом метилене и для очистки зфомато- граграфируют через колонку с силикагелем с помощью градиента растворителей метиленхлорид/ацетон. После кристаллизации из уксусного эфира чистый 17с -этинил-1 3,5/10/-эстра- 55 триен-3,7с, 17 -триол белого цвета плавится при 234-235 С (разложение) . С, (МОП вес 312,4).

Пример 2. 500 мг 17 -этинил-1,3,5/10/-эстратриен-3,7 о, Q 17р -триола растворяют в 10 мл пиридина, добавляют 0,5 /ЙгГ ГцеГайТадрййа й перемешивают в течение 20 минпри

ОХлажДеиии льдом. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажден-ной 8%-ной

серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной р.еакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый З-ацетокси-17 с -эткгтл- ,3,5/10/эстратриен-7 о, 17Р -диол с т.пл.133135°С, 17 о/-этинил-1,3,5/10/-эстратриен-3,7с(, 17В-триола с т.пл.230 232СС.

Пример 3. Раствор 100 мг 17а -этинил-1,3,5/10/-эстратриен 3,7d , 17р -триола в 5 мл уксусного эфира при комнатной температуре смешивают последовательно с .1 мл уксусного ангидрида и 1 каплей хлорной кислоты (70%-ной). Спустя 3 мин добавляют 1 каплю .пиридина, промывают насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают. Получают 78 мг 3,7 сс, 17/3-триацетокси17 о6-этинил-1, 3,5-/10/-эстратриена в виде аморфного вещества.УФ-спектр (метанол): -2 f9760; 2б-) 6267-715; е274--б96.

Пример4. К раствору 150 мг 17с/ -этинил-1, 3,5/10/-эстратриен3,7aLf 17-| -триола в 3 мл Пиридина добавляют 1 мл уксусного ангидрида и оставляют на 16 ч при комнатной температуре.. Композицию при добавке циклогексана или СС1д выпаривают досуха. Остаток растворяют в уксусном эфире и промывают водой. Послевысушивания и выпаривания получают 120 мл сырого продукта, который очищают с помощью тонкослойной хроматографии. Получают 110 мг 3,7оС-диацеТОкси-17 об этинил-, 3,5/10/-эстратриен-17 -ола, т.пл. 165-16бС.

П р и м е р 5. 200 мг 17о;--этинил-1, 3,5/10/-эстратриен-3,7 , 17fb -триола растворяют в 3 мл мета-, нола и 1 мл циклопентилбромида при нагрювании, затемдобавляют 200 мг карбоната калия.и кицятят в течение 12 ч в атмосфере азота. После этого смесь вносят в уксуснокислую ледяную воду и экстрагируют хлористым метиленом. Органическую фазу промывают до нейтральной реакции, сушат и выпаривают . Сырой продукт (150 мг) очищают с помощью тонкослой.ной -хроматографии, получают 100 мг 17о этинил-3-циклопёнт иЛоКси-1, 3,5/10/эстратриен-7о6 , 17Р.-диола. Т.пл.126,12.8 С.

П р и м е р 6. Раствор 350 мг llyiэтинил-З-циклопентилокси-1,3,5/10/эстратриён-7о. , 17/ -диола в 5 мл уксусного эфира смешивают с 1 мл уксусного ангидрида и 1 каплей хЛорной кислоты (70%-ной) и перемешивают 3 мин при комнатной температуре. Затем добавл.яют 0,5 мл пиридина, про.ivuaBaroT .насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают. Получают 310 мг 7оС, 17р -диацетокси17 oL-этинил-3-циклопентилокси-1,3,

5/10/-эстратриена в виде аморфного вещества. УФ-спектр (метанол); z2.2 9060; 277-8 7 30; 2: 1920; .

П р и м е р 7. 500 мл 17о -этини1, 3,.5/10/-эстратриен-3, 70/ , 1 7 /3 триола растворяют в 10 мл пиридина добавляют 1 мл ангидрида масляной кислоты и перемешивают .60 мин при комнатной температуре. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажденной 8%-ной серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной реакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый 3-бутилокси-17а-. , этинил-1, 3 , 5/10/-эстратриен-7 , 17р-диол с т.пл. 130-l3lc. .

Примере. 500 мг 17о.-этинил-1,3,5/10/-эстратриен-3,7оС, 17р-триола растворяют в 10 мл пиридина, добавляют 3 мл масляного ангидрида и перемешивают 72 ч при комнатной температуре. Затем раствор .примешивают в 100 мл охлажденной 8%-ной серной кислоты и выпавший осдок промывают до нейтральной реакции. Для дальнейшей очистки продукт хроматографируют через колонну с силикагёлем и перекристаллизуют из смеси эфир/гексан. Чистый 3, IcL -дибутирилокси-17о/- -этинил-1,3,5/10/эстратриен-17fc-ол плавится при 132,5-133С.

ПримерЭ. К раствору из 450 мг 3-ацетокси 17о -этинил-1, 3,5/10/-эстратриен-7 сУ-, 17 уЗ-диола в 30 мл абсолютного бензола при комнатной температуре добавляют 7 мл триэтиламина и при интенсивном перемешивании 1,4 мл хлорангидрида изопропилсульфокислоты и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Затем смесь выливают на лед и экстрагируют вещество эфиром. Эфирную фазу промывают, высушивают и выпаривают и сырой продукт очищают с помощью градиентной сройатографии., Получают 250 мг 17 о -этинил-З-ацетокси-7 о -изопропилсульфояилокси-1, 3,5/10/-эстратриен-17 .

Примерю. Раствор 350 мг 17 -этинил-1, 3,5/10/-эстратриен3,7оС, 17 -триола в 35 мл абсолютнго бензола смешивают с 5 мл триэтиламина при комнатной температуре, при интенсивном перемешивании, и с 2 мл хлорангидрида изопропилсульфоксилоты. Оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение 38 ч, затем выливают на лед и экстргируют эфиром. Эфирную фазу промывают водой, высушивают и выпаривают . Сырой продукт очищают с помощью градиентной хроматографии, получают 125 мг . эти«ил-3, 7а -бисизопропилсу.льфонилокси-1, 3,5/10/эстратриен-17А-ола.

П р и м е р 11. а) Раствор 350 мг 3, 7 о/ -диацетокси-17oZ-этинил-1, 3, 5/10/-эстратриен-17ft-ола в 20 мл абсолютного бензола смешивают с 20 мг п/толуолсульфокислоты и 1 мл дигидропирана. Перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, разбавляют эфиром, промывают до нейтральной реакции раствором бикарбоната натрий и водой и выпаривают. Получают 300 мг 3, 7о 1-диацетокси17о --этинил-17/3 -тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/-эстратриена.

б)250 мг 3, 7oi,-диaцeтoкcи-17ol этинил-17/ -тетрагидропиранилокси1,3,5/10/-эстраТриена растворяют в 10 мл метанола, добавляют раствор 200 мг карбоната калия в 2 мл воды и кипятят в атмосфере азота 1,5 ч. Затем смесь ВЕлливают в ледяную воду и органическое, вещество экстрагируют эфиром. После промы вки водой, выг сушивания и выпаривания получают 180 мг 17 о6-этинил-17/J-тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/-эстратриен3, 7 oL-этинил.

в)К раствору из 230 мг 17 « -этинил-17 / -тетрагидропиранилокси-1, 3,5/10/-э.стратриен-3, 7о -диола в

5 Мл пиридина при охлаВДении льдом и в Атмосфере азота добавляют 0,5 мл меТансульфокисло.ты и перемешивают в течение 38 ч примерно при 4С в атмосфере азота. Затем все выливают в ледяную воду, отфильтровывают осадок и растворяют его в. хлористом метилене. После промывки водой, высушивания и выпаривания получают 200 мг 17о.-йтинил-3, 7of- бис-мезилокси-17 тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/эстратриена в виде сырого, продукта, который без последующей очистки применяется далее.

П р и м е р 12. Раствор 200 мг 17о -этинил-3,Id-- бис-мезилокси-17 тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/эстратриена в 5 мл метанола смеши- вают с 500 мг щавелевой кислоты, растворенными в 2 мл воды, и кипятят 1/2 ч. Затем смесь вносят в ледяную воду и органическое вещество эстрагируют хлористым метиленом. После промывки водой, высушивания и выпаривания получают 17 oi-этинил-З, 70 -бисмезилокси-1,3,5/10/-эстратриен-17 f ол.

П р и м е р 13. 3 г этинил.эстрадиол инкубируют аналогично примеру 1 absidia orchides /АТСС8990/ aspergillus luchu- /CBS/ ensis

Rhizopus nigricans /ATCC 62260/ Pellicularia bilamentosa/ATCC/13289/

Phizopus oryzal /ATCC4858/ Rhizopus kazanensis /ATCC 8998/ Rhizopus cohuu /ATCC 8998/

или

Rhizopus stoloniber

/ATCC 10404/ После 45 ч времени контактирования содержимое ферментера дважды обрабатывают по 10 л метилизобутилкетона и экстракт упаривают в вакууме на водяной бане при ее температуре Остаток очищают аналогично примет ру 1 и перекристаллизовывают. Получают 17о -эГинил-1, 3,5/10/ эстратриен-3, 7oi , 17/3-триола, который идентичен полученному в примере .1 продукту. Формула изобретения 1. Способ получения 7ot-OR2. эстр диолов общей формулы I OBj 4---tisCH водород, алкил, где R. с -Сх-ацильная, циклопентильная или тетраги ропиранильная группа; R2 - Ra одинаковые или различные водород, Cjf -С ацильная или тетрагидро иранильная группа, отлича,ющийся тем, что, .17 о6-этинш1эстрад;иол общей формулы 11 ОН -СнСН где R, имеет указанные значения, фёрментируют грибковой культурой рода absidia orchidis, aspergillus luchu- ensis, Rhizopus niqricans, p ellicularia Filamentoza,Rhizopus dryzal, Rhizopus kazanensis, Rhizopus cohuii, Rhizopus stolonifer или diplodia na- talensis в концентрации 50-500 мг субстрата на 1 л питательной среды.- . при 25-35 с и,в зависимости от необходимого значения R,R,и Rj в конечном продукте этерифицируют одну или несколько гидроксильных групп до простых эфиров или до сложных эфиров с последующим выделением целевых продук-: тов,., . . 2.Способ по п. 1, отлича ющ и и с я тем, что для получения простых эфиров используют циклопентилгалогенид в присутствии основания или дигидропиран в присутствии кислоты. 3.Способ по п. 1, отлича ющ и и с я тем, что для получения сложных эфиров используют ангидриды или хлорангидриды, в присутствии катализаторов .. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Патент США № 3318928, кл. 260-397.5, опублик. 09.05.67. 2.Патент США № 3642992, кл. 424238, опублик. .72. Приоритеты по приказам: 14.10.74при Е2И С -С -ацилостаток карбоновой кислоты. 08.08.75при R2.H R - С -С -ацилостаток сульфокислоты.