Способ получения производных хлорамбуцила (его варианты) Советский патент 1983 года по МПК C07J1/00 

взаимодействию со связующим агентоммонобромуксусной кислотой или монобромацетилбромидом а присутствии органического растворителя, затем моди фицированный эстрадиол или его ацилированное производное подвергают вз имодействию с карбоксилатной группой хлорамбуцила в органическом растворителе с последующим выделением целе вого продукта. Вариант описываемого способа,заключается в том, что хлорамбуцил подвергают взаимодействию по карбоксила ной группе со связующим агентом - мо нобромуксусной кислотой или монобром ацегилбромидом в присутствии органического растворителя, затем модифици рованный хлорамбуцил подвергают взаимодействию с гидроксильной группой в 17 положении эстрадиола или его ац лированного производного в органичес ком растворителе. Палевой продукт вы деляют известным способом. П р и м е р 1. 3 гидрокси-1 ,3,5 (ю -эстратриен-17 р-р-Сп-Сбис (2-хлорэтил) aминoJфeнилJ6yтиpилoкcи3 ацета Получение З-гидрокси-1,3,5 (10)-эс ратриен-17 р,-монобромацетата. 10 г 1 ,3,5(10)-эстратриен-3,17рола растворяют в 400 мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ) и затем добав ляют пиридин (8,8 г). Затем раствор 22,5 г монобромацетилбромида в 7 г четыреххлористого углерода добавляют по каплям к полученному раствору при -5-7с, Смесь поддерживают при этой температуре в течение одной ночи. После реакции полученный осадок отделяют фильтрацией. Растворитель из фильтрата отгоняют. Осадок растворяют в эфире и перекристаллизовывают из эфира с получением 1,3,5 (Т0)-эстратриен-3,1ip -бис(монобромацетата). 2 г продукта растворяют в 900 мл метанола и раствор охлаждают до , К полученному раствору добавляют по каплям раствор 0,2 г углекислого калия в 20 мл воды. После реакции в течение 30 мин добавляют 1000 мл воды и получающийся осадок отделяют и высушивают. Эле ментным анализом и ИК-спектрами подтверждено, что проду стом является 3 -гидрокси-1,3,5(10) -эстрадиён- 17В -монобромацетат. Получекие 3 гидрокси-1,3,5(10-эст ратриен-17р (2-хлорэтил) амино фенилЗбутирилоксиЗацетата,(Сопряженное вещество хлорамбуцил-эст-радиол , 200 мг серебро (2-хлорэтил) аминоЗфенилЗбутирата(серебряная соль хлорамбуцила) добавляют в 10 мл ДМСО с образованием белого коллоидного раствора. Затем 190,8 мг З-гидрокси-1 ,3,5( Ю ; -эстратриен-17jS-монобромацетата добавляют исмесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч в темноте. Осадок меняет свой цвет от желто-зеленого до темно-зеленого при облучении светом. Фильтрат бесцветный и прозрачный. ДМСО отгоняют при пониженном давлении на водяной бане при 80 С и добавляют 100 мл для получения белых кристаллов. Кристаллы отстаивают в течение 1 ч для удаления ДМСО и далее отделяют через фильтр G-t; тщательно промывают дистиллированной водой и сушат при пониженном давлении в эксикаторе. Выход сырого продукта 330,5 мг. Очистка продукта. 330,5 мг полученных кристаллов растворяют в смешанном растворителе из 50 об, ч. циклогексана и 10 об. ч. этилацетата. Раствор медленно пропускают через колонку, наполненную 0 г силикагеля, и продукт постепенно отделяют с получением 188,2 мг чистого продукта (выход 62,86) , Результаты элементного анализа, температура плавления и ИК-спектры продукта следующие. Найдено,: С 66,0; Н 7,0; N 2,3; С1 11,0. . Рассчитано,: С 66,22; Н 6,98; N 2,27; С1 11,52 Т.пл. (полужидкий) 25 С. П р и м е р 2. 3-бензоилокси-1,3,5(10)эстратриен-17р - ( C2-xлopэтил)aминoJфeнилЗбyтиpилoкcи -ацетат. 10 г 1,3,5(10}-эстратриен-3,17р -диола растворяют в 100 мл ТГФ и добавляют 10 MJ водного раствора, содержащего 1,7 гидроокиси натрия. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем реакционную смесь концентрируют сушкой при пониженном давлении на водяной бане при для удаления воды. Остаток растворяют в безводном тетрагидрофуране, к полученному раствору добавляют по каплям 50 мл этилового эфира, содержащего 5,5 г бензоилхпорида, и реакцию проводят при комнатной температуре в течение 16 ч После реакции получающийся хлористый натрий отделяют подходящим методом. Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении. Для .того, чтобы уда лить непрореагировавший бензоилхлорид добавляют 200 мл 0,1н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Получающиеся белые кристаллы отделяют с помощью фильтра G-3 и тщательно промывают дистиллированной водой и высушивают при пониженном давлении в эксикаторе. Продукт анализируют тонкослойной хроматографией на силикагелё со смешанным проявляющим растворителем . {этилацетат и цимлогексан в объемном соотношении 50:30) с получением основного пятна Rf:0,3. о Сырые кристаллы перекристаллизовы вают из этилацетата и получают 8,6 г белых кристаллов. Продуктом является 17р -гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-3-Рензоат согласно температуре плав ления, элементному анализу и ИК-спек 7,0 г полученного продукта раство ряют- в гетрагидрофуране, добавляют 2,0 г пиридина и смесь охлаждают до -5 С. К полученной смеси постепенно по каплям добавляют раствор, содержащий 15,5 г 30 -ного растворамонобромацетилбромида в четыреххлористом углероде в 50 мл тетрагидрофурана. После до бавления смесь перемешивают при в течение 2 ч и затем на ледяной бане ч и хранят в холодильнике 16 ч. Пос ле реакции полученный белый осадок от деляют с помощью фильтра G-t, высушивают при пониженном давлении на водяной бане при 31ТР С, добавляют 200 мл этилового эфира и смесь перемешивают с получением 5,3 г белых кристаллов. Результаты элементного анализа и температуры плавления следующие. Найдено,%: С 6«,3; Н 5,8; Вг 15,7 Рассчитано,I: С 64,23; Н 5,78; Вг 15,8. Т.пл. Т45-1 6®С. 182,3 мг З-бензоилокси-1,3,5(10)-эстратриен-1 7 -монобромацетата и 148,5 мг серебро -4-п-бис(2-хлорэтил7 амино-фенилбутирата добавляют в 5 мл ДМСО и реакцию проводят при комнатной температуре в течение 3 дней в темноте. После реакции осадок бромида серебра отделяют фильтрацией и 400 МЛ воды добавляют к фильтрату. Получающийся белый осадок отделяют центрифугированием. Осадок растворяют в 50 мл ацетона и нерастворенное вещество отделяют фильтрацией через фильтр . Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении с получением 165 мг маслообразного продукта. Продукт реакции хроматографируют на силикагелё со смешанным растворителем (этилацетат и циклогексан в объемном соотношении 10:50) с получением чистого продукта. Очищенный продукт - белое кристаллическое coe инение при 20 С. П р и ,м е р 3. 3 пропионилокси-1,3,5(10)-эстратриен-17р -1 - п-бис(2-хлорэтил)аминоЗфенил бутирилокси) ацетата. 10 г 1,3,5С10)-эстратриен-3,17р-диопа растворяют в 100 мл тетрагидрофурана, добавляют 10 мл водного ра сивора, содержащего 1,7 гидроокиси натрия в 10 мл воды, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин.Проду т реакции концентрируют досуха при пониженном давлении на водяной бане при 80°С для ур,а ления воды. Остаток растворяют в без: водном тетрагидрофуране, раствор, содержащий 3,4 г пропионилхлорида в 50 мл безводного тетрагидрофурана, добавляют по каплям и реакцию проводят при комнатной температуре в течение 16 ч. После реакции осадок хлористого натрия отдаляют, фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении и остаток перекристаллизовывают из этанола с получением 9 г белых кристаллов. Продуктом является 17 | тидрокси-1,3,5{10)-эстратриен-3-пропионат согласно элементному анализу и ИК-спектрам. 7 г продукта растворяют в 70 мл безводного тетрагидрофурана и 3,0 г пиридина добавляют к этому раствору и смесь охлаждают до -5°., К полученной смеси по каплям добавляют раствор, содержащий 17,3 г 30 -ного монобромацетилбромида в четыреххлористо углероде в 50 мл тетрагидрофурана.После добавления смесь поддерживают при в течение 2ч и затем в холодильнике втечение 16 ч для проведения реакции. После реакции полученный осадок отделяют фильтрацией. Фильтрат выпаривают досуха при пониженном 7100 давлении на водяной бане при , затем добавляют 200 мл этилового эфира и смесь перемешивают с полумением 6,0 г белых кристаллов.Фильтрат далее концентрируют с получением 3,5 г белых кристаллов. Кристаллы перекристаллизовывают из смешанного растворителя эфира с этанолом. Результаты элементного анализа следующие. Найдено,: С 61,5; Н 6,5;Вг 17,9 Рассчитано,: С 61,43; Н 6,5; Вг 17,78. Продуктом является 3-пропионилок / чч- п си-1,3,5(10)-эстратриен-17 -монобром ацетат. 1 г продукта и 0,91 г сеоебро . - п-Сбис (2-хлорэтил) амино енил бутирата диспергируют и растроряют в 50 мг ДМСО; реакцию выполняют при комнатной температуре & течение 3 дней в темноте. После реакции осадок бромида серебра отделяют фильтрацией и добавляют А л воды. Осадок отделяют центрифугированием и белый осадок растворяют в 50 мл ацетона, а нерастворимые материалы отделяют фильтрацией через фильтр G.-. Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении с получением 1,3 г маслообразного продукта, j Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан Всоотношении 10:50 по объему для его очистки. Очищенный продукт имеет вязкость- маслообразного продукта при . Результаты элементного анализа и ИК-спектры, Найдено,%: С 67,1; Н 7,0; N С1 11 ,0. Рассчитано,I: С 66,0; Н 6,99; N 2,08; С1 10,56. Пример 4.3-ацетокси-1 ,3,5 (10)-эстратриен-1 7 5 -(г1-бис(2-хлорэтил) амино фенил бутирилокси ацетат. 1,0 г 3-ацетокси-1,3,5(Ю)-эстратриен-17 |Ь монобромацетата, полученного таким же способом, как в примере 2, и 0,9 г серебро (2-хлорг этил) аминоЗфенил бутирата добавляют в 50 мл ДМСО и реакцию проводят при 25 С втечение Здней в темноте.После реакции осадок бромида серебра отделяют и к фильтрату добавляют лводы. Получающийся Белый осадок отделяют цент рифугированием. Осадок растворяют в 50 мл ацетона. Нерастворимое вещество отделяют с помощью фильтра G-A и филы 08 рат выпаривают досуха при пониженной давлении с получением 1 ,2 г маслообразного продукта. Продукт хроматографируют насиликагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексанпри соотношении 10.50 по объему. Очищенный продукт имеет вязкость маслообразного материала при 20 С. Результат элементного анализа следующий. НайденоД: С 66,0; Н 6,9; N 2,0 С) 10,9. . Рассчитано,: С б5, Н 6, N С1 10,79. П р и м е р 5. 1 г 3-ацетокси.Kr-i-iwK. aLii( -1 ,3,5( 1С)-эстратриен-1 7 ,-моноГромацетата и 0,8 г натрий (2-хлорэтил) амино Фенил 1 бути добавляют к 50 мл тетрагидрофурана и проводят реакцию при в течение 2 ч. После реакции осадок отделяют фильтрацией и фильтрат концентрируют и высушивают. Продукт отделяют и очишают с помощью колонки с силикагелем со смешанным растворителем этилацетатциклогексан с получением0,9 г. очищенного продукта.3-ацетокси-1 ,3 ,5 (10)-эстратриен-1 71 -С м-бис -1,3,5(10) -эстратриен-1 71 - м-бис - (2-хлорэтил) -аминоЗ сЬенилЗ бутирилокси J ацетат. П р и м е р 6. З-эцетокси-1 ,3 ,5(10 -эстратриен-17 | (2-хлорэтил)амино Фенил бутирилокси ацетат, , 200 мг серебро (2-хлорэтил) амино фенил J бутирата (серебрян ная соль хлорамбуцила) добавляют в 10 мл ДМСО с образованием белого коллоидного раствора. /Галее 190,8 мг З-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-17р -монобромацетата добавляют к коллоидному раствору и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение .,...-- Осадок меняет цвет до желтовато-зеленого. К осадку добавляют небольшое количество ацетона и осадок отделяют фил|зТрацией через фильтр G-, Фильтрат бесцветный и прозрачный, ДМСО отгоняют на водяной бане при и затем добавляют 100 мл воды для осаждения белых кристаллов. Смесь отстаивают в течение 1 ч и затем ДМСО отгоняют. Белые кристаллы отделяют фильтрацией через фильтр G-, затем промывают дистиллированной водой и высушивают при пониженном давлении в эксикаторе. Выход сырого продукта 330,5 мг. 330,5 мг сырого продукта растнг)ряют в смешанном растворителе циклогексана с этилацетатом в соотношении 50:10 по объему. Раствор медленно пропускают через колонку, наполненную kO г силикагеля для постепенного отделения продукта. Получают 188,2 мг (выход 62,86 )чистого продукта. Результаты элементного анализа и температура плавления продукта следующие . Найдено,: С 66,0; Н 7,0; N 2,3; С1 П,0. Рассчитано,: С 66,22; Н 6,98; N 2,27; С1 11,52. Температура кипения при 25 С в расплавленном состоянии. Подтверждено, что продуктом является З-гилрокси-1,3,5(10)-эстратриен -17(3- 4- п-Сбис (2-хлорэтил) аминоД фенил -бутирилоксиJ ацетат. 50 мг продукта растворяют в 1 мл безводного пиридина, к этому раствору добавляют 1 мл уксусного ангидрида и проводят реакцию в холодильнике в течение 1б ч. Затем реакционную смесь концентрируют и высушивают при пониженном давлении на водяной бане при 30с. Остаток смешивают с дистиллированной водой и смесь отстаивают 1 ч для осаждения маслообразного про дукта в виде белой коллоидной пены. Пиридин и уксусную кислоту удаляют с дистиллированной водой и продукт промывают водой, которая была нейтральной. Маслообразный продукт от- деляют от водного раствора, концентрируют и высушивают в эксикаторе при пониженном давлении с получением 45 мг маслообразного продукта. Продукт анализируют тонкослойной хроматографией на силикагеле со смешанным проявляющим растворителем эти ацетатциклогексан .в соотношении по объему с получением одного пятна Rf : 0,78. Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан при соотношении 10:50 по объему для очистки продукта Очищенный продукт имеет вязкость мас лообразного соединения при . Результаты элементного анализа сл дующие. Найдено,%: С 66,0; Н 6,5; N 2,0; С1 10,9. Рассчитано,%: С б5, Н 6,8+; N 2,13; С1 10,79 П р и м е р 7,. З-пропионилокси-1 ,3,5 (10) -эстратриен-17 | -С 1-Гп-Сбис (2-хлорэтил) aMHHoJ ЛенилДбутирилокси}ацетата. 50 мг З-гидрокси-1,3,5(10}-эстратриен-1 7р -С п-рбис- (2-хлорэтил) aминoJлeнилJбyтиpилoкcи - ацетата растворяют в 1 мл безводного пиридина, добавляют 1,5 мл пропионового ангидрида и смесь держат в холодильнике в течение дня. Реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении на водяной бане при 30 С. Остаток смешивают с дистиллированной водой и смесь держат в течение 2 ч с образованием коллоидального маслообразного продукта. Пиридин и уксусную кислоту удаляют дистиллированной водой и продукт промывают нейтральной водой. Водную фазу отделяют и масляную .фазу высуживают при пониженном давлении и эксикаторе с получением О мг маслообразного продукта. Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан в соотношении 10:50 по объему для е.го очистки. В результате подтверждено, что продуктом является 3-пропионилокси-1 ,3,5(10} -эстратриен-17 f - 4-Cn бис-(2-хлорэтил) аминоЗфенил бутирилокси -ацетат. П р и м е р 8. З-бензоилокси-1,3,5 (10)-эстратриен-17р- -Гп{ Ис (2-хлорэтил) аминоДфенил &утирилокси -ацетат. 50 мг З-гидрокси-1,3,5(10}-эстратриен-17Р)/;-Гп{бис (2-хлорэтил)амино2 фенил бутирилокси ацетата растворяют в 1 мл безводного пиридина и добавляют 2 г бензойного ангидрида и смесь держат в холодильнике 1 день. Реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении на водяной бане Р 30°С. Остаток смешивают с дистиллированнои водой и смесь отстаивают в течение 1,5 ч до получения коллоидного маслообразного продукта. Пиридин и уксусную кислоту удаляют дистиллированной водой и продукт промывают нейтральной водой. Вбдную фазу отделяют и маслообразную фазу выпаривают досуха при пониженном давлении в эксикаторе с получением 5 мг мае-лообразного продукта. Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан в соотношении 10:50 по объему для очистки продукта. Очищенныйпродукт имеет Вязкость маслообразного соединения, В ИК-спектре полосы поглощения 3200-3600 см не обнаружено. В результате подтверждено, что продуктом является З-Рензоилокси-,3,5(10) -эстратриен-17 -р(- п-Пбис- .-хлорэтил)аминоЗфенилЗбутирилоксиЗ-ацетат Испытание.токсичности и антиопу- холевой активности (in vivo) производных хлорамбуцила. Токсичность () В измерениях качестве одной группы исполь:зуют восемь самок мыши 1CR-1CZ (ввозрасте 5 недель) в прозрачной клетке, каждое средство растворяют в оливковом масле и вводят путем интраперитональной инъекции (и,п.),орального вве дения (о.в.) и подкожного введения (к.в,) в мышь по одной дозе и затем после 7 дней получают для них величи ны LBj-f)графический методом. Результаты ЬО дхлорамбуцила составляют для интралеритональной инъекции 20 мг/кг, орального введения 80 мг/к и подкожного введения 26 мг/кг. Антмопухолевое испытание (in vivo Образцы раковых клеток груди чело века, имеющих стероидные гормональны рецепторы, подкожно имплантируют в лапку мыши (5 недельный возраст) для образованиятвердых опухолей. Через 2k ч после имплантации раствор активного ингредиента вводят подкожно или орально мышам каждый день в течение 10 дней. Через двадцать пять дней после имплантации опухоли вырезают. Эффективность ингиГирования опухоли измеряют для каждой средневесовой опухоли для 10 мышей (активный ингредиент введении каждой средневесовой пухоли для 10 контрольных мышей. Для обоих приемов введения {как подкожно, так и орально) при дозе хлорамбуцила 15 мг/кг эффективность ингибирования составляет 50-70, в то время как при введении предлагаемых производных хлорамбуцила эффективность ингибирования составляет более 90%. При введении производных изобретения все мыши остались живы. После введения хлорамбуцила в наблюдениях после вскрытия обнаружены сильные изменения селезенки, матки и тимуса, в то время как после введения предлагаемых образцов изменения не обнаружены. Формула изобретения 1. Способ получения производных хлорамбуцила формулы 1 - водород или ацильная группа:п 1, ,, ci-dpisj-cJ-djHy отличающийся тем, что эстрадиол или его ацилированное про изводное по 17 положению подвергают взаимодействию со связывающим агентом - монобромуксусной кислотой или монобромацетилбромидом в присутствии органического растворителя, затем модифицированный эстрадиол или его ацилированное производное подвергают взаимодействию с карбоксильной группой хлорамбуцила в органическом растворителе с последующим выделением целевбго продукта. 2. Способ получения производных хлорамбуцила формулы I

-.-../ HgciH a

N

где P. - родород или ацильная группа . 00 -e-(J|Hs, отличающийся тем, что хлорамбуцил подвергают взаимодействию по карбоксиатной группе со связующим агентом - монобромуксусной кис лотой или ионобромацетилбромидом в 60I присутствии органического растворителя, затем модифицированный хлорамбуцил подвергают взаимодействию с гидроксильной группой в 17 положении эстрадиола или его ацилированного производного в органическом растворителе с последующим выделением целевого продукта. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Патент СССР V 379088, кл. С 07 J 1/00, опублик. 197 , выданный инофирмеСандос АГ, Швейцария. 2.Машковский Н. Д. Лекарственные средства. Т. 2, 1972., с. .