Способ размножения люцерны Советский патент 1979 года по МПК A01H3/00 

Изобретение, относится к сельско.1у хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве, в исследованиях по фитопатологии и морфогенезу растений. Известен способ регенерации расте ний люцерны in- vitro из каллусов, об разовавшихся из пыльников и завязей с использованием питательной среды, в которую введен компонент неопределенного состава (дрожжевой экстракт 1 . Недостатком этого способа являетс то, что регенерация растений возможн лишь при наличии цветущих фор./, всле ствие чего данный способ не применим в работе с растениями, находящимися более ранней фазе развития, нецветущими гаплоидами и т.п. Цель изобретения - ускорение размножения и оздоровления растений от бактериальной, грибной и вирусной инфекции. Поставленная цель достигается тем что листочки, то есть пластинки трой чатого листа культивируемых сортов и гибридов люцерны стерилизуют в 0,1%-ном водном растворе диоцида и после трехкратной промьшки в дистиллированной воде делают на каждом из них ряд надрезов по всей площади пластинки и помещают на основную питательную среду Гамборга В, в которую дополнительно вводят 6000- 8000 мг/л бактоагара и 200-300 мг/л нитрата аммония, содержание сахарозы увеличивают до 25000-35000 мг/л и вносят следующие фитогормоны: 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту 8-16 мг/л, кинетин 6-10 мг/л и «с -нафтилуксусную кислоту 0,1-0,5 мг/л. рН среды доводят до 5,8-6,0. Состав среды Гамборга By представлен ниже. Сахароза составляет 20 г/л среды 2 . Материал инкубируют 2-3 недели при непрерывном освещении люминесцентньми лампами (освещенность 0,54,0 тыс.лк) , температуре 26±1С и относительной влажности воздуха 95100% в закрытых прозрачньк сосудах. В случае появления на листочках бактериальной или грибной инфекции их удаляют с частью прилегающей к ним питательной среды; вирусная инфекция устраняется под воздействием фитогормонов. Через 2-3 недели развившиеся ;каллусы делят на 3-5 частей и переносят на ту же питательную среду, но, без нитрата аммония, в которой вышеназванные три гормона заменены, одним бензиламинопурином из расчета 0,2-0,8 мг/л, и культивируют при тех же условиях в течение 2-4 недель {длину фотопериода можно сократить до 16 ч в сутки).

Появившиеся на каллусах зеленые стеблевые почки и проростки переносят на агаризованную среду Гамборга 65, разбавленную вдвое, без гормонов По мере развития растений на этой среде и появлении у них 2-3 тройчатых листьев и корней их пересаживают в почву и выращивают в обычных условиях.

Прюводилось размножение и оздоровление синей и желтой люцерны. При этом 80% листочков, помещенных на питательную среду с тремя фитогормонами, образовали каллусы. После делени последних на 3-5 частей и переноса на вторую среду с 0,2 мг/л бензиламинопурина на каждом кусочке пересаженного каллуса образовалось в среднем две почки, которые при пересадке на третью среду без гормонов развивались в растении с 2-3 тройчатыми листьями и корнями. Последние пересаживали в почву и выращивали в обычных условиях.

Полученные растения - регенераты были здоровыми и морфологически не отличались от исходных растений.

Использование предлагаемого изобретения позволит ускоренно размножать растения люцерны и освобождать исходный материал от бактериальной, грибной и вирусной инфекции.

Формула изобретения 1. Способ размножения люцерны in vitro, включающий получение каллусов на питательной среде с последующей пересадкой их на среды, способствующие образованию почек и развитию из них растений, отличаю щийся тем, что, с целью ускорения размножения и оздоровления расте ний от фитопатогенной инфекции, в ка честве исходного материала для образования каллусов используют листочки на каждом из которых предварительно делают надрезы по всей площади листо вой пластинки, помещают их на питательную среду Гамборга Bg и после образования каллусов последние пересаживают на среду с бензиламинопурином, а образовавшиеся на каллусах почки переносят на разбавленную агаризованную среду Гамборга Bgбез гормонов. 2. Способ по п.1,отличающий с я тем, что в среду Гамборга By ВВОДЯТ 6000-8000 мг/л бактоагара, 200-300 мг/л нитрата аммония, 816 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, 6-10 мг/л кинетина и 0,10,5 мг/л Л -нафтилуксусной кислоты, а концентрацию сахарозы увеличивают о 25000-35000 мг/л. 3. Способ по пп.1,2,о т л и ч а ющ и и с я тем, что в питательную среду Гамборга В вводят 6000-8000 мг/я бактоагара, концентрацию сахарозы увеличивают до 25000-35000 мг/л и добавляют 0,2-0,8 мг/л бензиламииопурина. Источники информации, принятые во.внимание при экспертизе 1.J.W.Saunders, E.P.Bingham Cropscience, 1972,12,6, p.804-808. 2.Nutrient requirement of suspension cultures of Soybean root cells O.Z.Gamborg, R.A.Wilier, K.Gima, Experimental Cell Research, 50,1, p.151-158 (1968),