Способ количественного определения сульфгидрильных групп цистеина шерсти Советский патент 1979 года по МПК G01N21/24 

Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения. Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения цистеина шерсти путем, последователыюй обработки анализируемой пробы cepHO(i кислотой, раствором 5,5-дитио-бис(2-нитробснзойной кислоты) в присутствии буфера - смеси зтилендиамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты, взятых в мольном соотношении от 1,2:6,1:1 до 1,3:7,3:6.

Отличительным признаком способа является использование в качестве буфера смеси зтилендиамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты, взятых в мольном соотношении от 1,2:6,1:1 до 1,3:7,3:6.

Навеску обезжиренной шерсти помещают в мернудо колбу на 25 мл, добавляют 15 мл (по объему) серной кислоты и помещают в суишльный ;шкаф для гидролиза на 2,5 ч при температуре . После окончания гидролиза перемешивают, охлаждают, доводят до метки 15%-ной кислотой, приливают 0,8 мл 5,5-дитио-бис- (2-нитробензойной кислоты) и 5,5 мл буферного раствора, содержащего этилендиамин хлористоводородный, аммиак и соляную кислоту в мольном соотношении 1,2:7:3. Реакция происходит мгновенно. Колориметрирование проводят на ФЭК 56-М с синим светофильтром N 4. Расчет проводят по формуле

А- 25

С

С - содержание SH-групп Ш1стеина, ммоль/г;

А показание калибровочного графика, ммоль; :

25 - объем мерной колбы, мл;

Н - навеска сухой шерсти с учетом влажности, г.

Построение калибровочного графика. В 10 мерных колб объемом 25 мл приливают растворы, содержащие сульфгидрильные группы SH цистеина шерсти, 0,1; 0,2; 0,3 ммоль/мл и так далее с последующим добавлением 5,5 дитио-бис- (2-нитробензойной кислоты) и буферной смеси зтилендиамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты и проводят фотоколориметрирование полученных окрашенных растворов. Точность и чувствительность предлагаемого метода контролируется калибровочным графиком по стандартному раствору цистенна при разных K IHцентрациях SH-групп в растворе, что обеспечивает преимущество по точности определения.

В табл. 1 приведены результаты определения экстинка настоящим и известным способом.

Таблица 1

В табл. 2 приведены результаты количественного определения SH-групп цистеина шерсти.

Таблица 2

В табл, 3 прньедены р иульгаты определения концентрации цистеина при различных соотноше

ниях этилендиамина хлористоводородасго, ам миака и соляной кислоты.

Настоящий способ не требует применения сложного дорогостсящего оборудования, дефицитных и дорогих реактивов. К его достоинствам относятся также: быстрая растворимость всех реагентов, бесцветность буферных растворов, позволяющая проводить колориметрирование против дистиллированной воды, не прибегая к холостой пробе, освобождение от трудоемкой и /шитеэтьной операции по перекристаллизации реактива Эллмана. Использование аммиачной буФормула изобретения

Способ количественного определения сульфгидрильных групп цистеина шерсти путем последовательной обработки анализируемой пробы сер

ной кислотой, раствором 5,5-дктно-бис-(2-иитробензойной кислоты) в присутствии буфера, включающего соляную кислоту, с последующим фотоколориметрированием полученного при этом окрашенного соединения, отличающийся тем,

по, с целью повышения точности и упрощения определения, в качестве буфера используяут смесь этилендиамина хлористоводородного, аммиака и соляной кислоты, взятых -в мольном соотношении от 1,2:6,1:1 до 1,3:7,3:6.

Источники информации, принятые во вниман} е при экспертизе

1, Burley В. W. Тех. Res. J., 1956, 26, р. 332336.

neuen Methode zur CysteintMstimmug in Wollhudrolysaten. - Z. ges Textilind. 1962, 70,N 4, 242..