(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ Т- И Б-ЛИМФОЦИТОВ
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧАСТОТЫ МУТАНТНЫХ ПО Т-КЛЕТОЧНОМУ РЕЦЕПТОРУ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА | 2006 |
|
RU2316766C1 |
| Способ идентификации субпопуляций @ и @ -лимфоцитов крови | 1982 |
|
SU1113742A1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ И ЛИМФОЦИТОВ К ИНСУЛИНУ | 2005 |
|
RU2292045C2 |
| ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗЫ АКТИВАЦИИ Т-КЛЕТОК, ОСНОВАННЫЕ НА ИЗМЕРЕНИИ РНК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ | 2013 |
|
RU2671707C2 |
| СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ | 2012 |
|
RU2504787C1 |
| СПОСОБЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ, ВЫДЕЛЕНИЯ, ИСТОЩЕНИЯ И ОБОГАЩЕНИЯ ПОПУЛЯЦИЙ TR1 КЛЕТОК, ПОПУЛЯЦИИ TR1 КЛЕТОК, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБ МОНИТОРИНГА ЭФФЕКТА ТЕРАПИИ | 2011 |
|
RU2627445C2 |
| СПОСОБ МУЛЬТИПЛЕКСНОГО АНАЛИЗА В-КЛЕТОК ДЛЯ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУННОЙ СИСТЕМЫ РОГАТОГО СКОТА | 2020 |
|
RU2761468C1 |
| СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ТЕРМИНАЛЬНЫХ НУКЛЕОТИДОВ G-ЦЕПИ ТЕЛОМЕРНОЙ ДНК ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ И ДУПЛЕКС-СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА, НАБОРЫ СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ПРАЙМЕРОВ И ЗОНДОВ ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ЭТОГО СПОСОБА | 2012 |
|
RU2508407C9 |
| СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ | 2021 |
|
RU2765467C1 |
| СПОСОБ ДИСКРИМИНАЦИИ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ДВУХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2006 |
|
RU2397494C2 |
1
Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической и экспериментальной иммунологии.
Известен способ идентификации Т- и Б-лимфоцитов крови путем биофизического исследования суспензии лимфоцитов.
Однако известный способ не обеспечивает высокой точности и на исследование затрачивается много времени.
Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.
Эта цель достигается тем, что в суспензию лимфоцитов вводят флуоресцентный зонд 3-метоксибензантрон и идентифицируют Т- и Б-форму лимфоцитов по интенсивности флуоресценции отдельных клеток суспензии.
Способ осуществляют следующим образом.
У животного или человека берут тимус, лимфоузлы, селезенку или 3-5 мл периферической крови и готовят суспензию чистых лимфоцитов в солевом буфере.
При этом используют обычные методики выделения и очистки лимфоцитов.
Концентрацию клеток в полученной суспензии лимфоцитов подсчитывают в камере Горяева и доводят ее до величины около
2,5-10 клеток/мл. Жизнеспособность клеток в исследованных суспензиях находится в пределах 94-99%. К 0,1 мл этой суспензии добавляют 0,001 мл раствора 3-метоксибензантрона (МБА) в диметилформамиде с тем, чтобы конечная концентрация МБА в суспензии лимфоцитов составляла 50 мкм. Каплю окрашенной суспензии немедленно наносят на предметное стекло,
накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе. Флуоресценцию МБА, связанного с мембранами лимфоцитов, возбуждают светом с длиной волны 365 нм, а интенсивность флуоресценции измеряют при длине волны 520 нм, выделяя ее с помощью интерференционного светофильтра. Свет флуоресценции, падающий на катод фотоумножителя, ограничивают световым зондом диаметром 1,5 мм
так, чтобы размеры изображения клетки в плоскости катода не превышали размеров зонда. Время измерения интенсивности флуоресценции одной клетки около 5 с.
Величина интенсивности флуоресценции зонда, связанного с клеточной мембраной, позволяет выявить две различные популяции лимфоцитов: слабо светящиеся и ярко флуоресцирующие. Популяция слабо светящихся клеток совпадает с Т-популяцией лимфоцитов, а яркие клетки составляют популяцию Б-лимфоцитов. Предлагаемый способ позволяет за короткое время точно устанавливать соотошение Т-и Б-лимфоцитов в периферической крови человека, что является важным для диагностики некоторых видов заболеваний, а также в условиях эксперимента для выявления и проверки новых средств и способов лечения. 29 Формула изобретения Способ идентификации Т- и Б-лимфоцитов крови путем биофизического исследования суспензии лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, в суспензию лимфоцитов вводят флуоресцентный зонд 3-метоксибензантрон и идентифицируют Ти Б-форму лимфоцитов по интенсивности флуоресценции отдельных клеток суспензии.
