Способ идентификации субпопуляций @ и @ -лимфоцитов крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

со -J

4

ю Изобретение относится к области медицины, а именно к эксперименталь ной и клинической иммунологии и аллергологии . Известен способ изучения Т- и В-лимфоцитов с помощью окрашивания изучаемых клеток флюоресцентным зон дом 3-метоксибенз антроном,маркирующим конформационные изменения мембранных макромолекул активированных клеток. Измерение интенсивности флюоресценции позволяет выделять яркие / условно относимые к В-лимфоцитам, и неяркие, условно относимые к Т-лимфоцитам клетки СП. Этот метод достаточно длителен и трудоемок, так как для точной идентификации требуется длительная подготовка образцов и использование ми Роцитофлуориметра. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Поставленная цель, достигается те что согласно способу идентификации субпопуляций Т- иВ-лимфоцитов крови путем обработки мазков крови хим ческими -веществами с последующим фл оресцентным исследованием, обработку нефиксированных мазков крови ведут инкубацией в парах формальдегида в течение 25-30 мин. Способ осуществляют следующим об разом. Нефиксированные мазки крови помещают в сосуд с притертой пробкой емкостью 0,5-1 л, на дно которого н сыпают 15-20 г порошка формальдегида (или орто-фтальальдегида. Сосуд плотно закрывают и помещают в термостат (80°CV на мин. Извлече ные препараты просматривают в синефиолетовом спектре люминесцентного микроскопа МЛ-2 (фильтры СС 1,5, ФС-1), что позволяет определить флю оресценцию мембран клеток различного цвета (желтого, желто-зеленого, зеленого). Меньшая часть лимфоцитов (20-25%/ имеет четко очерченное округлое несветящееся ядро, а цитоплазматическая мембрана флюоресцирует зеленым светом. Определяется свечение только цитоплазматической мембраны, слабое, мелкое, гнездно-гранулярное. Это Т-лимфоциты. Большую часть популяции лимфоцитов (40-60%) составляют клетки с желтой по цвету, расплывчатой, пятнистой флюоресценцией, охватывающей свечением ядерную и цитоплазматические мембраны. Свечение яркое и однородное - В-лимфоциты. Пример . Из крови больных ивфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы приготовляют мазки. . Инкубируют в парах формальдегида в течение 28 мин. Мазки анализируют под люминесцентным микроскопом. Количество Т-клеток составляет 25%, количество В-лимфоцитов - 60%. Контрольное сопоставление с изолированной популяцией Т- и В-клеток этой крови с помощью реакций розеткообразования подтверждает полученный результат. Использование предлагаемого способа идентификации субпопуляции лимфоцитов по сравнению с известными дает возможность заменить дорогостоящий t флюоресцентный 3-метоксибензантрон на формальдегид, упростить обработку исследуемой популяции лимфоцитов (не окрашивание клеток, а инкубация в парах формальдегида,), чем достигается значительная экономия расрасхода реактива, идентифицировать субпопуляции в мазках крови без трудоемкого выделения лимфоцитов из .клеток периферической крови.

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ путем обработки мазков крови химическими веществами с последующим флюоресцентным исследованием, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, обработку нефиксированных мазков крови ведут инкубацией в парах формальдегида в течение 25-30 мин.