Способ приготовления питательной среды для выращивания плесневых грибков с целью получения пенициллина Советский патент 1947 года по МПК C12N1/14 C12P37/00 

Рецептура сред, применяемых для вырап1,ивания плесневых грибков, образующийпенициллин, весьма разнообразна. Известно, что в качестве питательного вещества вводят большей частью сгущенный экстракт, получаемый при замачивании зерен кукурузы и являющийся там весьма дршевым о- ходом промышленности, перерабатывающей кукурузу. Кроме того, в состав среды входит также один из доступн|з1Х углеводов, например молочный сахар, являющийся отходом сыроваренной промышленности, или бастр-коричневый песок, получаемый кристаллизацией второго маточника при рафинировании тростникового сахара.

Рекомендованная ранее мясопептонная среда совершенно непригодна для производства как по причине ее дороговизны, так и потому, что высокая активность получаемой культуральной жидкости обусловлена главным образом наличием второго антибиотического вещества нотатина (он же крустозин, пенициллин В или глюкозодегидрат), который еще не нашел себе практиче.-ского применения. (Выход пенициллина на этой среде невелик).

Применяемая в настоящее время среда, приготовляемая из пшеничных отрубей, привлекательна своей доступностью и дешевизной, но производственный опыт показывает, что получаемая с нею культуральная жидкость не всегда имеет высокую активность. Кроме того, извлечение пенициллина из этой культуральной жидкости сопряжено ,; известными затруднениями, которые вызывают необходимость эмульгирования при применении экстракционного метода и неполного снятия пенициллина с адсорбата при адсорбционном методе. Синтетическая среда Чапек-Докса с глюкозой и добавкой дрожжевого экстракта, применявшаяся в Англии в первый период работы над пенициллином, дает культуральную жидкость невы:-:окой активности (3-4 оксф. ед. в 1 мл) и менее пригодна для получения пенициллина, чем мясопептонная среда.

Л 68447

Предлагается дрожжевой экстракт, под которым подразумевают отвар дрожжей заменить в синтетической среде Чапек-Докса дрожжевым автолизатором, т. е. раствором, содержащим продукты самопереваривания дрожжевых клеток. Полученная среда дает культуральную жидкость более высокой активности, порядка 20-25 оксф. ед. в 1 мл и даже выше.

Переработка ее не представляет затруднений и грибок на этой среде не образует нотатина, независимо от того, содержит ли среда глюкозу или какой-либо другой углевод, так что вся активность культуральной жидкости обусловлена наличием в ней пенициллина.

Так как дрожжи являются доступньм материалом и производство их можно вести на очень дешевом сырье (например, древесные гидролизаты), то среда с дрожжевым автолизатом не может встретить препятствий для ее применения. Углеводным компонентом среды могут служить глюкоза, отходы рафинадных заводов (бастр), молочный сахар, мальтоза в виде продуктов осахаривания крахмала солодом, или продукты кислотного гидролиза крахмала, начиная с декстринов.

Применяя гидролиз крахмала серной кислоты до стадии декстринов и нейтрализуя затем кислоту мелом или известью, задается значительно ускорить фильтрование дрожжевого автолизата. В этом случае по окончании гидролиза крахмала к гидролизату прибавляют готовый, но не фильтрованный автолизат дрожжей, носле чего проводят нейтрализацию мелом. Выпадающий при этом сульфат кальция захватывает дрожжевые клетки, вследствие чего фильтрование ведется на нутче, причем оно идет очень быстро и осадок может быть промыт водой.

Пример 1. Приготовление автолизата. 250 г прессованных дрожжей размешивают с 1 л, водопроводной воды в равномерную суспензию, прибавляют 5 мл хлороформа и смесь оставляют в закрытой склянке при 37-40° на 2 суток, время от времени взбалтывая. По истечении указанного времени смесь нагревают до кипения и фильтруют на складчатых бумажных фильтрах. Фильтрат светло-желтый, опалесцирует рП-6,0-6,5.

В 500 мл водопроводной воды растворены 40 г глюкозы, 3 г нитрата натрия, 1 г фосфата калия однозамещенного, 0,5 г сульфата магния и 0,5 3 хлористого калия. Затем прибавляют 200 мл автолизата и смесь доводят водой до 1 л. Полученную среду Чапек-Докса с 20% автолизата разливают по коническим колбам слоем высотою 2 см, колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют 30 мин. при давлении в 1 атм. По охлаждении засеивают конидиями Penicillium crustosum с.агаровой культуры и помеш,ают в термостат при 24°.

Определение активности дало следующие результаты:

Время (сутки) . .57911131517 Активность

воксф.ед. . . .0,62,55,025,025,024,020,0

рН5,35,76,8 7,07,8 8,3 8,5

П р и м е р 2. Состав среды тот же, что и в примере 1. Определение активности дало следующие результаты:

Время (сутки) . .46 8ИГЗ16 Активность

в оксф. ед. ...2,08,0 22,523,016,510,0

рН . 5,46,7 7,58,58,69,1