1
Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии.
Известен способ получения антирабической вакцины путем гомогенизации вируссодержащей мозговой ткани в солевом растворе с последующей инактивацией и лиофилизацией целевого продукта 1.
Однако вакцина, полученная известным способом, содерл ит много балластных веществ и является реактогенной.
Целью изобретения является снижение реактогенности вакцины.
Цель достигается тем, что гомогенизированную мозговую ткань разводят буферным раствором с рН 7,1-7,3, содержащим 0,005 М раствор КН2РО4, 0,0035 М раствор NaOH, 0,3 М раствор NaCI и бидистиллированную воду, до получения 20%-ной суспензии, затем ее встряхивают, центрифугируют и надосадочную жидкость ииактивируют бетапропиолактоном.
Кроме того, встряхивание и центрифугирование ведут при 32-37°С.
Цример 1. Для получения очищенной инактивированной антирабической вакцины из мозга овец используют фиксированньш вирус бещенства штамм «Москва, который пассируется через мозг кроликов и имеет инфекционный титр при интрацеребральном заражении мыщей не ниже Л0оо/0,03 МЛ. Из мозга инфицированных кроликов готовят суспензию в разведении 1 : 100 в физиологическом растворе и
вводят в объеме 0,3-0,5 мл в мозг 2-10 овцам (для получения одной серии вакцины). Овец, заболевших лабораторным бешенством с латентным периодом 90-144 ч и типичной КЛИНИКОЙ, тотально обескровливают, отделяют голову и в стерильных условиях извлекают головной мозг, предварительно взяв пробу ДЛЯ контроля на стерильность. Далее мозг измельчают в гомогенизаторе до получеиия тонкодисперсной
взвеси, которую разводят стерильным буферным раствором с рН 7,1-7,3 при температуре 37°С до получения 20%-ной суспензии.
Буфериый раствор имеет следующий состав, г/л:
КН2Р040,675
NaOH0,14
NaCl17,4
Вода бидистиллированнаяОстальное
Примечание: КН2РО4 и NaOH добавляют в виде 0,2 М растворов (25 мл и 17,5 МЛ соответственно).
Буферный раствор стерилизуют автоклавированием.
Полученную 20%-ную мозговую вируссодержащую суспензию встряхивают на шуттель-аииарате (120-150 качаний/мин) ири 37°С в течение 1 ч. После этого суснензию переносят в подогретые центрифужные стакаиы и центрифугируют 30 мин ири 1200- 1500°. Надосадочную вируссодержащую жидкость, свободную от нерастворимых белков и липидов, смешивают с равным объемом стерильного раствора 15%-ной сахарозы на бидистиллированной воде, содержащего бетапропиолактон в соотношении 1 :2000. Конечное разведение бетапропиолактона в полуфабрикате составляет 1:4000, а концентрация сахарозы 7,5%. Инактивацию вируса ироводят при комнатной температуре (20-25°С) в течение 3 ч при непрерывном перемешивании. Потом бутыли переносят в холодильную комнату с температурой 4-6°С на 48-72 ч. Полуфабрикат проверяют на стерильность и полноту инактивации. Затем его разливают в ампулы по 1,5 мл и лиофилизируют.
Готовую вакцину контролируют на бактериологическую стерильность, безвредность, отсутствие живого вируса, содержание белка, антигенность, остаточную влажность и растворимость. При использовании вакцины содержимое одной ампулы растворяют в 3 мл бидистиллированной стерильной воды, проверенной на отсутствие пирогенности.
Пример 2. Для получения инактивированной очищенной антирабической вакцины из мозга крыс-сосунков или мыщейсосунков вирус, указанный в примере 1, разводят 1 : 1000 и вводят животным интрацеребрально по 0,03 мл. Для приготовления вакцины используют животных, заболевших на 3-5 сутки после заражения. В одну серию объединяют мозг 400-1000 животных. Далее проводят все операции, описанные в примере 1.
Предлагаемый способ получения очищенной антирабической вакцины позволяет удалить из суспензии мозговой ткани около 80% балластных веществ практически без потери вируса (см. таблицу).
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ | 2001 |
|
RU2191600C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ | 2005 |
|
RU2287343C1 |
| СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА ЖИВОТНЫХ | 1997 |
|
RU2134590C1 |
| ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ЛОШАДЕЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 1991 |
|
RU2035191C1 |
| НАБОР ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОМСКОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ И КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА | 1993 |
|
RU2061959C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОСПЕЦИФИЧНОЙ ГЕТЕРОЛОГИЧНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ | 2006 |
|
RU2322503C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА | 1993 |
|
RU2063245C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ | 2013 |
|
RU2538617C2 |
| Способ изготовления инактивированной вакцины против бешенства животных | 1979 |
|
SU770196A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА НА ОСНОВЕ РАСТВОРИМОГО АНТИГЕНА | 1994 |
|
RU2084242C1 |
В таблице представлена характеристика исходной и очищенной вируссодержащей мозговой суспензии.
Количество белка в готовом препарате менее 3 мг/мл (при определении по методу Лоури), т. е. в 4-5 раз меньше, чем в известной вакцине Ферми.
Очищенная вакцина не обладает энцефалитогенной активностью в опытах на морских свинках (известная вакцина Ферми вызывает гибель около 75% животных).
Вакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью в опытах на животных.
Введение вакцины добровольцам (по 3 мл в течение 14 дней) вызвало лищь у некоторых незначительные местные явления при отсутствии каких-либо общих реакций и сопровождалось активной продукцией аитител к вирусу бешенства.
Предлагаемый способ позволяет получить вакцину, не вызывающую местных- и общих реакций при парентеральном введении.
Формула изобретения
тем, что встряхивание и центрифугированиепринятые во внимание при экспертизе
ведут при 32-37°С.1. МРТУ-42, № 481-72, 1972.
687841
