Способ обнаружения и идентификации энтеробактерий Советский патент 1979 года по МПК C12K1/00 

1

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.

Известен способ обнаружения и идентификации энтеробактерий путем первичного посева исследуемого материала в ясидкую питательную среду накопления, инкубирования с последующим пересевом культуры на плотную элективную среду 1.

Однако известный способ не обеспечивает избирательного выделения клебсиелл.

С целью избирательного выделения клебсиелл по предлагаемому способу первичный посев производят в среду, содержащую, г/100 мл дистиллированной воды:

0,01-0,05

Сульфат магния 0,2-0,6 NaCl

Двузамещенный

0,1-0,3 фосфат калия Однозамещенный

0,1-0,3

фосфат калия

0,15-0,25 Рафиноза

0,1-0,3 Мочевина Кристаллический

0,00015-0,00025

фиолетовый Бромтнмоловый

синий0,003-0,005

и после инкубирования пересевают на плотную питательную среду того же состава с добавлением сульфата калия 0,01 - 0,05 и агара 1,8-2,5 и содержанием рафинозы 0,4-0,6, бромтимолового синего 0,005-0,01.

Способ осуществляется следующим образом.

Вносят в 2-3-5 параллельных рядов пробирок со средой накопления следующего состава, г/100 мл дистиллированной воды:

Сульфат магния0,01-0,05

NaCl0,2-0,6

Двузамещенный фосфат калия0,1-0,3

Однозамещенный фосфат калия0,1-0,3

Рафиноза0,15-0,25

Мочевина0,1-0,3

Кристаллический

0,00015-0,00025

фиолетовый Бромтимоловый 0,003-0,005 синий

различные количества исследуемого материала в десятикратных разведениях, инкубируют при 37 или 43°С в зависимости от загрязнения сопутствующей микрофлорой в течение 18-20 ч. При помутнении среды и изменении ее цвета производят высевы на плотную среду того же состава с добавлением агара для уплотнения среды и сульфата калия для стимулирования образования капсул. Среда состава, г/100 мл дистиллированной воды:

0,01-0,05

Сульфат магния

Сульфат калия

0,01-0,05

0,2-0,6

NaCl

Двузамещенный

0,1-0,3 фосфат калия

Однозамещенный

0,1-0,3 фосфат калия 0,4-0,6

Рафиноза 0,1-0,3

Мочевина

Кристаллический

0,00015-0,00025 фиолетовый

Бромтимоловый

0,005-0,01 синий 1,8-2,5

Агар

После инкубирования в течение 20-24 ч клебсиеллы вырастают в виде крупных колоний, слизистых, оливкового цвета, иногда с желтым центром или синеющих, резко отличающихся от немногочисленных более мелких колоний энтеробактеров и цитробактеров.

Использование изобретения позволяет более точно выявлять и идентифицировать клебсиеллы из исследуемого материала, что способствует получению более достоверных сведений о степени загрязнения объектов окружающей среды.

Формула изобретения

Способ обнаружения и идентификации энтеробактерий путем первичного посева

исследуемого материала в жидкую питательную среду накопления, инкубирования с последующим пересевом культуры на плотную элективную среду, отличающийся тем, что, с целью избирательного выявления клебсиелл, первичный посев производят в среду, содержащую, г/ЮО мл дистиллированной воды:

Сульфат магния

0,01-0,05

NaCl 0,2-0,6

Двузамещенный фосфат калия

0,1-0,3

Однозамещенный фосфат калия

0,1-0,3

Рафиноза

0,15-0,25

Мочевина

0,1-0,3

Кристаллический фиолетовый

0,00015-0,00025

Бромтимоловый

синий 0,003-0,005

и после инкубирования пересевают на плотную питательную среду того же состава с добавлением сульфата калия 0,01-0,05 и агара 1,8-2,5 и содержанием рафинозы 0,4-0,6, бромтимолового синего 0,005-0,01.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований. Под ред. М. О. Биргера. М., 1973, с. 181 - 185.