Способ получения антибиотического препарата для лечения и профилактики дифтерии Советский патент 1947 года по МПК A61K35/18 

Как известно, все попытки получения препаратов, подавляющих дифтерийные микробы в полости зева и носа, до сих пор не дали результатов.

Согласно изобретению, предлагается препарат, обладающий этими свойствами. Исходя из того, что красная KjjoBb животных, болеющих дифтерией, не изменяется при этой инфекции, и полагая, что эта невосприимчивость обусловлена наличием в эритроцитах веществ антибиотического типа, выделяемых из эритроцитов по методу Дюбо-Кониковой был получен препарат (названный «Эритрин), бактерицидный в отношении дифтерийной палочки, а также стафилококков, стрептококков и др.

Предлагаемый способ получения препарата заключается в следующем.

Кровь быков, овец, свиней и других животных дефибринируют обычным способом, затем центрифугируют 20-30 мин., плазму декантируют, а эритроциты, оставшиеся в осадке, обрабатывают концентрированной соляной кислотой (удельный вес 1,19) из расчета 100 мл кислоты на 1 л эритроцитов.

Кислоту вливают всю сразу при непрерывном цомещивании, чтобы не получилось вязкого коагу.чята. После обработки кислотой, эритроциты представляют собой кашицеобразную массу темнокоричневого цвета.

Массу эритроцитов, обработанную кислотой, оставляют при комнатной температуре в течение суток, после чего ее фильтруют, заливают по весу 8-кратным количеством ацетона и энергичновстряхивают.

Экстракцию ацетоном производят в течение 18 час. при комнатной температуре.

Ацетоновую вытяжку темнокоричневого цвета отфильтровывают через бумажный фи,тьтр и полученный фильтрат упаривают в вакуум-установке до появления опалесценции.

Сгущенный экстракт быстро вливают 2,5-3-кратцый объем 5%-ного раствора хлористого натрия, что вызывает почти немедленное появленнс коричнево-черного осадка, иногда падающего на дно крупньг

.Н Х.ЮНЬЯ-МИ.

Солевой раствор, в котором идет

осаждение, отстаивается сутки.

Как правило, за этот срок верхняя

часть жидкости успевает нросветЛ1 ться и ее удаляют ...декантацией.

Нижний ело1Г жидкости дентрифугир}ют, осадок промывают диети.т.чированиой. водой и собирают на бо.:1ь;п;;х часовых стеклах или чашках Истрн, которые помещают в cyuni.TijHbiii HKatj) на 16-18 часов при 35-40°. Предварительно подcynieHHbiii осадок помегнают затем над фосфорным ангидридом на неCKO.iiiKo дней ДЛ5 окончательн()1о пр(). 1-1з одного .литраэри троцитов при об)аботке П1)едлагаемым снособом получают г активного бакт.е)ииидд1ого препарата-эритрина.

При хранении в экеикаторе ири темнературе 16-18° пренарат сохраняет активность не 6o;iee 6 мес.

Препарат прл1меняют д.чя терапии и профилактики дифтерии в виде 0,25 -ных растворов.

Пренарат растворим в водной среде при рН 7,6-7,8, а также в этиловом снирте.

Стандартны раствор нрепарата, идущий .для практических целей, готовят в растворе 3,8 лимоннокис.юго натрия, предварительно доведенном до кипения.

0,25 г сухого препарата раетворяют при К1шяче11ии в 100 мл 3,8i)-Horo раетвора , имонно-кислого натрия.

Кипячение в течение 2-3 мин. значительно повышает растворимость п|)енарата.

После охлаждения раствор фильтруют через ватный фильтр.

Можио также растворить препарат в 0, растворе соды, а также в фосфатных буферных растворах с рП 7,6-7,8.

Растворы нрепарата в лимонноислом натрие сохраняют активность 7 дней, в фосфатном буфее-2-3 дня, в 0,25% соды 1-2 ня, в спирте 2-3 дня.

Для испытания бактериостатичекого действия предлагаемого преарата его растворяют в 3,8 лимонно-кисло1о иатрия из расчета содержания 2,5 мг иреиарата в 1 слг раствора лимонно-кислого натрия (0,.1-ный раствор).

Затем в отдельные пробирки с 10 м.г расплавленного агара при 45-50° вносят но 0,1 мл или 0,2 .ил раствора препарата и разливают по чашкам.

У гаровые пластипкн засевают СПЛОИ1ПЫМ газоном дифтерийгюй па.гочки и через час. роста отмечают результаты. Полное отсутствие роста и.ли заметная его задержка свидете.чьетвуют о бактериостатических свойствах препарата. Коптролем служит посев тех же мик)юбов иа агар с подмегнениыми к нему- 0,2 мл 3,8 раствора лимонно-кислого натрия па 10 мл агяРа. ,.. , - .

Для иенытания .бактерицидно -о действия нрепарата 0,2 ./мл 0,25 i-HOго раствора ирепарата разводят в 2 мл бульона и делают ряд иос.тедовате.льных двухкратных разведений так, чтобы в первой пробирке было разведение осиовггого 1аство)а 1:10, во второй 1:20, в третьей 1:40 и т. д., до разведения 1:320 в 6-й пробирке.

Во вее п)обирки вносят по 0,1 мл суточной бульонной культуры дифтерийной палочки, что равняется 600-800 млн. клетокна1 мл. Для контроля 1 мл бульона без нренарата заеевают тем же колнчеетвом дифтерийной палочки.

Через 5 час. из каждой пробирки после встряхивания высевают по 0,1 мл на отдельную чашку с агаром; на следующий день и затем через 48 час. определяют результаты. Полное отсутствие роста в посеве из наивыешего разведения препарата считается его титром.

Например, посев из 5-ой пробирки .не дал роста: в 5-ой пробирке разведение основного раствора препарата 1:160, учитывая, что основной раствор препарата )азведен в 400 раз, определяют титр эрнтрина 1:64000 или концентрацию препарата в Г мл, равную 15, 87.

За условную единицу ак-тивности принимают наименьшую конГ1ентрацию препарата, проявивщуго ба1стерицидность в вышеописанных