Хлоргидраты производных 6,7,8,9-тетрагидропиримидо-[4,5- @ ] [1,4]-бензтиазина,обладающие ингибирующей активностью по отношению к дигидрофолатредуктазе,синтезу нуклеиновых кислот и проявляющие противоопухолевое и циттоксическое действие Советский патент 1982 года по МПК C07D513/04 A61K31/542 A61P35/00 C07D417/02 

г.. --.i aS-S iSV - ; 5eii 5 ; ; i fes:s3(K:.- ч..-;.м./.-.---..-..-:. : lfc- Viil.. -. ..:--i:s- ::- - Hr.:k -i-- 5:Ci- :. .-i;,v.3 -5feSSr .... -.f.-.-ije..-;. Ш 1Рейюстварёшв1 $ ) пред ,., РТ влязют собой крйсФаллически ГйОрШтки оранжевого UB€it aV имеющие тектё ра Давления в пределах 245-278 С, рёст BSpfiwtbi жводё й устх йчивЬ1 ГфГ1фаШй - 1й воШду;МГ--№ - ;:v:. ,,; ;, Спосюб 1гюлучШШ Ш1йЙ е „ J ,У. L S§lffi M 1из6ёст1юй i Ш1ййч кой реакции замещения ШёШнаГШйШШг1| вг г й:6вь1М цикЛ01й, ни акШбг ру1ту ifoH дё: ствией первичных или вторичнь1х акда нов 2 J . . иые соединения общей срзрщлы ( П ) получают в йймодействйём 7,7-дйметил-Э-окс6-6,7,8, Э-гет pdrgflропиримвдо- {4.5-в) (1,4У С вгетствуюшкй мЪнозамещенным пнперазином общей формулы 1 . -gt- ч.- t , (Ф) где -имеет указанные вьиие значения .,, .... J««.jciiiziDic Dcuue оиаченим ЭзаимбйёШвие соединений (Па) и (Ш осушествляют в С11ёдб ргайичес§оТЬ рают шйг гт лотгугw r-YforKS ..«:s.;;L-2r:- во{зителя при 80-90 С - --TlpiOittecc прЧ5еадят предпочтительно в . триэтиламина или бензола Исходное соединение общей формулы (Ш ) берут в избытке по отнЫШйШЬ .wj.j,j,.j,.4- «k Mr-- -«-:5« - л Л...- . -« -.. . раечшномутсоличеству исходного соединения ( а). I . ,, . мй ет6дами. - --.- . -Нижёследутошве napaMeTpbf fertMKefpig pyjoT получение производных 4-пиЯё зй:. но-7,7-диматил-9-оксо-6,7,8, гвдропиримидо (4,5-в) (1,4) бензтиаЗйна общей формулы (П). Пример 1. Хлоргидрат 4-(4-ме тилпш1еразино)-7,7-диметил-9-оксо-6, 7,8,9-тетрагидро-5Н-пиримидо ,5-8) (1,4) бензтиазина (lot): - rvt5neH3HH 1 г (3.56 моль) 4-хлор-7.7-диметил-9-оксо-6,7,8,9,-Tetp-arftaifo 5Н-пиримвд И,5-в) (1,4)бен3 1Йзйка (Па) в 50 мл Т1 йэтиламина прибавляют г (4 ммоль) N-NfeifHjmHnepSOTHa (Ща). Реакционную- ШС-су-кШэтятript ° пере еШйЬЪнии в течение 12 Ч, охлаж дают до 2О°С, осадок отфи 11;Г{йГёШ§1Й и-пр-оштгают горячим бЬ олом -По б5 l2HzJ iP ввде оранжевого ЙЁ айЛМёс1ого порошка, т.пл. 276. (из спирта). Найдено; %Т С 53,39; Н 6.49; Св 9.73; N ||i:BSrs 8.27,; C,,SQ : ВычйслёноТ : С 53,4 Н 6,33; 19Ж21 73:4; $8.4Г ё р 2. Хлоргидрат 4- (4 - л ,,- кс тилпиперазино)-7,7-диметил-9 ,.8.9-тетрагидро-5Н-пиримидо (4,5-в) (1,4)бензтиазина( 16). i К суспензии 1 г (3,56 ммоль) 4-хлор-7,7-йШё| ил-9-оксо-6,7,8,9-тетрагвдро-5Н-п ймидо-(4,5-в) (1,4)бензтиазина (Па) в :50 мл триэтиламина при 5 г (3,86 ммоль) /Ь-оксиэ- . илпйеразина (Щб). Реакционную массу KtoifSrr 1 йпё ремешиванин 6 ч, после ;М 5Ж;-Шгщга йа1 :.ар .. .- осадок собирают, растирают том же -. 6 ч, после чего ГШШШаюГГ аЬок отфильтроьывают. Получаюг 1,4 г (87%) (16) в виде оранжЪЬого йгеЛйЬТсрИ&таллического пог-ita y iM WWS-Ti J rf-Kfi) Ь 4уи«МА#«П1- - 1 rf-Kfi) «OC-L -t.. .. рощка, т.пл. U45-247°C (из спирта). .. : С 51,818{ Н6,46; N TS;Mrs:7,7; се 8,76; c gHg ccMsOaS. -Вычислено, %: С 52,47; Н 6,36; N «-unnv- icnu, /о. v , п о, iTf.S Т,78; 068,64. 4-(. - -л- р и м е-р 3. Хлоргидрат 4-(-фенилэтилпиперазино) -7,7-диметил-9-оксо-(Т, 8,9-тетрагидро-5Н-пириМ1йд(4,5-в)(1,4)бензтиазина (1в). Г 1 г (3,58 ммоль) 4-хлор-7,7-д иметил-9-оксо- 6,7,8,9-Teitw рагидро-5Н-пиримидо () (1,4)бенз тиазина (ga) в SO мл триэтиламина прибавляют О,7 г (3,7 ммоль) -(р-фенил )-этилпйперазина (Шв). Реакционную массукипятят при перемещТ1вании в 12 ч,охлаждают до , осадок отфильтровыьакзт; получают 1,2 г (87%) основания (1в) в виде оранжевого крисfa/0iiwrek6№йоррщка, т,плТ157-Д59°С (из ь№танола). НайденоУ%Гб5,9; Н 6,48; N 16,2; 57,13; - 24H79 5« S Вычислено,%: С 66,2; Н 6,67; N I6,2j 5 7,4. К раство ру 1 V основания (1в) в бензоле прибавлйбЧ избыток эфирного раст,9Р..;Й. И вь1павщИй осадок отфильтроЪьтают. По лучают 0,93 г (85-%) (1в) в биде красно-оранжевого кристаллическб1%ТЙ5рЪ1Й|Гй т1пл. 272-274 0 (из воды).5:. . Найдено, %: С 7,29. C HgpCrNjOS. Вычислено, %: CP 7,5. Хлоргидраты 4-пиперазинс -7,7-днме ТИЛ-9-ОКСО- 6,7,8,9- тетрагидропиримидо (4,5-в)(1,4)бензтиазина обладают Инг бируюшей активностью. по отношению к дигидрофслатредук- озе, синтезу нуклеин вых кислот, атак ё прогвл5Пбт опухолевое и Цй1гОтЬкейч1ёск6е действие Количественная характеристика биологической активности. а) Ингибирующая активностб по отношению к ДФР (иначе антиредукТШнЖя активность). Дигидрофолатредуктазу. (ДФР) выделяют из печени сЗаороШх животных (крыс). Активность ДФР определяют кaлopимeтpйЧёcкй rf M&tb0i ™ по методике (З J . Все соединений обшей формулы ( П ) обладают антиредуктазной активностью (см. табл. 1). Вещества Г1а-б) угнетают aKtHBHOdT ДФР на 75% в концентрации I-IO M. Соединение (1в) ( Rозначает |5-фвнилэтил) угнетает активность фермента ДФР на 30% в концентрации . , Ингибируюшую активность более высоких концентраций (Is) выявить не удалось плохой раствормости S воде. - В качестве эталона для сравнения антиредуктазной активности испытаны в аналогичных условиях йэвестгнёш7,7-диметилг 9-оксо- 6,7,8,9-тетрагвдропиримидо (4,5-е) (1,4) бензтиазины обшей формулы (I), содержашие в четвёртом положении мойекулы в качестве замести лей метоксильную, диметилаЪ«1йнЙуШ : группы или атом хлора (см. табл. 2). Как следует из сравнения даннйх табл. 1 и 2, антиредуктазная активности соединений обшей формулы ( l ) нескольк меньше активности соединений обшей фор мулы ( I ). Однако преимущество соединений ( П ) заключается в том, что их можно применять, в водном растВбрё, в то В14емя как соединения ( I ) необ: оди1«к) 1эастворйть в водной шелочи. Б) Цитотокрическое действие соединений обшей формулы ( О ) изучают в первичных культурах нормальной (серд-. це куриного эмбриона) и опухолевой (са кома 45) тканей. Оценку действия.препаратов проводят согласно мётОДШё 4 Все соединения проявл5пот цитЬтокси- . ческий эффект как в отношенив опухолё1вой, так и нормальной ткани, вызь1г ая роста культур s Кбнйёйтрайй 6 56 ...-V. . на 100% и в концентрации на.75-95% (для опухолевых тканей) и на 48-66% для нормальной ткани (см. табл. 3).г В качестве эталона для сравнения цйтотоксического действия испытаны в аналогичных условаяЗс й&естныё7,7-аимёТйл-9-оксо-тетрагвдропиримвдо(4,5- в) (1,4) бензтиазины формулы (Цб) и (Пв).. ....-. Для соединений (Пб) и (Ив) цитотЪксич ее кое действие находится ipHMepHO rfa том же уровне, Чгй1гдйясЬёдгаений обшей формулы ( 5 ) (см, табл. 4). В) Ингибирование сишгеза нутшеино6ь Х кислот. - -Соединения общей формулы ( fi ) изучают в отношении iS Влияния на синтез нуклеиновых кислот в 1эпухолёвых клегках. С этой целью используют адаптированные к росту Ч п vHro асцитныё ликфвденоза N К /Су. Количество нуклеиновых кислот (ДНК+РНК) определяют спектрофотометрически в первичных суспензированных кулйтурйх сбгПаснб методике С 5 .. В качестве критерия активности соединений используют среднюю эффективйуй д6зу7 вызьтаюифо тЪрмЬжёйие йрироста суммы нуклёиаовь1Х кислот в onyjibneBSiji клетках на 50%.-Все соединения обшей формулы ( П ) угнетают синтез нуклеиновых; кислот. Соединения (1а) и (16) тормозят прирост нуклеиновых кислот на 50% в концентрациях 25 мгк/мл, а соединение (1в) - в концёнтрациях 12,5 мкг/мл см. табл. 5). г) Противоопухолевая активность. При изучении протибоопухолёвых;: соединений общей формулы ( ( ) в опытах п vivo используют около бОО мышей и крыс. Исследование противоопухолевых свойств проводят на крысах с саркомой Иенсена и Мг-1 и мышах с саркомами 180, АК,37 (солидный варв ант) и лимфаденозом NK/l,vno методике 16 . Оценивают изменение веса опухоли у животных леченой группы по сравнению с контрольной (процент торможения роста опухоли) и изменение веса f тела подопытных животных в процессе лечения сравнительно С контрольными. Соединения (1а) и (1б) вводят внутрибрюшинно в изотониЧёСКоМ раСтворё хлорида натрия, соелинёйне (IB) - внутрь вмаслё. Соединение (1а) проявл5пот противоопухолевую активность в отношении capr f -.- f f SHfHaaa fXil .

; Йi Й - ® W 9 Данные исследования 695165ip цитртоксическо-го действия соецинений общей формулы (1). Т а б л и ц а 4

Данные исследования ингибирующето действия соединений. обшей фор1у1улы ( f )

на синтез нунпёиновых кислот .

20

Таблица5