1
Изобретение относится к области производства ферментов, а именно к активации биосинтеза пектиназы.
Известные способы получения ферментов преследуют цель оптимизации питательной среды для их продуцентов и предусматривают культивирование продуцирующих плесневых грибов . рода Aspergillus на питательной ереде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов, с последующим выделением ферментов. На этих средах образуется комплекс пектолитических ферментов - пЪктинэстераза, эндополигалактураноза и экзополигалактуроназа, отличающиеся как по субстратной специфичности, так и по менанизму действия 1.
Известные способы не обспечивают максимальный биосинтез пектиназы плесневыми грибами рода Aspergillus. В настоящее время не известны препараты, которые бы использовались как активаторы в производстве пектиназы очень важного фермента, широко применяемого в практике меховой, соковой и винодельческой промышленности.
Целью изобретения является интенсификация процесса образования пектиназы и повышение ее активности.
Поставленная цель достигается тем, что к оптимальной питательной среде посевом культуры гриба в среду вводят активатор биосинтеза фермента, в качестве которого используют 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 или 1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в количестве 0,0005 мг/л питательной среды.
Соединение 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 и 1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 применяются как стимуляторы роста растений. На микроорганизмы они действуют как ингибиторы роста при концентрациях 0,01-0,005 мг/л.
При уменьшении концентрации испытанных веществ до 9,0005 мг/л происходит ув-еличение биосинтеза ферментов пектиназы плесневыми грибами рода Aspergillus.
П р им е р 1, Глубинную культуру Aspergillus niger .выращивают на органо-минеральной среде следующего состава (г/л): пектин-20, лактоза-20, (МН4.)2НРОу- 7; KHgPO/- 1; КС -0,5; 05;FeS04- 0,001.
С целью активации биосинтеза пекТйназы в глубин11Ь1х условиях плесневым грибом Aspergiilus niger перёд посевон культуры в питательную среду указанного выше состава вводят 2,2-диметил-4тфосфонтетрагидропиранол-4 в дозах 0,0005 мг/л и 0,001 мг/л.
По истечении трех суток в фильтра (Ге культуральной жидкости определяют акт ивность пектиназы Си пектатньм ме тодом.
Результаты исптыаний представлены в табл. 1.
Таблица
Как
испытаний, введение небольшого количества (0,0005 мг/л) 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранола-4 в пита-. тбльную среду в 1,5 раза увеличивает образование, пектиназа.
П р И ме р 2, Промышленный штамм Aspergiilus awaroori kyльтивиpyют двумя способами: пери6дичес им и полунепрерывным. В питательную среду
Контрольная
1530
1960 среда без добавления активатора
С добавлением 2у2-диметил-4-фосфонтетрагид2200ропиранола-42800
Из табл. 2 видно, что добавление 2,2-диметил-4-фосфонтетрагйдропиранола-4 в питательную среду приводит к увеличению биосинтеза фермента и,
7; .- 0,5; КС1 - 0,5; 1; FeS04- 0,001; лактоза - 20; пектин 20 перед посевом вводят 0,0005 мг/л 2,2-диметил-4-фосф6нтетрагидропиранола-4.
Данные о биосинтезе пектиназы Aspergiilus awamori с использованием 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропираио ла-4 представлены в табл. 2.
Таблица 2
2100 (на 3 сутки)1970
15000(на 15 сутки).
2950(на 3 сутки) 7100 24700(на 15 сутки)
к ,увеличению продуцирующей способности гриба.
Пример 3. Глубинную культуру Aspergiilus niger П выращивают на
рргано-минеральной среде следующего состава (г/л): лактоза - 20; пектин 20; (ЫН4)г ; .- 1; КС1 0,5; Mg-SO - 0,5; 0,001.
С целью активации биосинтеза пектиназы в глубинных условиях плесневым грибом Aspergillus niger П. перед посевом культуры в питательную среду указанного выше состава вводят
Количество активатора, введенного в питательную среду, мг %
О,О(контрольный опыт)
0,0005
0,001 Как следует из результатов исИ(ыта- 25 НИИ, введение небольшого количества (0,0005 мг) 1, 2, 5-триметил-4-диметилф6сфоипиперидола-4 в питательную среду в 1,5 разаувеличивает образование пектиназы-важного фермента, ши-JQ роко используемого в производстве соков, виноградных и плодовоягодных вин, в кожевенной и меховой промышленности, а также в сельском хозяйстве как добавка в корма и комбикорма. Формула изобретения Способ получения пектиназы, предусматривающий культивирование продуци- 40 рующих ее микроорганизмов рода Asper1,2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в дозах 0,0005 мг и О ,001 мг/л, По истечении трех суток в фильтрате культуральной жидкости определяют .активность пектиназы Си пектатным методом.
Результаты сиспытаний представлены в табл. 3.
ТаблицаЗ
Активность пектолитическая, ед/100 мл
1780 2740 2270 gillus на питательной среде, содержашей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением фермента отличающийс я тем, что, с целью интенсификации процесса образования пектина-. зы и повышения ее активности, перед культивированием в питательную среду вводят 2,2-диметил-4-фосфонтетрагидропиранол-4 ИЛИ.1, 2, 5-триметил-4-диметилфосфонпиперидол-4 в количестве 0,0005 мг/% от объема питательной среды. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1;Микробы. - продуценты биологически активных веществ , Алма-Ата, 1971, с. 123.
