Синтетическая среда для замораживания и хранения спермы баранов Советский патент 1979 года по МПК A61D7/02 

Изобретение относится к области 1кивот15оводства и может быть использовано для длительного хранения спермы с целью рационального и долгосрочного использования .пле14енных баранов-прои зв одителей, Применение искусственного осеменения в овцеводстве способствует более интенсивному использованию на иболее ценных, проверенных по качеству потомства баранов-производителей и значительноускоряет качестве ное улучшение поголовья. Длительное сохранение спермы дас возможность полнее использовать про йзводителей-улучшателей, особенно в условиях госплемстанций. Известен способ глубокого замора живания спермы баранов 1, Для разбавления спермы используе ся среда следующего состава: вода дистиллированная - 50 мл; глюкоза,4 Г; глицерин динамитный - 2 мл; токоферилацетат 10%-ный в виде масляного раствора витамина Е) 1 г-ш желток куриного яйца - 10 мл. В состав этой среды входят.питательное вещество (глюкоза), вещества, оказьшающие защитное действие при резком понижении- температуры (желток, глицерин)| и антиоксидант (токоферилацетат). Такой состав дает возможность сохранять сперму в течение нескольких месяцев. Однако известная I среда недостаточна, эффективна. Известна также среда следующего состава: сахароза - 8 г; глюкоза 0,6 г; зтилен иаминтетрацетат - 0,8г; трис-оксимётиламинометан - 0,28 г; глицерин динамитный - 4 мл; стрептоцид бе.пый растворимый - 0,2 г; мономицин - 30 тыс, ед.; бутокситолуол БОТ) - 20 мл; вода дистиллированнаядо 100 мл 2. Кроме того, в состав этой среды введеныбактериологические средства (стрептоцид и мономицин), в качестве оксиданта используется бутокситолуол (БОТ), Этилендиаминтетраацетат вводят в среду для понижения содержания в сперме кальция и магния, избыто к которых усиливает аглютинацию спермиев. Этилендиаминтетрацетат также тормозит активность ферментов и понижает обмен веществ в сперме, способствуя лучшей выживаемости спермиев. Введение названных компонентов в состав среды дает возможность сохранять сперму в течение нескольких лет о

Широкое использование этого состава ограничено труднодоступностью и дороговизной отдельных компонентов этого состава (трис-оксиметиламинометан,бутокситалуол),а используемый при этом активный антибиотик {мономигщн ЗО тый. ед) угнетает активность спермы и ухудшает переживаемость.

Цель изобретения - .сохранение высокой биологической активности спермиев. :..

Для достижения этого в среду, содержащую сахарозу, глицерин, этилендиаминтетрацетат, желток куриного яйца, антиоксидант и бактериостатическое средство, вводят калий фосфорнокислый однозамещенный, а в качестве бактериостатического средства используют более мягкие антибиотики левомицетин и полимиксин. Калий фосфорнокислый вводят в среду для стабилизации содержания АТФ (аденозинтрифосфорной кислоты) в спермиях и увеличения активности, переживаемости и оплодотворяемости. Глюкозу в предлагаемой среде полностью заменяют сахарозой и количество ее (дла снижения гипотонического действия глицерина) увеличивают до 10%.

Состав предлагаемой синтетической антиоксидантной среды следуквдий: вода дистиллированная - 45-55 мл; сахароза 4-6 г; натриевая соль этилендиаминтетраацетата - 0,04-0,4 г; ка™ ЛИЙ фосфорнокислый однозамеиенный 0,04-0,20 rj глицерин - 2-3 мл; желток куриного яйца - 10-15 мл; токоферилацетат 10%-ный (масляный раствор витамина Б) - 1-2 мл; левомицетин - 13-25 тыс. ед; полимиксин 13-25 тыс.ед.

Пример. Компоненты синтетических сред отвешивают на аналитических весах Чашку весов перед взвешиванием реактивов протирают спиртовым тактовом. Воду, используемую для приготовления среды, предварительно кипятят для удаления растворенного кислорода, а затем остужают до 4045°С. В 100 мл подготовленной таким образом воды растворяют 25С-500 тыс, ед. леэомицетина и такое же количество прлимиксина. После полного растворения антибиотиков берут 50 мл этого раствора и в него поочередно всыпают 5 г сахарозы, 40 мг натриевой соли этилендиаминтетрацетата и 50 мг калия фосфорнокислого однозгилещенного. Каждый раз после добавления компонента колбу с раствором покачивают до полного растворения всех компонентов. Затем в среду добавляют 10 мл ,яелтка куриного яйца ярко-оранжевой скраски, предварительно размешав его в 1 м, раствора токоферилацетата, ЯЯца перед использованием тщательно

моют, протирают спиртовым тампоном, после чего раскалывают пополам, сливают белок в стаканчик, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги. Лучше использовать стерильные фильтры диаметром 9 см. Желток вносят в среду, тщательно перемешивают, добавляют глицерин, после чего среда готова для разбавления спермы. Среду обычно готовят до получения семени и, до употребления хранят в специальных водяных ваннах или термостате при 3540°С. Среда должна быть использована в течэние 1-2 ч с момента ее приготовления.

Министерство сельского хозяйства. СССР провело государственные испытания пригодности замороженной спермы, приготовленной на предлагаемой среде для искусственного осеменения овец. Проведенные испытания показали,что предложенная среда обеспечивает высокую активность спермнев после первичного осеменения (58%, колебание 32-63%) . Оплодотворяемость овец по ягнению составила в среднем 48,8% (колебание 42,6-54,8%). На 100 окотившихся маток получено по 137 ягнят.

Синтетическая среда по результатам .проведенных испытаний оказалась пригодной для замораживания спермы баранов всех пород, разводимых в Казахстане.

Научно-технический совет Министерства сельского хозяйства СССР рекомендовал способ низкотемпературного замораживания и длительного хранения спермы баранов с использованием синт етической антиоксидаятной бактериологической среды для широких производственных испытаний в 1978-1980 гг на госплемстанциях, племпредприятиях и на основных пунктах искусственного осеменения овцеводческих хозяйств РСФСР, Украинской ССР, Узбекской ССР, Казахской ССР и Киргизской ССР.

Формула изобретения

Синтетическая среда для замораживания и хранения спермы бараиов,включакиаая воду, сахарозу, натриевую соль этилендиаминтетраадетата, глицерин, желток куриного яйца и токрферилацетат, отличаю таяся тем, что, с целью сохранения высокой .биологической активности спермиев, среда дополнительно содержит однозамещенный фосфорнокис1Шй калий, левомицетин и полимиксин при следующем соотношении компонентов: сбисароза 4-6 г; натриевая соль этилендиаминтетраацетата - 0,04-0,4 г; глицерин 2,0-3,0 4д; желтоккуриного яйца 10-15 мл; 10%-иый раствор токоферилацетата - 1-2 мл; калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,04-0,20 г; левомицетин - 13-25 тыс.ед. полимиксин - 13-25 тыс.ед,; вода - 45-55 мл. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе5 1. Касымов К.Т, Ашимов ж. Оы,еводство, 1975, 8, с. 9. 2. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение criepf.«j производителей. - Киев. Урожай, J978, с. 183.