Среда для криоконсервации семени баранов Советский патент 1989 года по МПК A61D7/02 

(Л

с:

Изобретение относится к области сельскохозяйственного животноводства ,в частности, к искусственному осеменению. Целью изобретения является повышение криорезистентности гамет и стерильности семени. Среда содержит, мас.% : лактозу 7,8-9,6

глицерин 2,4-5,0

желток 8,2-14,2

общие липиды актиномицетов 0,008-0,021

воду бидистиллированную остальное. Среда позволяет повысить подвижность гамет после оттаивания на 0,75 балла, выживаемость на 1,3 ч, антиокислительную активность липидов гамет и их санитарные показатели по сравнению с известной средой ЛГЖ. 6 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственному животноводству, в частности к искусственому осеменению овец.

Целью изобретения является повышение криорезистентности гамет и стерильности семени.

Пример. Для получения среды было подготовлено 5 вариантов соста- . ва среды (табл. 1), следующим образом.

В кипяченой бидистиллированной воде растворяли соответствующее количество лактозы, стерилизовали 10 мин на кипящей водяной бане, растворяли глицерин, охлаждали до , а затем растворяли соответствующие количества желтка и общих липидов актиномицетов.

Общие липиды актиномицетов (ОЛА) вьщеляли из биомассы актиномицетов.

например Асе. griseus, экстракцией смесью хлороформ: этанол (2:1) по методу Фолча.

Биомассу Асе. griseus вьфащивают как кормовую добавку на биохимических заводах по традиционной технологии на стандартных средах. Например, использовалась культуральная среда, содержащая муку кукурузную, мелассу, селитру аммиачную, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокис- льш (рН 7,2-7,8) и штаммы 15, 307-Ф (ВНИИГ), 420 и др. Выход ОДА из био- ( , массы 4,5-13%.

Каждьй вариант среды испытали в ла бораторных условиях на подвижность, выживаемость и абсолютный показатель выживаемости деконсервированных га- :мет при 38°С. Результаты представлены в табл. 2.

1

)

00

4;

00

со

Оптимальный состав лактозо-ОЙА- глицерино-желточной среды (ЛОЛАГЖ) для криоконсервации семени баранов приведен и табл. 3.

Этот состав был испытан в -сравнении с известной ЛГЖ-средой, а также с добавлением в эту среду спермоса- на-3 (50000 ед. на 100 мп среды), которьш утвержден в качестве антимикробного препарага для обеззараживания семени производителей сельскохозяйственных животных. Эффективност разработанной среды оценивали по устойчивости гамет к температурному шоку, подвижности гамет после разбйв ления, охлаждения и оттаивания, вы- живаемости и абсолютному показателю выживаемости деконсервйрованиых га- мет при 38°С, сохранности акросомы гамет после охлаждения и замораживания-оттаивания семени, антиокисли- ,тельной активности липидов гамет и антимикробному действию. Результаты показали, что ЛОЛАГЖ-среда обладает высоким криозащитным и антимикробным действием, обеспечивая высокую эффективность криоконсервации.

Характеристики гамет при различных средах приведены в табл. 4.

Антиокислительная активность липидов гамет приведена.в табл. 5, ; Ветеринарно-санитарные показатели семени представлены в табл. 6.

Высокий криозащитный эффект ОЛА, обусловлен их специфическим влиянием на липидный бислой биомембран, кото

6,6 7,8 8,8 9,6 10,4

5

10

15

20

25

30

рое сопровождается повышением акти- окислительной активности липидов гамет. Кроме этого, они обладают большим антимикробным действием. ; В лабораторных условиях на протяжении ряда лет испытывались разные штаммы актиномицетов, а также питательные среды самого разнообразного состава и было установлено, что эти факторы влияют на выход антибиотика и ОЛА, но отмеченные колебания в качественном и количественном составе ОЛА не оказьшали существенного влияния на их актиокислительиые и антимикробные свойства. Поэтому эффективность ОЛА в указанных дозах не зависит от штамма и среды культивирования. .

Формула изобретения

. Среда для криоконсервации семени баранов, включающая лактозу, глицерин, желток куриного яйца и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения криорезистентности гамет и стерильности семени, среда дополнительно содержит общие липиды актиномицетов при следующем соотно-, шении ингредиентов, мас.%: Лактоза

35

Глицерин Желток Общие липиды актиномицетов Вода бидистил- лированная

7,8-9,6 2,4-5,0 8,2-14,2

0,008-0,021 Остальное

Таблица 1

. 4,4

8,2

11,5

14,2

16,7

0,001 0,008 0,015 0,021 0,03Q

До100

До100

До100

До100

До100

Коэффициент устойчивости гамет к температурному шоку, у.е.

Подвижность гамет (балл) после разбавления охлаждения-оттаивания

Выживаемость деконсервированных гамет при 38 С,ч 6,21iiO,29

Т а б

лица

Таблица 3

Таблица 4

0,36t 0,022

7,32tO,16 7,11 to,12 4,07t 0,22

7,57±0,30

Дродолжение табл.4

ПоказателиВариант среды

ЛГЖЛГЖ + спермосан-3 | ЛОЛАГЖ

(контроль) г

Абсолютный показатель выживаемости деконсервиро- ванных гамет при 33 С, у.е..11,21tO,7411,23±0,5516,54t1,12

Сохранность акросом гамет (%) после охлажде-66,16±0,9067,91± 0,97.70,45tO,82 ния-оттаивания 27,5210,95 28,,75 35,2411,45

р 0,05. р 0,01. р - 0,001.

- :,

Таблица 5

Вариант среды Антиокислительная Активность

липидов замороженно-оттаян- ных гамет, ч/г./мл

ЛГЖ (контроль)2633,2±146,9

ЛГЖ + спермосан-37153, It 682,1

ЛОЛАГЖ8857,8i709,1

р 0,0К

Таблица 6

Вариант среды Ветеринарно-санитарные показатели замороженнооттаянного семени (в 1 мл)

Общее кол-во Кишечная пилочка Грибы микроорганизмов

ЛГЖ (контроль)2397,5± 117,13 111,5±1,911,01:0,82

ЛГЖ + спермо сан-38,0 ±4,

ЛОЛАГЖ5,5 ±1, .О

р 0,001.

Составитель И.Марченко

Редактор В.ДанкоТехред А.КравчукКорректор Т.Колб

I

Заказ 4482/5Тираж 643 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретен иям и открытиям при ГКИТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул, Гагарина,101