Способ получения смеси аминокислот Советский патент 1979 года по МПК C07C227/30 A61K31/198 A61P3/02 

1

Настоящее изобретение относится к усовершенствованному способу получения смеси аминокислот, не содержащих фенилаланина, используемых для лечебного питания.

В настоящее время в промьошленности лечебные аминокислотные смеси получают кислотным гидролизом , белка, в частности крови крупного рогатого скота или казеина, соляной или серной кислотами с последующей нейтрализацией кислоты одним из известных способов и удалением фенилаланина их деминерализованных гидролизатов обработкой их активированным углем. Содержание фенилаланина по требованиям временной фармакопейной статьи в них не должно превышать 0,1% от веса сухих вещест

Известен способ получения лечебных смесей аминокислот путем очистки гидролизата белка от фенилаланина с помощью активированного угля при нагревании гидролизата с углем при 75-80° в течение часа 1).

Метод удаления фенилаланина с помощью активированного угля требует предварительной обработки угля, заключающийся в обработке последнег уксусной или азотной кислотами с

последующим длительньм отмыванием угля от следов кислоты, что вызывает большой расход воды. Во всех случаях уголь используется однократно, так как регенерация его длительна, трудоемка и экономически нецелесооб-разна. Без такой предварительной обработки угля кислотами потери ценных аминокислот повышаются до 45%.

0

В связи с этим наиболее близким к предлагаемому способу по технической сущности решением, является способ получения лечебной смеси аминокислот (гипофената), путем обработ5ки деминерализованного с помощью анианита продукта поликонденсацин фенилендиамина и резорцина с формальдегидом, гидролизата крови, представляющего собой кислотный гидроли0зат jjpOBH крупного рогатого скота, путем подкисления его до рН 4,3 уксусной кислоты с последующей обработкой гидроЛизата углем, активированным в вакууме 2J и кипящей водой при

5 70-75с и выделением целевого продук а путем сушки.

Недостатками прототипа являются.

1. Использование кислотного гидролизата лишь после предварительной деминерализации его любым из известных путей, что представляет собой отдельную стадию обработки гидролизата и часто влечет за собой необходимость немедленного высушивания деминерализованного гидролизата изза возможности быстрого микробного заражения. 2.Потери ценных аминокислот (снижение выхода целевого продукта до 40-45%) на стадии деминерализации, а также при обработке деминера лизованного гидролизата углем. 3.Недостаточная очистка целево го продукта от фенилаланина и его пептидов. Содержание фенилаланина в лечебной смеси аминокислот, вьаделен ной по способу, описанному в прототипе , превьшало 0,1% и составляло 0,24-0,35%, а содержание фенилаланина в пептидах составляло до 10%. Целью изобретения является устра нение этих недостатков, а именно: п вышение чистоты и выхода целевого п дукта - лечебной смеси аминокислот. Указанная цель достигается тем, кислотный гидролизат казеина подвер гают деминерализации на макропористом поликонденсационном иомите и по лученный деминерализованный гидролизат затем пропускают через сульфокатионит в водородной форме с пос ледующим пропусканием водного раствора аминокислот через ионит поликонденсационного типа, Описываемый- способ имеет следующие технологические стадии, включающие оптимальные условия проведени.я процесса. 1.Кислотный гидролизат казеина пропускают через колонку ;с микропористым анионитом поликонденсационного типа в гидроксильной форме, при соотношении гидролизата и анионита (1:2,2-1:2,5)0 последующей промывкой двумя объемами дистиллиро ванной воды. 2.Пропущенный через анионит гид ролизат затем поступает на сильнокислотный сульфокатионйт; в водородной форме с последуквдей промывкой катионита дистиллированной водой. 3. Десорбцию аминокислот с катио нита осуществлйют 4%-ным раствором аммиака до полного вытеснения аминокислот. 4.Упаривание полученного водно аммиачного раствора аминокислот про водят досуха для более полного уда ления аммиака, 5.Сухой остаток аминокислот растворяют в дистиллированной воде для получения 4,5 - 6,0%-ного раст вора, 5, Полученный раствор аминокисл пропускают через макропористый ани -нит поликонденсационного типа, отмытый от щелочи водой до рН 8,9-9, в соотношении раствор и анионит (1:1,4) с последующей промывкой во- ои и отбором фракций, имеющих погощение в УФ-спектре не более ДзБвнмГ ,11, что свидетельствует о высокой тепени очистки от фенилаланина, 7, Для получения целевого проукта отобранные нингидринположительые фракции аминокислот высушивают вакууме досуха при температурах, е превышающих 37-42С. Пропускание недеминерализованного гидролизата через колонку с макропористым анионитом - продуктом поиконденсации м-фенилендиамина и формалина с резорцином в гидроксильной форме позволило не только ег«1инерализовать гидролизат, но и удалить все пигментные, гуминовые примеси, снизить содержание фенилаланина в 25-33 раза по сравнению с исходим содержанием его в гидролизате, а также удалить высокомолекулярные пептиды. Для отделения смеси аминокислот, находящейся в гидролизате, от сопутствующих примесей таких компонентов гидролизата, как сахара и аминосахара, а также анионов органических кислот и катионов металлов/ в частности катионов железа, попадающих в гидролизат из аппаратов, гидролизат пропускают через сильнокислотный сульфокатионйт в водородной форме. Чем больше расходуется воды на промывку к aтиoнитa, тем меньше остается в смеси с1минокислот посторонних примесей. Удаление из водно-аммиачной смеси аминокислот аммиака необходимо для того, чтобы в очищенной смеси аминокислот было минимальное содержание аммиака, перед пропусканием смеси на колонку с анионитом и значение ph раствора не превышало 6-7, Окончательное удаление фенилаланина и его пептидов происходило на стадии обработки смеси аминокислот при пропускании ее через колонку с макропористым анионитом ИА - 1р в гилроксильной форме. Пример 1, 100 мл солянокислого гидролизата, казеина с рЯ«0,2, содержанием ионов хлора. 6,5%, цветностью при 460 нм 0,44, содержанием аминокислот по данным аминокислотного анилиза 60,07%, в том числе фенилаланинд. - 1,7%, тирозина - 2,5% и триптофана - 0,04%, пропускали через колонку размером 34x400 мм, заполненную 220 мл анионита ИА-1р в гидроксильной форме. Скорость пропускания 6-9 мл/см ч, Анионит отмыли от щелочи водой до , значения рН 8,9-9,2, Аминокислоты собирали фракционно по 25 мл, отсекая нингидринотрицательные фракции. После окончат ния пропускания гидролизата анионит промывали 250 мл дистиллиро.ванной воды, продолжая собирать фракции аминокислот до значения рН 1,Ь. Фракции, содержащие аминокислоты со значением рН не ниже 1,5, объеди ли и определяли остаточное содержание ионов хлора. Оно составляло ,07%, что соответствовало зна чению рК 3,2 - 3,6. Содержание ароматических аминокислот, определяемо по поглощению спектрофотометра при длине волны 258 нм, уменьшалось ло сравнению с исходным в 25 - 33 рЬза а цветность составляла 0,02 - 0,06 при зеленом светофильтре. Пропущенный через анионит гидрол зат (250-300 мл) затем поступал на колонку с сильнокислотным сульфокатионитом (100 мл) со скоростью 0,5 МП/см.ч, катионит промывали 250 - 300 мл дистиллированной воды. Вытеснение аминокислот с катионита осуществляли 4%-ным водным амм аком, собирая нингидринположительны фракции. Упаривали водно-аммиачную фракцию аминокислот в вакууме до пол ного удаления аммиака, добавляя в колбу дистиллированную воду и вновь упаривая досуха в вакууме, а роторно Испарителе на водяной бане при 3742 0. Сухой остаток «ашнокислот 4,65,5 г растворяли в дистиллированной воде (100 мл) и пропускали через колонку с анионитом ИА-1р в гидроксильной форме (28х49р мм, 140 мл) со скоростью 6-9 мл/см.ч. Анионит должен быть отмыт до значения рН 8,9 9,0 и не иметь поглощения (при 258 нм). После окончания пропускания раствора аминокислот, анионит промывали дистиллированной водой 250 - 300 мл. Аминокислоты собирали, отсекая фракции с поглощением Д25в 0,1. Для получения целевого продукта, отобранные нингмдринположительные фракции с отсутствием поглощения при 258 нм (кроме вышеуказанных эначений) объединяли и. высушивали в вакууме при 37 - 42 на водяной бане, быход аминокислот по выделению из гидролизата казеина от исходного содержания составлял 60 - 55%, с содержанием фенилаланина менее 0,1%. Технико-экономические показатели. Описываемый способ позволяет значительно повысить чистоту лечебной смеси аминокислот в целевом продукте содержание фенилаланина не превышает 0,1%, что в 2 - 3 раза превышает чистоту по фенилаланину по сравнению с прототипом. Кроме того, особенно важно, что в полученной по предлагаемому способу смеси аминокислот не остается пептидов фенилаланина, что доказывается кислотным гидролизом целевого йродукта и последующего аминокислотного анализа полученного гидролизата. Помимо этого выход целевого продукта от исходного содержания в гидролиэате казеина составляет 5560%, что на 25 - 30% вшие, чем в продукте, получаемом по прототипу. минокислотньй состав целевого проукта, выф|еленного по описываемому способу и продукта после кислотного гидролиза представлены в таблие.

6,56

овая кислота

2,75

2,92

1,86 0,26

0,65 0,90

1,10 0,26

0,60 9,52 7,50 9,50 Формула изобретения Способ получения смеси аминокислот из кислотного гидролизата белка путем его деминерализации с помощью анионита с последующим удалением из гидролизата фенилаланина и выделением целевого продукта путе сушки в вакууме, отличающи с я тем, что, с целью повышения качества и выхода целевого продукта в качестве анионита используют макропористый поликонденсационный иони

Продолжение табл. и полученный деминерализованный гидролизат затем пропускают через сульфокатионит в водородной форме с последующим пропусканием водного раство,ра аминокислот через ионит поликонденсационного типа. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.ПатентПольши 51.391, 1966, кл. ЗО h 2/04.2.Авторское свидетельство СССР № 271720, кл. А 61 К 34/15, 1972 (прототип).