Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов Советский патент 1982 года по МПК A23J1/18 

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, в частности к способам получения смё-, си аминокислот и низших пептидов.

Известен способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий кипячение дрожжей в кислом растворе в присутствии катионита Ку-2 с последукяцей десорбцией аминокислот С11.

Недостатком этого способа является низкое качество целевого продукта.

Наиболее близким техническим решением к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий автолиз дрожжей при нагревании в присутствии плазмолизующего и стерилизующего агента с последующей очисткой автолиз&та путем пропускания его через анионообменную смолу. :огласно известному способу очистку ;автолиза проводят путем пропускания автЬлиэата через слабоосновной макропористый анионит Иа-1р и катионообменную смолу КУ-2 в водородной форме, элюциеП аминокислот и низших пептидов со смолы Ку-2 аммиаком, упариванием элюата и сушкой целевого продукта С2 .

Однако процесс выделения и очистки целевого продукта является многоступенчатши, что приводит к потерям продукта в процессе выделения на каждой стадии; большая длительность процесса выделения и очистки целевого продукта в целом и в особенности

10 условия проведения фильтрации автолизата через смолу ИА-1р при рН 5-6 приводит к неизбежному включению в технологические стадии неоднократшлх стерилизаций автолизата из-за возмож15ности бактериального иифицирования растворов, содержаидах биологически активные вещества; кроме того, продукт содержит в качестве примеси нуклеинов|ле кислоты до 1%, тогда

20 как содержание их не должно превышать 0,5%; продукт загрязнен красяIqи вI веществами.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта, а 25 также упрощение и удешевление процесса. ,.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения смеси 1минокислот и низших пепти30дов, предусматривающему автолиз дрожжей при нагревании в присутствии плазмолизующего и стерилизующего агента с последующей очисткой автолизата путем пропускания его через анионообмеиную смолу, перед очисткой автолизат обрабатывают щело чным агентом до рН 10-13, фильтруют, а из анионообменных.смол используют высокоосновной анионит АРА в ОН-форме. Сущность способа заключается в том, что обработка автолизата щелочным агентом приводит к быстрой флокуляции высокомолекулярных фрагментов белков, оставшихся после цеитрифугирования мелкодисперсных клеточных остатков. Кроме того, поувышение рН до величины 10-13 позво-, ляет исключить стадию стерилизации, так как в этих условиях вероятность бактериального .заражения мала. Пропускание щелочного автолизата через высокоосновный анионит типа А в ОН-форме позволяет отделитьнуклео тиды, олигонуклеотиды, не подвергшиеся разрушению при автолизе, пигментирующие вещества. Ионообменная очистка осуществляется в одну стадию. При этом амино кислоты и низшие пептиды не сорбиру ются анионитом. Пример. В промытый и просте рилизованный аппарат заливают 250 мл дистиллированной водаа, нагревают до 50°С, загружают при перемешивании 1 кг свежих прессованных дрожжей, добавляют 1,2 мл толуола. Аппарат герметически закрывают, нагревают до 48°С и при непрерывном перемешив нии выдерживают при этой температуре 20 ч. Автолизат,.. содержащий 58 г/л аминокислот, 20 г/л низших пептидов, 12 г/л нуклеиновых кислот, клеточJ ыe остатки 160 г/л и пигментирующие вещества,центрифугируют при 8000 об/м в течение 10 мин. Осадок промывают 320 мл воды и снова центрифугируют .при 8000 в течение 20 мин. Супернатант и промывные воды объе диняют и обрабатывают 25%-ным раствором aMNniaKa до рН 11,0. Образовавшийся осадок мелкодисперсных кле точных остатков, высокомолекулярных фрагментов белков, через 10 мин отфильтровывают на бумажном фильтре. Фильтрат пропускают через колонку с высокоосновным анионитом АРА в ОН-форме (80 г, д 33 мм, и 350 мм) со скоростью 60 мл/ч. Анионит npONttilвают 300 мл аммиачной воды при рН 11,0, присоединяют их к раствору после прохождения автолизата через анионит, упаривают под вакуумом и . высушивают. На 1 кг прессованных дрожгкей выход атлинокислот из низших пептидов составляет 68 г. Из биомассы рожжей при этой схеме выделения целевого продукта можно получить также эргостерин и смесь нуклеиновых кислот. Полученная смесь аминокислот и низших пептидов содержит в своем составе все незаменимые аминокислоты, а соотношение незаменимых аминокислот (Н) к общему азоту (О) соответствует требованиям, предъявляемым к высокопитательным смесям. Определение аминокислотного состава проводят с использованием аминоанализатора фирмы ЛКВ с- точностью по 3%. В таблице приводится сравнительная характеристика смеси аминокислот и низших пептидов, полученной известным и предлагаемым спрсобс ми. Выход целевого продукта на 1 кг прессованных , дрожжей, г Содержание низших пептидов,% Содержание нуклеиновых кислот, % Зольность,% Тяжелые меОтсутстОтсутстталлы, кач. вуют вуют Содержание незаменимых аминокислот, г/1бг общего азота Изолейцин Лейцин Фенилалании Тирозин Триптофан Метионии Цистинцистеин

Продолжение таблицы Таким образом, предложенный спо-. соб позволяет повысить выход целевого продукта на 13-26% по сравнению с известным, а также сократить расход реактивов и время выделения про- дукта за счет резкого снижения в нем концентрации нуклеиновых кислот.

Формула изобретения

10

Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий автолиз дрожжей при нагревании в п{жсутствии плазмолизующего и стерилизукнцего агента с последуюг щей очисткой.автолизата путем пропускания его через анионообменнуто смолу, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, а также упрощения и удешевления процесса, перед очисткой автолизат обрабатывают щелочным агентом до рН 10-13 и фильтруют, а из анионообменных смол используют высокооснрвной анионит АРА в ме.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР 355219, кл. С 12 D 13/06, 1972, 2. Авторское свидетельство СССР 602543, кл. С 12 D 13/06, 1978.