Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов Советский патент 1978 года по МПК C12D13/06 A23J1/18 

Последующим вьаделейием продуктов; upw чем автолиз дрожжей проводят в течение 15-20 ч, выделение продуктов осуществляют путем последовательного про пускания автолиэатасначала через ани онообменную смолу, а потом через ка- тионообменную смолу в Н - -форме. В ка чествв анионообменной смолы используют макропористый анионит . Пример. Оптимсшьное время автолиза. В промятый и простериЛизованнЕ й аппарат- заливают 12 л дистиллированной воды, которую нагревают до , Затем порциями, при перемеошвании за гружают 50 кг свежих прессованных дрож жей, нарезанных на куски по 100-150 г и добавляют 0,6 кг толуола. Аппарат . ге1 |етически зак швают, реакционную массу нагревгиот до 4S-55 С и при этой теьвтературе в непрерывном перем оив«нии ведут автолиз. Пробы автолизата во времени (1/1000 часть) центрифугируют, промывают остаток клеточных оболочек (2,5 вес.ч. воды на 1 вес.ч. оболочек) и снова центрифугируют, фуга т и прамланые воды объединяют, ионо обменную очистку автолизата осуществляют пропусканием его через последовательно соединенные колонки. Первая колонка с анионитом ИА-1Р в гидроксильной форме (10-12 мл смолы) служит для обесцвечивания , гидролизата удешения высших пептидов и нуклеиновых компонентов и вторая - с сильнокислотным катионитом в водородной фор ме (КУ-2Х8Ч.с. (30-32 мл) - для удаления анионов киелрт, Сахаров и минеральных компонентов. Анионит проьоавают 40. мл воды, после чего колонку отсоединяют и используют лля, десорбции нуклеотидов с помощью 200 мл5%-нр го раствора ав 1миака, ко о{жзе затем высушивают на распылительной сушилке. В дальнейшем анйонит регенерируют обработкой его 0,5 Но едким натром с последуюошм отмываничем анионита дистиллиров нной водой. Катионит КУ-2х8 промывают 200 мл воды. Десорбцию аминокислот проводят 150-200 мл 1-1,5%-ного раствора аммиака (проба по нингидрину). Объединяют ;фракции аминокислот до значения la фракции . со значением рН 4,0 подсоединяют к вакууму для удаления акмиака, после чего фракции объединяют и смесь аминокислот высушивают до постоянного веса. В табл.1 приведена зависимость выхода смеси аминокислот и низших пептидов , а также содержания аминокислот ,и 1(1ептидов от времени автолиза. Анализ аминокислот проводят на ами нокислотном анализаторе Хитачи KUA-ЗБ с точностью 3%. Питательную ценность оценивают от несением незаменимых аминокислот (Н) общему азоту (О) в-смеси (HsO) , выаженную в граквдах незаменимых аминоислот на 1 г общего азота. У высокопитательных смвсеЯ отноение Н:О составляет около 3. При этом для оптимальных аминокис отных препаратов для внутривенного итания содержание незаменимых амиокислот должно составлять 45-50% обего содержания аминс ислот. П р и м е р 2. Технологический приер. В промытый и простерилизованный апарат из нержавеющей стали, оборудоанный устройством для нагрева и охаждения и мешалкой, заливают 12 кг истиллированной воды, которую нагревают до . .Затем при перемешивании, отдельыми порщ1ями загружают 50 кг свежих рессованных дрожжей, нарезанных на Кусочки, по 100-1Ьа г. По окончании загрузки дрожжей в аппарат заливают 0,6 кг толуола и аппарат герметически закрывают. , ; Реак1Еионную смесь нагревгиот до 4555 С и при непрерывном перем@1ШванииЬ выдерживают при указанной температуре 20 ч. После окончания автолиза клеточные оболочки удаляют центрифугированием. Центрифугат по 1вергёиот стерилизации в аппарате на 1UO л с меигалкой при в течение IU мин, после чего его пропускают со скоростью й10 л/ч через две последовательно соединенные между собой колонки с внутренним диаметром 150 мм, первая из которих заполнена 12 л набухшего в воде адсорбента ИА-1Р в гидроксиЛьной форме (или хлорофо1 1е) , а вторая сильнокислотным катионитом 30-32 л КУ-2Х8В Н -форме. Затем колонны промы:вают 4U л дистиллированной воды, разъединяют колонны и дополнительно прс швают вторую колонну 20U л дистиллированной водой. После пролвлвки адсорбента ИА-1Р (в первой колонне) его регенерируют 150 л 2%-ного раствораNaOM и 200 л дистиллированной воды. .Аминокислоты и низшие пептиды сорби ованныа на катионите КУ-2Х8 ЧС, десорбируют, пропуская через колонну 200 л 1 -ного раствора аммиака, причем собирают в отдельные емкости фракцик раствора в аминокислот и пептидов, именвдих кислую реакцию (,0) и нейтрально-щелочную фракцию (). Последняя фракция, кроме аминокислот и пептидов, содержит в своем составе и аг-дмиак. Каждуюфракцию отдельно сгущают в вакуумвыпарном аппарате: кислую э 3-4 раза, нейтрально-щелочную - в 6--Ь раз. Сгущенные фракции объединяют, стерилизуют, как и в первом случае, и, высушивают на распьшительной су1аилИз 50 кг прессованных пекарских дрожжей получают 2,6-3,0 кг чистой смеси a oIHoкиcлoт и низиШх пептидов. 0,4-0,5 Ki смеси нуклеиновых ксмпонентов и 35-45 г чистого эргостерина. Смесь аминокислот - аутолизин имеет влажность 5-10%, содержит 65-75% свободных аминокислот, менее 25% низших пептидов, менее 1% нуклеиновых компонентов, менее 0,5% Сахаров, зольность менее 1,0%; тяжелые металлы от- Ю сутствуют. Как показали исследования, получаемая таким образом скесь аминокислот может быть использована как в пи- 15 щевой промышленности, так и в медицине для лечебного питания, в там числе и для парентерального. . Аутояиэин содержит в своем составе 2) все незаменимые и замениьше );С-амимокислоты в относительных количествах,харё1Ктарных для смесей, обладаюВШХ высокой питательной ценностью. В табл. 2 приведен сравнительный аминокислотный состав аутолизина яичяого белка, принятого экспертной группой ФАр/ВОЗ за-образец и одного из пучшяЯ в мире препаратов для парентерального питания аминосола. Технология производства предлагаемой высЬкопитательной смеси аминокислот является экономически выгодной, так- как не требует применения дополнительных дорогостоящих .ферментов и специального аппаратурного оформления (кислотоупорного материала)/так как гидролиз собственньали ферментами клетки дрожжей можех быть осуществлен на любом современном биохимическом заводе. Процесс чрезвычайно прост в технологическом отнесении и может быть легко и быстро осуществлен is промиюшенности. Полученная смесь аминокислот и низших пептидов по питательной ценности не.уступает гидролизату яичного белка аминосолу. От отечественных препаратов (аминопептид, Л-103, гидролизин, аминокровин, фибриносол) смесь аминокислот и низших пептидов, названная условно аутолизин, отличается большей глубиной гидролиза {ссще ржание низших пептидов не более 25%) и более высокой питательной ценностью.. Таблица

Продолжение табл. 1

Н If % к общему содержанию амино50,4 кислот

Содержание гшвнокислот в яичном белке к некоторых

аминокислотных препа1 атах в граммах на 16 г общего

азота (О)белка или акшнокислотной смеси

Н-общее содержание незаменимых акшнокислот г/16 г N

Н, в % к общему содержанию аминокислот 46,0

Таблица 2

59,5

56,0

51,3

49,5

45,0 49,9 51,3 52,6 50,9

Формула изобретения

Источники информации, принятые во внимайи При экспертизе:

Патент США I 2272982,кл. 195-37 1942

U Авторское свидетельство СССР 212935, кл. С 12 и 13/00, 1968.

« . свидетельство СССР 3.40689, кл. С 12 В 13/02, 1969.

« чк;4« °Р ° свидетельство СССР 207191 кл. С 12 Р 13/06, 1968.