Способ получения антител Советский патент 1980 года по МПК A61K39/00 

t

Изобретение относится к медицине, в частности к получению антител на ла;боратррных животных.

В экспериментальных иммунол1эгйЧёс-ких исследрваниях для получения интен .сивного;иммунйого ответа мелких лабо- V раторных животных иммунизируют чужеродными эритроцитами крупных животных, например барана, осла, лошади.

При использовании с этой целью эритроцитов мелких лабораторных животных близких видов развивается слабо выраженный иммунный ответ.

Известен способ получения антител путем повышения иммуногенности 1рй- 5 троцитов барана, заключающийся в том, что группу крыс, являющихся донорами сыворотки, подвергают прогреванию в термостате в течение 40 мин при 40с. Прогревание повторя1бт четыре дня ряд. Обескровливание пров.одят через два часа после последнего прогревания. Обработку эритроцитов барана сывороткой крыс производят следующие -образом; 0,15 мл эритроцитов смешивают с 2,5 мл сыворотки, после 4-часовой инкубации при 37°С эритроциты отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 2500 об/мин и дважды 01мываю 10 мл холодного иэо-

тонического раствора хлористого натрия. Отмытые эритроциты используют для иммунизации крьас Д .

В указанном способе для иммунизации мелких лабораторных животных используются эритроциту барана - крупного животного отдаленного вида, приобретение и содержание которого требует значительных затрат. Креметого взятие крови должно производиться в стерильных условиях. Операция производится только человекетл, имеющим определенный опыт.

Цель изобретения - снижение затра на получение антител путем использования эритроцитов ме.шсих шабораторных животных для иммунизации животных близких видов.

Поставленная цель достигается способом, включающим иммунизацию лаб.ораторных животных эритроцитами предварительно прогретых животных близких им по виду с последующим выделением изсыворотки иммунизированныхживотных целевого продукта.

Иммунизацию лабораторных животных целесообразно проводить эритроцитами 5п азаннь Х прогретых животньк при темгпературе 40-41С по 40-50 мин в те.чение 4-5 дней.

11ммунизацию лабораторных животных целесообразно проводить эритроцитами IB дозе 2,4x10 -4x10 клеток на 100 г живого веса,,. ,У иммунизированных животных опре;Дёля1от: титряи антител йэв естньф й реакцИями, например реакцией прямой гемагглютинации. В эти же сроки определяют розеткообразующую способность клеток селезёнки (РОК) при смешива- .

НИИ их с эритроцитами интактных крыс и количество антителообразующих клеток (АОК) .,.

Полученные данные представлены в . 1 и характеризуют увеличение титров антител по сравнению с контролем, что свидетельствует о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых

лабораторных животных,

I -.. Таблица 1 ,

9 4,44286,9 1Ф-1мунизация (4,00-6,00) (27,7-555 мышей эритроцитами и итактных Крыс . . 7,111160.8 Иммунизация (6,00-8,00) .(7777-136 мышей эритроцитами проi pefb x крыс. . Р 0,05Р 0,05 5,133 259,2 Иммунизация (4,00-7,00) (0,00-555 -мышей эритроЦИТамИ ИН- : тактных крыд % 7,221530,8 Иммунизация (6V60-8.00) (1277,7-2 мышей эритроцитами про- : гретБКкрый Р 0,05

. Ст1атйстическую обработку производят путем вычисления средних арифметйЧёских величин и оценки c njecftBeriности их различий с помощью нёпара метрическйхKpKtepHeB статистики Эилкрксона-Манна-Уитни.

В результате испытаний установлёно, что иммунологические показатели у животных, иммунизированных эритроцитами термообработанньах доноров близких видов, статистически достоверно выше, ч&л у животных, иммунизированных эритроцитами ййтактньЬ{ жи. вотных, Полученные результатй 6вйЙётельствуют о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых крыс.

Эффект получения иммуногенности эритроцитов терйообработанных животных достигается предположительно за счет повышения количества (или активности) Протёолитичёскюс фе1 1ентов в сыворотке крови и воздействия их на мембрану эритроцитов, в результате на клеточной поверхности происходит обнажение скрытых антигенных детерминант. Следствием изменений поверхности эритроцитов является повышение ;их иммуногённьах свойств . Это позволяет их использовать для иммунизации животных. Р 0,05

Пример выполнения способа получения антител путем повышения иммуногённости эритроцитов мелких лабораторных .животных и иммунизации их заключается в следующем.

Группу животных, например крыс, в течение 4-х дней прогревают в термостате по 40 мин ежедневно при 40°С Через 30 МИН последнего прогревания кровь собирают в пробирку с раствором цитрата (1 объем крови + 1 объем 5%-ного цитрата) и трижды отмывают йлётки холодным изотоническим раствором хлбрйстого натрия путем, центрифугирования При 2500 об/мин в течение 8 Мин,.

Полученные, эритроциты, обладающие повышенными иммуноген.ными свойствами, однократно вводят внутрибрюшинно например, мышам в дозе 4x10 клеток на 20 г веса тела, после чего известными приемами изучают реакцию организма на введение антигена,

60 Полученные результаты в конкрет;нсм примере вьтолнения предлагаемого .способа и сравнение их с результатами, получаемыми при использовании в. качестве доноров чужеродных круп-ных

5 животных предста.влены в табЛ, 2, иь 96,7 (60,8-130,3) ) 250,4 l) (150,6-394,4; Р 0,05 11,2 (7,d-21,9) ) 185,8 5,5) (107,1-276,4) Р 0,05 которой видно, что количество РОК, БОК и Сод титров антител у мышей, иммунизированных эриз ЬЦитаМй йрогретых крыс, значительно выше, чем у мышей,, иммунизированных эритроцитами интактных крыс. Количество РОК в 3-и группе животньсс в б раз выше, чем во 2-й группе, БОК - в 11 раз. Показатели РОК, БОК и при использованийразл бод титров антител в J-й группе также выше, чем во 2-й (7,22 и 5,33 соответственно) . Количество БОК в селезёнке и титров антител в животных 3-й группы не отличаются от соответствующих показателей животных 1-й группы, иммунизированных эритроцитами барана. Т а б л и ц а 2 . - . . ..- , антител в тканях животных доноров эрйтроЦитов