Способ получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине ветеринарии, в частности к способу получения иммунных сывороток, и может быть использовано для получения антиэритроцитарных гипериммунных диагностических сывороток с повышенным содержанием антител класса М, при пересадке органов, диагностике иммунодефицитных состояний и др. Для дифференцированной количественной оценки иммунорегуляторных популяций Т-лимфоцитов необходимы гипери мунные антиэритроцитарные сыворотки с повышенным содержанием антител класса М. Известен способ получения антиэри троцитарной сыворотки путем внутривенного введения петухам взвеси эритроцитов 5 раз с интервалом в три дня с последующей ре иммунизацией cny тя 2 недели. Реиммунизация включает две внутривенные инъекции с интер валом в три дня. Курс иммунизации со тоит из 7 инъекций в течение 35 дней tn. Данным способом невозможно получить антиэритроцитарную гипериммунну сыворотку с повьшенным содержанием а тител класса М. Кроме того, способ требует больших затрат времени и тру да. Известен также способ получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки иммунизацией животных суспензией эритроцитов. Способ заключается в двухнедельном внутривенном введении животным эритроцитов барана (11 инъекций)С20. Однако в полученной сыворотке содержится повьшенное количество антител класса G. Целью изобретения является получе ние гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки с повышенным содержанием антител класса М, а также упрощение и ускорение способа. Поставленная цель достигается тем что согласно способу получения гипер иммунной антиэритроцитарной сыворотки путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животным с последующим забором крови и отделением сыворотки, животным однократно внутривенно вводят суспензию, содержащую 1«10 эритроцитов на 100 массы тела животного с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации. Пример. В опытах используют крыс-самцов весом 280-300 г. Для иммунизации применяют эритроциты, например, барана. С .помощью центрифугирования эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором по 15 мин при 3 тыс. об/мин. Затем эритроциты в количестве 100 г массы тела животного разводят физиологическим раствором до объема, например, 2,0 мл и перемешивают встряхиванием до получения эритроцитарной суспензии. Суспензию вводят крысам в хвостовую вену. Забор крови для получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки производят на 5-й день после иммунизации. Сыворотку отделяют от сгустка, инактивируют с помощью нагревания при в течение 30 мин и определяют в реакции гемагглютинации титр антиэритроцитарных антител. Средняя величина титра антител 1:38400+420, что более чем в 5 раз превышает титр антиэритроцитарных антител, полученных известным способом (1:6820±350). Для подтверждения повьщ1енного содержания в сыворотке антиэритроцитарных антител класса М в селезенке иммунизированных животных определяют прямые антителообразующие клетки (АОК) по методу Ерне. Высокие показатели количества прямых АОК в селезенке иммунизированных животных свидетельствуют о продукции иммунной системы антител класса М. В селезенке животных, иммунизированных предлагаемым способом, среднее количество прямых антителообразующих клеток 2292±2iTAbK на Ю ядросодёржащик клеток селезёнки. При иммунизации известным способом число АОК 594±256 на 10 клеток (р 0,05). Предлагаемым способом от одной крысы можно получить 4,0-5,0 мл гипериммунной антиэтрироцитарной сыворотки с повьш1енным содержанием антител иммуноглобулиевого класса М. Этого количества сыворотки достаточно для поставки 1500-2000 анализов (поскольку иммунная сыворотка дпя поставки реакции разводится в 35-40 тыс.раз). Предлагаемая гипериммунная сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую ясидкость соломенно-желтоватого цвета. Титр антиэритроцитарных антител 1:38400 420.

Использование в клинике предлагаемой сыворотки дает результаты, соответствующие результатам, йолученным с помощью известной сыворотки, (см.таблицу).

Сопоставительный анализ результатов, полученных с использова.нием предлагаемой и известной сывороток, показывает, что между ними существуе прямая достоверная корреляционная связь (С 0,85, р 40,05),

Практическое использование.в клинике предлагаемой гипериммунной сыворотки заключается в oпpe eлeнии в крови больных количества Т-лимфоцитов-помощников (халперов)J что имеет очень важное значение для адекватной оценки иммунологической реактивности.

Для определения количества Т-помощников (халперов) эритроциты

инкубируют с 0,5-1,0 МП субагглютинирующего разведения гипериммунной сыворотки (в данном случае, при титре сыворотки 1:38000, рабочим, суагглютйнирующим разведением, будет 1:40000), после чего подготовленные таким образом эритроциты используют в реакции розеткообразования с Т-лимфоцитами обследуемого., количество розеток соответствует количеству Т-лимфоцитов-помощников (халпер ов).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить гипериммунную антиэритроцитарную сыворотку с повьшенным содержанием антител клас,са М, сократить время иммунизации с двух недель до 5-и дней, упростить технику иммунизации (вместо 11 инъекций при иммунизации известным способом - 1 инъекция предлагаемым способом) .

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ АНТИЭРИТРОЦИТАРНОЙ СЫВОРОТКИ путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животHbD4 с последующим забором крови и отделением сыворотки, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целыо получения целевого продукта с повышенным содержанием антител класса М, упрощения и ускорения способа, животным однократно внутривенно вводят суспеНзию, содержащую 1 Ю эритроцитов на 100 г массы тела животного, с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации.