Штамм продуцент биомассы Советский патент 1980 года по МПК C12K3/00 C12D13/06 

Физиологические признаки. Аэроб, Оптимум роста при 26°С. Оптимальный рН - 9,0. .

Отношение к источникам углерода: ассимилирует глюкозу, галактозу, .: рафинозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу лактозу, маннит, крахмал, лигнин и целлюлозу.. ч.

Отношение к источникам азота: использует нитратный и аммонийный азот, пептон, аспарагин, мочевину.

Рост в культуре стимулируется добавками растительного происхождения: отвары.кормовых растений, дубовой коры и да.

Штамм оеЗнаруживаёт положительную реакцию на экстрацеллюларные оксидазы, отмечено образование протеолитических ферментов.

Антагонистические свойства. Проявляет антагонистические свойства пЪ Отношению к штаммам дрожжей Candida albicans,

Штамм Flaimiulina velutipes ИБКГ-112 испытан с лабораторных условиях на различных жидких средах следующего состава:

сусло пивное (4° по Баллингу)

при рН 9;

среда с пептоном, г/л глюкоза 30,0 пептон 3,0; К,НРО 2,0; кС1 1,2; MgSO 7112,0 0,25; вода водопроводная 1 л при рН 9;

минеральная среда с мелассой, г/л: меласса 25,0; (NH)2 SO 3,0; . 1,2; дрожжевой экстракт 2,0; вода водопроводная 1 л при рН 9,О;

Шйёральная среда с глюкозой, г/л:

глюкоза 30; 2,0; 2,0; КС1 1,2; MgSO -74,0 0,25; вода вОДОпроводная 1л при рН среды 9,0.

Гриб 1 ул1 тивирУйт поверхностно в матрацах и колбах Эрленмейера различной емкости, глубинно - в пробирках на качалке при 200 об/мин и в колбах Эрленмейера на 250-500 мл - на круговой качалке при 150 об/мин. Температура инкубации 26-28 С. Посевной материал выращивают в колбах на 50О Мл с 50 мл среды. На дно колб насыпают фарфоровые бусы, с помощью Кб 6рь15с Пбред посевом измельчают мицелйальную пленку путем энергичного встряхивания. Среду инокулируют по- , лученной мицелиальной взвесью в количестве 10-20 объем %.

Данные накопления биомассы Flam mullna velutipes на минеральной среде с глюкозой при различных начальных значениях рН среды (г/л сухого мицелия) в поверхностной культуре приведены в табл.1, --. - .. ..--,

Даннце роста Flanroulina velutipes на минергшьной среде с ра зличными источниками углерода, % к весу мицелия на среде с глюкозой, приведены

. 2 -------

Данные роста Flairanulind velutipes на минеральной среде с различными

источниками азота, % к весу сухого мицелия на среде с , приведены в табл.3.

Показатели влияния концентрации глюкозы на рост, гриба Flainmulina velutipes при глубинном культивировании его на минеральной среде приведены в табл.4.

Данные роста Flammulina velutipes в глубинной культуре при различном содержании пептона в среде приведены в табл.5.

Данные роста Flarnmulina velutipes на пивном сусле при различном соотношении объемов среды и суспензии посевного мицелия, г/л сухого мицелия на 7 сутки культивирования, приведены в табл.6.

Показатели влияния СаСОд на рост f4ammulina veictipes в глубинной културе приведены в табл.7. -Так как многие высшие грибы при росте на минеральных средах испытывают потребность в витаминах и еетественных стимуляторах, таких как экстракты растений, почвы и т.п., проведены исследования роста Flam- mulina velutipes на водных (1:1) отварах некоторых ;кормовых растений, исходя из того, что применение сельскохозяйственных отходов в средах для промышленного культивирования грибов может оказаться достаточно эффективным и более экономичным, чем добавление чистых витаминов и аминокислот ,

Данные роста Flairanul-ina velutipes на Отварах кормовых растений с добавлением 15 г/л глюкозы представлены в табл.8.

Данные о накоплении биомассы опенка в поверхностной культуре на среде с различным содержанием отвара люцерны приведены в табл.9.

Исследован также рост штамма зимнего комплексных средах, где в качестве субстратов используют дейевые отходы пищевой промыпшенност а акже гидоолйзат синезеленых водорослей. При выраййвании пйверхностны методом максимальный урожай сухого мицелия на 7 сутки культивирования составляет 15,2 г/л на среде с послеспиртовой бардой; .8,5 г/л с мелассой и 2,7 г/л е гйДрОлизатом синезеленых водорослей.

Таким образом, предлагае1 «й штамм съедобного гриба Flaininulina velutipe (опенок зимний) обнаруживает хорсаиий ГРбсг при культивировании на жидких средах, с6йёр айих недооогие и досту Шё йстЬчййкй у леродногб, азотного и минергшьного питания.

На sfriifc flaLX при оптимальном для роста рН среды 9,0 получен следующий, максимальный урожай сухого культураш1ГнбР(:ГШГ1дёлия: на пивном сусле (4 по Баллингу) на 7 сутки культивирования до 13,4 г/л в поверхностной культуре, до 2Г, 3 г/л в глубинной и до 25-27 г/л при добавлении 0,1% CaCOj, При поверхностном выращи вании на среде с пептоном гриб образовал до 7,6 г/л сухого мицелия на 7 сутки роста, на минеральной среде с глюкозой и отваром люцерны до 7,0 г/л на 10 сутки и г/л на 14 сутки роста, на среде с бардой 15,2 г/л, на мелассе 8,5 г/л. Максимальный выход биомассы составлял около 62 г на 100г поглощенной Из среды глюкозы. , Содержание сырого протеина (оБ-щ ,25) в биомассе предлагаемо го штамма составляет 28,4-3.6,0% на сухой вес, в зависимости от состава среды и возврата мицелия. Содержание аминокислот в образцах мицелия, выращенного поверхностно на пивном сусле % к общему белку, следующее: Лизин 4,05 Треонин . 4,75 Гисти- Алании 4,19 дин 1,60 Фенил- . Аргинин 3,94 аланин ел. Аспара- Валин 3,93 гиновая Метионин 3,0 кислота 4,19. Лейцин 2,39 Исходное рН среды 1,0 |2,0 Биомасса мицелия, г/л по сухрму JBecy- ГРаффиноза Маннит -. - ,--.-.-.L 626273 I ЫаЫОз 1 (NH)2S 1008367 J Исходное содержание глюкозы в среде, %1 ..« я. .в .к .«. «.«.«.ем.-. --. - ..- -. -- Продолжительность опыта, сутки 3 5 Использование люкозы, %70 76 80 ; Вес сухого мицеЛИЯ, г/л Ь,4 6,6 - - - - - - --- - - - ,-- ---.«i -.-.,«-в Серин .2,51 Изолейцин 3,35 Глицин 11,02 Глутамикислота 5,59 Сырая мицелиальная |масса, выращенная глубинно и поверхностно на указанных средах, обладает сильным грибным ароматом. Мицелий, высушенный при 40 С, сохраняет аромат в течение нескольких месяцев, Описываемый штамм Flammulina velutipes HBKF-l12 имеет выход мицелиальной i биомас.сы в различных углеводных средах, включая дешевые отходы сельского хозяйства и пищевой промышленности, 62% по глюкозе, что выше, чем у описанных штаммов этого вида. Мицелиальная биомасса имеет приятный грибной аромат, белок содержит все основные незаменимые аминокислоты. Кроме того, штамм образует |в культуре на плотных и жидких средах пло-: довые тела со зрелыми спорами, чтоiife может быть использовано для селек- ционных работ.- .Т а б л и ц а 1 04,0 5,0 6,0 7,0 8,09,010,0 S 4,0 4,1 4,2 4,2 4,7 5,1Щ Таблица2-Г Т Т : I.; ароза Маль- Крахмал Ксилоза Лактоза тозау: -, - .,. - - jL---Л - - - . - - - -. --L -- «-,--.«-, 779696115115 р j -}1 Ц (NH4)2HPO | (N114)2 . 133100,: Т а б л и ц а 4,.:. j 36;. i.- ---«-l™.™-.- --«-- -.-l-- - -i. 3 5 73 5 7,.,. 0,3 83,3 84 87,3 87,3 87 -- ----------------fe . I и 5,8 6,0 7,5 5,6 6,0 7,3| ., ««, и. ..,.-« - -.- ....,Г .. -,.-..--..-Т а .6 л и ц а 5

3.75,27,6

5,0 5,0 . 7,5 5,3 5,66,4

I.

Контроль

Количество CaCOj и среде {без СаСОд)

Биомасса:, г/л 7 сутки . .18,4

% к контролю iCH)

100135109 : 11748

Содержание отйара в. среде, %. Продолжительность опнта, . . сутки10 14 10 Вес сухого мицелия, г/л 5,7 7,6 5,6

Г13,4 21,3

Т а б л и ц- а 7

Г 0,1%1 0,01%

25,0

19,9 133 105

ТаблицаВ

52

89

165

Таблйца9

25

50

10 Т а блиц а 6 . 7:3 . 1 . 6:4 , , | не исследовали 15,318,4 . 4 10 14 10 И 10 14 8,4 6,18,2 8,3 9,9 7,0 12,8 Формула изобретения Штамм Flammulina velutipes ИБКГ-112 - продуцент биомассы. Хранится в коллекции института ботаники им. Н.Г.Холодного АИ УССР. Морфологические признаки. Шляпка гриба 0,5-3,0 см в диаметре, желтовато-бурая, с тонким краем, выпуклоили плоскораспроотертая. Ножка гриба длиной 3,0-7,0 см, толщиной О,1-0,8с плотная, полая внутри. Споры гладкие бесцветные, размер 7,0-10,0 -f 3,06;О мк. Гифы бесцветные, раэветвленные, септированные, толщиной 2,04,5 мк с многочисленными пряжками. Участки гиф распадаются на ридии. Культуральные признаки. На суслоагаре колонии белые, войлочные с гри ным запахом. При старении местами буреют, наблюдается развитие плодовы тел со зрелыми базйдиоспорами. : На поверхности жидкого пивного сусла (4° Баллинга; пушистая войлочная мицелиальная пленка с приятным грибным ароматом. При длительном выращивании мицелий местами буреет,н поверхности образуются зрелые плодовые тела. При глубинном выращи.вакии на срёдах с пептоном, минеральной, среде с ГЛЮКОЗОЙ или мелассой и дрожжевым экстрактогл,растет в виде мицелйальных шариков. Толщина гиф 2,0-4,0 мк Мицелий обладает грибным ароматом. Физиологические признаки. Аэроб. Оптимум роста при . Оптимальный;-:; рН 9,0. и Отношение к источникам углерода:j;; ассимилирует глюкозу, галактозу, рафинозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, лактозу, маннит, крахмал, лигнин. и целлюлозу. - Отношение к источникам азота: использует нй1рат ный и аммонийный азот, аспарагин, мочевину. Рост в культуре стимулируется добавками растительного происхЪждения: отвары кормовых растений, дубовой коры и ДР .1 .,; Штамм обнаруживает положительную: реакцию на-экстрацёллюларные бксйдазы, отмечено образование протеолитическихJферментов. , Антагонистические .свойства. Про-и: являет антагбНйСГическ иё свойстваfij по отношению к штаммам дрожжей Candida .;;; albicans,f;Источники информации,«« -itii принятие во внимание при экспертизеfc; 1. Журнал Applied Microbiology. 1954 Т.12, W 1, .с.170-172.ii