Штамм 28-3(вкм а-588)-продуцент глюкозоизомеразы Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 

f

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения ферментов.

Известен штамм Streptomyces albus 5 АТСС 21132 - продуцент глюкозоизомеразы 1.

Недостатком данного штамма является его невысокая продуктивность и ферментативная активность (

ГлИЕ/мл белка).

Обладающий повышенной способностью к биосинтезу внутриклеточной глюкозоизомеразы и высокой продуктивностью, штамм Actinomyces albogri-. seolus 28-3 (ВКМ А-588) вьаделен из образцов почвы. Хранится в коллекции МТИЦП под .номером 28.-: и во Всесоюзной Коллекции Микроорганизмов под номером ВКМ А-588.„

Культуральчо-мэрфологические признаки.

Спороносцы спирапьные, спирали растянутые от двух до шести завитков. Споры овальные с гладкой и бородав- 25 чатой поверхностью.

Синтетическая среда СР-1 с-глюкозой. Воздушный мицелий скудный, мелово-белый (ДЗ). Субстратный мицелий палевый (04); пигмента нет.

Среда Ваксмана. Воздушный мицелий очень скудный, белесоватей (Д1) . Субстратный мицелий темно-кремовый (Об); пигмента нет. Среда Гаузе № 1. Воздушный мицелий развит слабо, ле Еяино-серый (А4) , Субстратный мицелий темно- кремовый (06); пигмента нет.

Соева : среда. Воздушный мицелий скудный, мучнистый, палевый (04); субстратный мицелий золотисто-желтый (М7); пигмента нет.

Овсяная среда. Воздушный мицелий развит умеренно, темно-пепельный (В4). Субстратный мицелий темно-кремовый (06); пигмрнта нет.

Среда Гаузе 2. Воздушный мицелий развит отдельными островками, белесоватый (Д1). Субстратный мицелий бледно-медовый (ПЗ); пигмента нет.

Кукурузная среда 2. Воздушный мицелий отсутствует, штрих сильно развит, складчатый. Cyбcтpaтный мицелий темно-кремовьтй (06); пигмента нет.

Юкраска мицелия дана по-шкале Бонарцева.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэрофил, оптимум температуры выращивания около 30 С.

Культура не образует меланойдного пигмента.

Крахмал гидролизует (зона гидролиза 3 мм) .

Желатину разжижает.

Молоко не коагулирует и не пептонизирует.

Отношение к углеводам. Усваивает Д-глюкозу, сахарозу, Д-ксилозу, i-и.нозит, Д-маннит, Д-фруктозу, рамнозу. Не усваивает рафинозу.

Пример . Штамм Actinomyces albogriseolus 28-3 (ВКМ А-588) выравают в течение семи суток на скошенном ксилозо-крахмальном агаре в пробирках. Состав среды, %:

Растворимый картофель1,0 ный крахмал 1,0

Д-ксилоза 1,0

Пептон

Дрожжевойэкстракт 0,5

HgSOif 0,1

2 - 6HgO

CoCl. 0,024 Агар СDifco) 2,0 7,0, стрН среды до стерилизации

рилиэация при 0,5 ати в течение 30 мин.

Полученным споровым материалом засевают колбы, содержащие по 35 мл основной питательной среды следующего состава, %;

1,0

Д-ксилоза 1,0

Пептон 1,0

Дрожжевой экстракт 0,3

K.jHPOy

MgSOy. 7Н„00,1

Агар CDifco)0,1

рН среды до стерилизаций 5,5, стерилизация при О,5ати в течение 30 ми

Колбы с засеянной питательной средой помещают на круговые Качалки (200 об/мин). Температура культивирвания 30°С. Выращенный в течение 4В ч инокулят (5 мл) используют для засева 50 мл свежей основной питательной среды. Культивирование продуцента на второй стадии проводят в течение 24 ч, как на первой стадии.

Полученную культуральную жидкост центрифугируют в течение 15 мин при 5000 сэб/мнн; отделенную биомассу дважды промывают дистиллированной вдой, разрушают и центрифугируют в течение 25 мин при 8000 об/мин. Получ нный сУпернатант используют в качестве ферментного препарата.

Йри определении активности реакцию изомеризации.проводят в смеси следующего состава, мл: 0,2 М фосфатный буфер (рН 7,0) 2,52,5

1 М Д-глюкоза1,0

О, 1 М MgsO; - 7Н2ОО, 5

ферментный препарат 1,0 Общий объем смеси доводят дистиллированной водой до 10 мл. Реакцию

.проводят в водяной бане при в течение 60 мин, и останавливают добавляя равный объем 0,5 М НС. Количество образовавшейся Д-фруктозы определяют цистеин-карбазольным методом. За единицу активности глюкозоизомеразы принимают количество фермента, которое приводит к образовани 1 мл Д-фруктозы в течение 1 ч при 70°Св среде приведенного состава. Удельная активность глюкозоизомеразы в полученном препарате 8-9,5 ГлИЕ/мг белка. Количество биомассы по сухому весу колеблется от 10 до 14 кг/мл среды.

Формула изобретения

Штамм Actinomyces albogriseolus 2b-3 (ВКМ А-588) - продуцент глюкозоизомера ы. Хранится в коллекции МТИПП под номером 28-3 и во Всесоюзной Коллекции Микроорганизмов под номером ВКМ А-588.

Культуральнр-формологические принаки.

Спороносцы спиральные, спирали растянутые от двух до шести витков. Споры овальные с гладкой и бородавчатой поверхностью.

Синтетическая среда СР-1 с глюкозой. Воздушный мицелий скудный ме-лово-белый. Субстратный мицелий палевый, пигмента нет.

Среда Ваксмана. .Воздушный мицели оч.ень скудный, белесоватый. Субстраный мицелий тепно-кремовый; пигмента нет.

Среда Гаузе № 1. Воздушный мицелий развит слабо, мышино-серый. Субстратный мицелий темно-кремовый; пигмента нет.

Соевая среда. Воздушный мицелий скудный, мучнистый, палевый. Субстратный мицелий золотисно-жеЬтый; пигмента нет.

Овсяная среда. Воздушный мицелий развит умеренно, темно-пепельный. Субстратный мицелий темно-кремовый; пигмента нет.

Среда Гаузе № 2. Воздушный мицелий развит отдельными островками, белесоватый. Субстратный мицелий бледно-медовый; пигмента нет.

Кукурузная среда № 2, Воздушный мицелий отсутствует, штрих сильно развит, складчатый. Субстратный мицедий темно-кремовый, пигмента нет.

Физиолого-биохимические свойства

Аэрофил, оптимум температуры выращивания около .

Культура не образует меланоидного пигмента.

Крахмал гидролизует .

Желатину разжижает.

Молоко не коагулирует и не пептон зирует. Отношение к углеводам. Усваивает Д глюкозу, Д-ксилозу, сахарозу, 1-иноэит, Д-маннит; Д-фруктозу, рамноэу. Не, усваивает рафинозу. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе i. Патент США 3616221, кл. 195-31, опуб;шк. 1971.