Способ определения количества куриного пепсина в молокосвертывающих препаратах Советский патент 1980 года по МПК A23C19/02 G01N33/16 

Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано в лабораториях заводов медицинских препаратов, заводов сычужного фермента и других организаций, производящих молокосвертывающие ферменты для сыроделия и контролирующих его качество. Непрерывный рост объема производства сыра с одной стороны и ограниче ность сырьевых ресурсов дая производ ства сычужного фермента - с другой явились основным фактором поиска про теолитических энзимов для замены дефицитного сычужного фермента. Одним из результатов проведения указанных работ явилось создание ферментного препарата для сыроделия, представляющего собой смешанный препарат соста ва сычужной фермент - куриный пепсин При составлении нормативно-технической документации на производство препарата указанного состава выявила необходимость разработки метода конт роля препарата. Наибо.пее близким р(51лением технической задачи к прелложенному являет ся способ опреде;гония сычужного фермента и пепсина я смо аанном препарате, предусм 1тг1ираюгт;пп чнрсение иссле дуемого и эталонного ферментов в молоко и установление продолжительности свертывания молока под действием смешанного препарата и фермента эталона и определение ферментов расчетным путем 1. Недостатком способа является то, что он недостаточно точен, так как при рН 5,0-5,4 свиной пепсин, как один из компонентов, частично восстанавливает свою активность. Целью изобретения является повышение точности определения. Поставленная цель достигается тем, что Б качестве эталона используют куриный пепсин, а ингибирование ферментов осуществляют в молоке путем выдержки их в течение 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре 40-43 С, при этом содержание куриного пепсина определяют по формуле (I) .. TVIOO% X - содержание куриного пепсина в бинарном ферменте; Т. - время свертывания молока под действием куриног-о лепсина; Т2 - время свертывания молока под действием молокосвертывающего препарат . Ингибирование сычужного или говяжьего д псина осуществляют в буферно растворе, имеющем рН 7,4 и температу ру .40-43 .С. Величина рН 7,4, как пок зали проведенные, исследования, является- наиболее оптимальной для полно- го ингибирования сычужного фермента (при 40°С) и говяжьего пепсина (при 43°С), В то же время при указанных режимах {рН 7,4, 11 40-43 0 куриный пепсин инактивируется незначительно (до 5-15%). Применение в качестве эталона куриного пепсина, подвергнутого аналогичной обработке, позволяет учесть его частичную инактивацию, при обрабо ке смешанного препарата и повьниает точность способа. Сущность способа заключается в сл дующем. Взятые в равных количествах смеша ный препарат и куриный пепсин растворяют в одинаковых количествах на 1/15 М фосфатном буфере, имеющем рН 7,4, выдерживают Параллельно при 4.0 43°С- в течение 5-15 мин. После этого по 0,5-1,0 мл раствора каждого ферментного препарата вносят в одинаковые объемы молока и определяют продо жительность свертывания молока. Содержание куриного пепсина в сме шанном исследуемом препарате рассчитыв т по формуле (1).. : . Содержание второго компонента (сы чужного фермента или говяжьего пепси на) определяют по формуле (2) . (2) Дастоверность расчёта содержания куриного пепсина псз приведенной формуле подтверждается проведенными исследованиями. Известно, .что C-(T-t) const (3 где С - концентрация фермента; Т - время- свертывания молока t - время первой (скрытой) стад5ферментации. Результаты исследований приведены в таблице (t определено по графичес ко зависимости времени свертывания от обратной величины концентрации фермен: ов) Как видно из таблицы, время свертывания молока практически пропорционально концентрации куриного пепсина. П .р и м е р 1, Приготовили 1%-ный аствор смешанного препарата, содеращего в своем составе сычужный фермент и куриный пепсин, и 1%-ный раствор куриного пепсина на 1/15 фосфатном буфере, имевшем рИ 7,4 (18 ч. раствора, содержащего 11,876 г .x ) в 1 л дистиллированной воды, смешивают с 2 ч. раствора, содержаще-, го 9,078 КИ2Р04 в 1 л дистиллированной воды. По 10 мл этих растворов выдерживали в течение 12 мин при 40°С. По истечении этого времени по 1 мл раствора внесли в две пробы молока (по 50 мл каждая), Время свертывания молока- с куриным пепсином составляет 12 мин, со смешанным препаратом 25 мин. Содержание куриного пепсина в смешанном препарате подсчитывают по форрлулеСодержание сычужного фермента у 100 - 48 52% Пример 2, Приготовили 1%-ный раствор смешанного препарата, содержагцего куриный и говяжий пепсины и 1%-ный раствор куриного пепсина на 1/15 фосфатном буфере, имевшем рН 7,4. :По 10 мл этих растворов выдерживали в течение 5 мин при 43с. . По истечении этого времени по 1 мл раствора внесли в две пробы молока (по 50 мл каждая). Брегет свертывания молока с куриным пепсином равно 5,23 мин, со смешанным препаратом мин„ Содержание куриного пепсяна,. в смешанном препаратеf 5, ,,, W,4S ,.. Содержание говяжьего пепсина у .100 50f05 49,95% Таким образом, предлагаемый способ является нетрудоемкиы и повышает точность определения сп-ссоба. Формула изобретения Способ определения к-оличества куриного пепсина в молокосвертывающих препаратах, предусматривакидий ингибирование ферментов,- внесение исследуемого и эталонного ферментов в молоко и установление глро.долйсительности свер-тываняя MO7i-o;-: i r:-v.r-; действием иссле.пуемого препарата л фермента-эталона, с последуьагдим определением ферментов расчетным путем, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, в качестве эталона используют куриный пепсин, а ингвбирование ферментов осуществляют в молоке путем их вьвдержки в течени,е 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре 40-43 С, лри этом содержание куриного пепсина; определяют по формуле: Тл- 100о/о где X - содержание куриного пепсина в бинарном ферменте; 7336 5 1Q 14б время свертывания молока под действием куриного пепсинаТ - время свертывания молока под воздействием молокосвертывающего препарата. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1 о Авторское свидетельство СССР 309691, кл. А 23 С 9/12, 1973 рототип)1