Способ получения противостолбнячной преципитирующей сыворотки Советский патент 1980 года по МПК A61K39/08 

осадок снова заливают физиологическим раствором. Такую обработку проводят до 5 раз.

После экстрагирования токсических белков культуру заливают 0,4%-ным водным раствором формальдегида и помещают в термостат на 20 дней при 37°С. Полученную ана культуру четырехкратно отмывают попеременно дистиллированной водой и физиологическим раствором с центрифугированием при 3000-5000 об/мин. Отмытую анакул зтуру дезинтегрируют с бусами при 3000 колебаний в минуту; на втором этапе иммунизируют кроликов.

Дезинтегрированные микробные тела разводят физиологическим раствором с мертиолятом в концентрации : 10000 до мутности, соответствующей стандарту мутности 1 млрд микробных тел коли. Иммунизацию проводят с неполным адъювантом Фрейнда. Адъювант вводят в две точки по 0,5 мл подкожно вместе с антигеном (0,5 мл). Одновременно 0,5 мл антигена вводят внутривенно. Вторая инъекция 1 мл и третья 2 мл внутривенно. Интервалы между инъекциями 4 дня. Кровопускание проводят на б-ой день после последней дозы.

На третьем этапе осуп1ествляют очистку сыворотки. Для этого нативные кроличьи сыворотки смещивают с ДЭАЭ-сефадексом А-50 или ДЭАЭ-ЭД-5 уравновещенным 0,005 М фосфатным буферным раствором рН 6,0 в соотнощении 5 г геля на 10 мл сыворотки, экспозиция 30 мин при комнатной температуре. Взвесь фильтруют через маркизет. К фильтрату прибавляют новую порцию ионообменного геля в количестве 3 г на 10 мл фильтрата (экспозиция 20 мин, фильтруют через маркизет). Оба осадка переносят в стеклянные емкости и смешивают с 0,005 м фосфатным буферным раствором рН 7,0 в количестве, в 5 раз превышающем объем исходной сыворотки. Взвесь фильтруют через маркизет и дополнительно дважды промывают таким же объемом фосфатного буфера. Промытый осадок переносят в

КОЛОНКИ. Десорбцию антимикробных антител проводят 0,005 М фосфатным буферным раствором рН 7,0 с хлористы.м натрием в концентрации 0,4 моля. Пробы собирают объемом по 5-7 мл. Окрашенные пробы объединяют и в них вносят консервант (например, мертиолят в концентрации 1:10000).

Полученная сыворотка при им.мунопроцепитации в агаре со столбнячными анатоксинами вызывает образование линий преципитации, которые пересекались с линией, образованной монозональной антитоксической противостолбнячной сывороткой.

Предлагаемый способ обеспечивает получение высокоспецифической сыворотки, освобожденной от антитоксического компонента.

Формула изобретения

. Способ получения противостолбнячной

@ преципитирующей сыворотки путем иммунизации животных-продуцентов возрастающими дозами инактивированной культурой возбудителя столбняка с последующим забором крови и отделением сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности сыворотки, исходную культуру многократно обрабатывают смесью 0,9%-го раствора хлористого натрия и 0,4%-го раствора формалина, после инактивации культуру гомогенизируют и полученный гомогенат трехкратно вводят продуценту внутривенно с интервалом в 4 дня и целевой продукт очиш ают с помощью ионитов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что целевой продукт очищают сорбцией на ДЭАЭ-сефадексе А-50 или геле ДЭАЭ-ЭД-5

из 0,005 М фосфатного буфера рН 6,0-6,5и элюируют тем же раствором с 0,4 М хлористого натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

п 1. Руководство по сывороточному и вакцинному делу, М., 1943, с. 262-284.