различных ионообменных смол 21 . Выход целевого продукта 31%.
Недостатками способа являются низкий выход целевого продукта и сложность выделения целевого njpoдукта, связанная с использованием многократной ионообменной очистки.
Цель изобретения - -повьвиение выхода целевого продукта и упрощени процесса его получения.
Поставленная цель достигается способом получения dД-5-метилтетрагидрофолиевой кислоты или ее солей путем восстановления фолиевой кислоты боргидридом натрия при весовом соотношении боргидрид натрия ; фолиевая кислота 0,5-1:3-1 в воде при рН 7-8 и температуре 60-80°С, метилирования полученного продукта водным раствором формальдегида и боргидридом натрия при весовом соотношении формальдегид:тетрагидрофолиевая кислота 0,8-2,5:1 и весовом соотношении боргидрид натрия : тетрагидрофолиевая кислота 0,251,5:1, при рН 6-8 при температуре 25-30-С, причем водный раствор фор:мальдепеда прибавляют порционно и последнюю порцию добавляют при весовом соотношении формальдегид : терагидрофолиевая кислота 0,15:1 в прсутствии восстановителя с последующим вьщелением целевого продукта в виде соли или кислоты.
Отличительными признакам1{ способа согласно изобретению являются восстановление фолиевой кислоты при весовом соотношении боргидрид натрия : фолиевая кислота 0,5-1:3-1, температуре бО-ВО С и рН 7-8, метилирование при весовом соотношении формальдегид : тетрагидрофолиевая кислота 0,25-1,5:1, при рНб-8 и температуре 25-30°С, порционное добавление водног-о раствора формсшьдегида и введение последней порции его при весовом соотношении формальдегид : тетрагидрофолиевая кислота 0,15:1 в присутствии восстановителя .
Восстановление предпочтительно осуществляют при весовом соотношении боргидрид натрия : фолиевая кислота 0,7-1:2-1 и температуре 70°С, а метилирование - при весовом соотношении формальдегид : тетрагидрофолиевая кислота 1,4:1 и боргидрид натрия ; тетрагидрофолиевая кислота 0,5-1:1,температуре , рН 6,5 с использованием в качестве восстановителя цистеина.
В качестве восстановителя могут быть также использованы цистеамсин, восстановленный глютатион, пантетеин.
Способ согласно изобретению позволяет повысить выход целевого продукта до 80% и исключить сложную
очистку с использованием многократного ионного обмена.
Пример 1. ВО г деиониэированной воды подают в реактор и в ней суспендируют 2,4 кг d ,1 -фолиевой кислоты. После этого добавляют твердый карбонат натрия при перемешивании до тех пор, пока фолиевая кислота не растворится полностью (рН конечного раствора 7,8),затем
4,8 кг боргидрида натрия, растворенного в 40 л воды, и реакционную смесь нагревают до 70°С. Смесь перемешивают и нагревают в течение 1 ч в атмосфере азота. По окончании реакции реактор охлаишают до 30° С
и вводят при перемешивании 3,5 кг водного формальдегида и 2,4 кг боргидрида натрия, растворенные в 20 л воды. Реакцию продолжают в течение 1 ч при перемешиваНИИ в токе азота. После этого добавляют дополнительно 0,15 кг 37%-ного формальдегида и 1 кг цистеина.
17 кг активированного угля суспендируют в 100 л деаэрированной воды и суспензию угля добавляют при перемешивании к реакционной смеси, рН которой доведена до 6,5, Через несколько минут смесь фильтруют в атмосфере азота и осад:ок угля на. фильтре про{-Ф11вают водой, содержаи ей 1% цистеина, до польюго удаления неорганических солей. Уголь с осадка суспендируют в 100 л элюекта следующего
(объемного) состава: 2-метоксиэтанол 80, вода {содержащая 5% цистеина) 20, аммиак (34%) Суспензию перемешивают несколько минут, затем фильтруют и фильтрат концентрируют до объема
20 л. Концентрированный фильтрат выливают в раствор, содержащий 700 г хлористого кальция в 100 л этанола. Кальциевая соль 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты выпадает в осадок,
se отфильтровывают в атмосфере азота, промывают этанолом, а затем сушат в вакууме. Получают 2,3 кг продукта, что составляет выход 86% в расчете на исходную фолиевую кислоту.
УФ-анализ продукта показывает следующие характеристики (рН 7, Е 32-10): максимальное поглощение при 290 нм, минимальное поглощение при 245 нм, соотношение
с у г -то
290 245 - °
Анализ на хроматографической колонке Сефадекс ДЕАЕ А-25 с использованием метода Никсона и Бертино показывает только пик 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты. Препаративная тонкослойная хроматография (HPLC/Партисил-lOSAX, 4,6x250 мм колонка, элюент-5%-ный цитрат амг-лония,рН б) обнаруживает только 5-метилтетрагидрофолиевую кислоту. ЯФ-спектр:
смнглет, характерный для , -группы, при т: 7, 5 .
1 кг 5-метилтетрагидрофолиата кальция, приготовленного по данному способу, растворяют в 40 л воды, содержащей 1 кг цистеина, при нагревании в атмосфере азота. рН доводят до 6 с помощью разбавленной соляной кислоты и смесь оставляют на холоде.
5-Метилтетрагидрофолиевая кислота выпадает в ОСЕЩОК, ее отфильтровывают, промывают прохладной водой и сушат. Продукт показывает величину Ejiqo /
Тот же самый процесс повторяют, но заменяют 2-метоксиэтанол в элюирующей смеси этанолом, метанолом, 1- или 2-пропанолом, н-бутанолом, трет-бутанолом, втор.-бутанолом и изобутанолом соответственно. В каждом случае получают продукт с теми же характеристикими и с тем же выходом .
I Пример 2. Соль 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты получают, как описано в примере 1. Уголь элюируют смесью следующего (объемного) состава: метанол 80, вода (содержащая 5% восстановленного глютатиона) 20, аммиак (34%) 2.
После отфильтровывания активированного угля к элюату добавляют 700 хлористого кальция, растворенного в небольшом количестве воды. 5-Метилтетрагидрофолиат кальция выпадает в осадок, его отфильтровывают в токе азота, промывают этанолом и сушат в вакууме. Получают 2,1 кг продукта, что составляет выход 80% в расчете на фолиевую кислоту. Продукт имеет те же характеристики, что и продукт, полученный в примере 1.
Пример 3. Способ осуществляют , как в примере 1, осадок угля на фильтре обрабатывают элюирующей смесью, состоящей из 2-пропанола и воды, содержгидей небольшой процент гидроокиси аммония и цистеина, элюат после фильтрования затем концентрируют до объема 20 л.
Данный раствор подвергают лиофилизации, что дает 2,1 кг натриевой соли 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты с выходом 80%. Продукт обнаруживает Ег9о /F-245 3,8.
Пример 4. ПОВТОРЯЮТ процесс примера 1, включая концентрирование элюата. В этом опыте элюат обрабатывают 1,3 кг хлористого бария, растворенного в 100 л этанола. Бариевая соль 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты выпадает в осадок, давая выход 83%. Величина / 245 3,79.
Пример Ь. Повторяют процесс примера 1. В этом опыте элюат обрабатывают 0,6 кг хлористого магния, растворенного в 100 л этанола. Магниевая соль 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты выпадает в осадок. Выход ее 82%. Величина яо / г4 3,8. Пример 6. 100 г кальциевой соли 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты, приготовленной, как описано в примере 1, растворяют в 4 л воды. К полученному раствору добавляют стехиометрическое количество сульфата натрия. Сульфат кальция выпадает « в оссцдок, и его отделяют фильтрованием. Прозрачный раствор подвергают лиофилизации, получая натриевую соль 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты .
Пример 7. Приготовление
кальциевой соли 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты.
2,50 кг фолиевой кислоты суспендируют в 10 л воды и к суспензии добавляют при перемешивании 1 л
40%-ного раствора углекислого натрия. Затем рН среды доводят до 7,8 с помощью углекислого натрия и после охлаждения в атмосфере азота добавляют 1,7 кг бергидрида натрия.
5 Смесь перемешивают при в течение 2 ч для завершения реакции, далее добавляют 4,0 кг 37%-ного водного раствора формальдегида и лосле этого 0,80 кг боргидрида натрия. Выпавший в осадок борат натрия отфильтровывают, а избыток боргидрида разрушают доведением рН раствора до 6 с помощью соляной кислоты. Затем добавляют при перемешивании
5 1 кг хлористого кальция, растворенного в 2 л воды, и полученную реакционную смесь оставляют на ночь - при . Кальциевая соль метилтетрагидрофолйевой кислоты выпадает в осадок в виде
0 аморфного белого порошка, который отфильтровывают и промывают водой.
Эту соль растворяют в 10 л кипящей воды и охлажденный раствор оставляют стоять в течение ночи. Выпав5 ШУЮ кристаллическую соль отфильтровывают промывают и сушат в вакууме. Получают 2,40 кг пентагидрата 5-метилтетрагидрофолиата кальция с общим выходом 80% в расчете на исходную
фолиевую кислоту.
В идентичных условиях получают магниевую соль, которая, однако, трудно фильтруется.
Формула изобретения
1. Способ получения d,8-5-метилтетрагидрофолиевой кислоты или ее солей общей формулы
COQX
30}ГН-СН
СЫ2
CH,J
н н
СООХ
где X - водород, щелочной металл или эквивалент щелочноземельного металла/
путем восстановления фолиевой кислоты боргидридом натрия в воде в атмосфере инертного газа, метилирования полученного продукта водным раствором формальдегида и боргидридом натрия и выделения в виде кальциевой или бариевой соли, о тл и чающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрсяцения процесса, восстановление проводят при весовом ссютнсяпении боргидрид натрия : фолиЬвая кислота 0,5-1:3-1, при рН 7и температуре бО-бО С, метилируют при весовом соотношении формсшьдегир ; тетрагидрофолиевая кислота 0,8-2,5:1 и весовом соотношении боргидрид натрия : тетрагидрофолиевая кислота 0,,5:1, при рН. 6-8 и температуре 25-30°С, причем водный раствор формальдегида прибавляют порционно и последнюю порцию добавляК)т при весовом соотношении фоомалдегид : тетрагидрофолиевая кислота 0,15:1 в присулгствии восстанови теля с последующим вьаделением целевого продукта в виде соли или кислоты,
2, Способ по и. 1,, о т л и ча ющ и и с я тем, что восстановление проводят при весовом соотношении боргидрид натрия : фолиевая кислота 0,7-1:2-1 при теготературе 70°С, метилируют при весовом соотношении формальдегид : тетрагидрофолиевая кислота 1,4:1 и боргидрид натрия : : тетрагидрофолиевая кислота 0,51:1, температуре ЗО-С, рН 6,5 в,, присутствии цистеина.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Вга i г J . А. , Saunders К , J . Convenient method for the preparation of (i)-5-methygtetrahydrofо acid . Biochem, 1970, 34(2), p. 376.
2,Buediger H., Sieck R,, Eine neue Methode zur HersteEPunq und Reinigung von SMethyEtetrahydrofogic acid-. Z. Na turforsch . , TeiEc, 1973, 28 (11-12), p, 650 (прототип).
