Способ получения биомассы Советский патент 1980 года по МПК C12B1/08 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ

Изобретение относится к микробиологической прО «Л1ленности, а именно к способам получения биомассы, включает культивирование дрожжей на пита тельной среде, содержащей в качестве источника углерода метанол. Известен способ получения биомассы, включаквдий культивирование дрожжей рода -Candida на метаноле 1. Недостатком известного способа является невысокое содержание белка в биомассе. Для повышения содержания бeлka в биомассе используют из рода Candid штамм Candida Sp. SPM 180сс, при зтом культивирование ведут при темпе ратуре 20-35°С и рН среды 2,5-6,5. Способ выполняют следующим образом.. Штамм Candida Sp. SPK ISOcc кул тивируют на питательной среде, содер жащей в качестве источника углерода метанол, а также источники азота, фосфора, калия, железа и кальция, а так .е биостимуляторы - дрожжевой экстракт, биотин. Культивирование штамма проводят при энергичном перемешивании с температурой среды от 20 до 35С, пред почтительно в пределах 30-33 С. рН среды поддерживают в пределах 2,56,5, предпочтительно в пределах 4-4,5. Среду аэрируют газовой смесью, содержащей кислород, предпочтительно воздухом. Полученную в процессе культивирования биомассу отфильтровывают, промывают водой и сушат при подогреве. Биомасса может быть использована в качестве белкового компонента пищевых продуктов или кормов для животных. Из бмомассы могут быть выделены облагороженные продукты: белок, аминокислоты, а также нуклеиновые кислоты. вьщелен в непр ерывном про цессе культивирования на специально обогащенной питательной среде. Штаьвл Candrda Sp. SPM 180 ее культивируют периодическим и непрерывном способе. В жидкой питательной среде штамм образует пучки удлиненной форг« (псевдомицелий), которые вьшадагот в осадок. В твердой среде штамм образует гладкие глянцевые колонии, либо

непрозрачные складчатые колонии. Споры не образует.

Физиологическая характеристика штамма Candida Sp. SPM 180 ее:

.Использование источников углерода

О-глюкоза+

D-галактоза

Сахароза

Мальтоза-

Трегалоза

Лактоза

Рост

О-глюкоза

0-галактоза

Р-сорбоза

Сахароз.а

Мальтоза

Целлобиоза

Трегалоза

лактоза

Мелибиоза

Раффиноза

Мелецитоза

Инулин Крахмал

о-ксилоза

+ +

В-арабиноза

D-арабиноза

+ (Слабо)

D-рибоза

В-рамноза

Этанол

Глицерин

Эритритол

Рибитол

Галактикол

D-маннитол

+ +

D-глюцитол

Молочная кислота

Янтарная кислота

Лимонная кислота

Инозит

Нитраты

Отсутствие витаминов

при 37

+ (Слабо).

Способ иллюстрируется следующими римерами.

Пример. В конические колбы мкостью 500 мл вносят 50 мл питательой среды следующего состава:

2,0 г/л

2,0 г/л

НгО

(Н) S04 5,0 г/л О,2 мг/л

MgSO47Н2О 2,0 мг/л

FeSOj-7Н 0 2,0 мг/л

СаСЦ 2,0 мг/л

ZnSO/.

Дрожжевой

экстракт 2,0 мг/л

Биотин 200 мг/л

Микроэлементы 1 мл/л .

Раствор микроэлементов имеет слеукидий состав:

СиЗОд- SHjO200 мг/л

НуВО)500 мг/л

МпЗОд-Н.О500 мг/л

К1 10 мг/л

CoClj 6Н О10 мг/л

МоО,

(концентрированная)

Среду доводят до рН 5,0. Среду в колбе стерилизуют при температуре 116 С в течение 20 мин. В две колбы добавляют 0,75 мл (1,9% по объему) метанола, и засеивают штаммом Candid Sp. SPM 180 ее. Колбы инкубируют в течение 72 ч на вращаквдемся перемешивающем устройстве при скорости вращения 220 об/мин с разбегом по диаметру 3,5 см. Температура контролируется термостатированием и составляет 32,5°С.

К содержимому других колб, в которых имеется та же среда, добавляют: 1% (об/об) метанола, 2% (об/об) этанола и 2% (вес/об) глюкозы.

Эти колбы засеивают 5 мл культуры описанной выше. Спустя 24 ч после начала инкубирования,в каждую колбу дополнительно добавляют 1% метанола (об/об). Через 48ч инкубации определяют содержание биомассы в колбах и содержание беэтка в биомессе.

Полученные результаты приведены в таблице.

Содержание белка определяется биуретовым методом.

Пример2. В ферментер с эффективным объемом 8 л вводят питательную среду, указанную в примере 1 и засеивают штамм Candida Sp. SPM 180 ее в виде суспензии. В ферментер, температура которого поддерживается на уровне 32,5°С, добавляют метанол с таким расчетом, чтобы его остаточная концентрация в среде не превБНиала 1 об.%. После процесса накопления культуры начинают непрерывно вводить стерильную питательную среду в феЕментер. Содержание метанола в ней составляет 29,6 г/л. Одновременно производят отбор дрожжевой суспензии из ферментера. Скорость разбавления среды постепенно увеличивают до 0,166 час. При работе в таком режиме отходящий поток содержит 10,28 г/л сухой биомассы и 146 ч на миллион остаточного метанола. Выход полезного продукта составляет 35%, продуктивно ,ть 1,72 г/л в час. Получаемая биомасса содержит 55,6% белка (определено с помощью биуретовой реакции). примерз. К ферментеру, опи ному в примере 2, подключают отстой ник. Часть дрожжевой суспензии отводят в отстойник, где биомасса отстаивается, и ее регулярно возвращают в ферментер, в ферментер также свежую питательную среду содержащую 24 г метанола. Скорость разбавления была 0,267 час-. Дрожжевая суспензия, выводимая из ферме тера, содержит 7,80 г/л биомассы и 120 ч на миллион остаточного метанола. &ЖОД полезного продукта составляет 32,5%. Продуктивность по (биомассе была 2,08 г/л в час. биомасса содержит 53,0% белка (определено с помощью биуретовой реакции) . Формула изобретения Способ получения биомассы,предусматривающий кулвдгиБирование дрожжей рода Candida на питательной среде, содержащей метанол в качестве источника углерода, источник азота и минеральные соли и биостимуляторы в условиях аэреации среды., отличающийся тем, что , с целью повышения выхода белки в биомассе, из рода Candida используют штамм Candida Sp. SPM 180 ее, при этом культивирование ведут при температуре 20-35«С и рН среды 2,5-6,5. Источники ннфоЕ 1ации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Англии 1435865, кл. с 6 F, опублик. 1976.