Штамм 109 продуцент бактериоцина р109 Советский патент 1980 года по МПК C12D9/22 

1

Изобретение относится к области микробиологии и касается получения нового штампа - продуцента антибиотика бактериоцина, который может быть использован для бактериоцино- 5 типирования и бактериоциногенотипирования лактобацилл, а также в исследованиях с целью изучения генетических элементов, детерминирующих синтез бактероцина, их функциональных осо- О бенностей, химического состава, механизма действия.

Известен штамм LactobaciI1 us acidophilus, продуцирующий бактериоцин 1.15

Однако спектр действия этих бактерицинов ограничивается подавлением роста ряда культур L.acidophilus.. L.sa1 ivaгins , L . helveficus, L,fermenti, L.pigurti Hi.buchneri.20

Целью изобретения является получение штамма LactobaclHus plantarum 109, продуцирующего бактериоцин, с более широким спектром действия. J Штс1мм LactobaciHus plantarum 25 109 - продуцент бактериоцина 8109.

Штамм Lactobacillus plantarum 109 .выделен из слюны человека.

Хранится в лаборатории культур ВНИИА под номером 1601,30

Культурально-морфологические признаки. На среде МРС-1 (48-часовая культура) представляет собой умеренно полиморфные палочки размером 2-3х хо,5-0,8 мкм, расположенные попарнопоследовательно с закругленными концами. Спор и капсул ire имеет. Волютиновых зерен на образует. Грам-поло жительны. Неподвижны.

Ацетатный агар. Через 72 часа роста при 37°С в атмосфере СО образует круглые беловато-желтоватого цвета колонии разкюром до 2 мм в диаметре, с выпуклой гладкой, блестящей поверхностью, не прозрачньле, с ровным краем, мелкозернистой структурой, мягкой консистенции.

Жидкая среда МРС-1. Через 24 часа роста при З7с образует равномерное помутнение и небольшой аморфный осадок.

1,5%-ная агаровая среда МРС-1, скошенная через 48 часов роста образует налет беловато-желтоватого цвета с гладкой блестящей поверхностью, непрозрачной, мягкой консистенции,располагающийся на поверхности среды.

Среда МРС-5. Через 24 часа роста равномерное помутнение и небольшой аморфный оссщок.

Фиэиолого-биохимические признаки. акультативный анаэроб. Оптимальный ост при 32-37 С. На среде МРС-2 астет при 15°С,не растет при 50°С, а среде МРС-2 с 0,4 типоля растет ерез 24 часа. Обезжиренное молоко 5% дрожжевого автолизата и 1% глюозы створаживает на 2-е сутки.

На среде Дейвиса створаживание и пожелтение среды на 2-е сутки.Молоко створаживает на 2-е сутки, через 14 суток содержание кислот достигает 0,4.

Желатину не разжижает. Нитраты в нитриты не восстанавливает.Каталазу не образует.

На среде Гибсона и Абд-Эль-Малека ферментирует глюкозу без образования газа.

Ферментирует целлобиозу, сорбит, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу и салицин с образованием кислоты. Рамнозу и крахмал не расщепляет.

Антагонистические свойства. Подавляет рост tact. sa 1 ivarius , Lact. jugurti, Lact. fermenti, Lact.Iactis, Lact delbrueckti.

Получение бактерицина P 109 с помощью предлагаемого штамма.

Суточную культуру L.plantarum 109 засевают уколом на чгиику с 1,5%-ной агаровой средой МРС-1 и выращивают 2 суток, при 37°С в вакуумэксикаторах, в которых воздух заменен углекислым газом. Выращенную макроколонию стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают вторым слоем 4 мм О,8%-ной агаровой среды МРС-1, расплавленной и охлажденной до -4бс, смешанной с 0,5 мл 4-часовой индикаторной культуры L. jugurti 329.

После застывания среды посевы выращивают при З7с в течение 2 суток. Вокруг макроколо ин L.plantarum 109 наблюдается прозрачная, с нечетким краем, диаметром 30 мм зона подавления роста индикаторного штамма L.j ugurt i 329 .

Бактериоцин P 109 не инактивируется трипсином, химотрипсином, пепсином, папаином, Д К-азой, РНК-азой, лизоцимом. При 100°С не инактивируется в течение 30 мин. Бактериоцин не реплицируется при пассажах на индикаторном штамме L.jugurti 329 и хорошо диффундирует в агар. Не диффундирует через целлофан.

При бактериоцинотипировании 585 культур лактобациол разных видов получены следующие данные: из 65 культур L.salivarius культур относились к первому бактериоцинотипу и 56 культур ко второму; из 16 культур L.jugurti 1 штамм относился к nepsofv бактериоцинотипу и 15 культур ко второму; из 84 культур L.fermenti 1 штамм относился к первому .и

83 культуры ко второму бактериоцинотипу; из 2 культур L.lactis 1 штамм относился к первому и 1 ко второму бактериоцинопипу; 1 культура L.delbrueckii относилась к первому бактериоцинотипу.

420 культур L-ас i doph i 1 us , L.hel.r veficus, L.Ieichmahuii, L.easel, L.plantarum, L.brevis, L.buchuerl, L.cellobiosus и L.yiridescens были устойчивьоли к бактериоцину P 109.

Предлагаемый штамм обладает широким спектром действия на культуры лактобацилл, что позволяет приводить бактерио.цинотипирование и бактериоцииогенетипирование культур L.jugurti, L.lactis и L.de1Ьгueckгi.

Формула изобретения

Штамм Lac tobacillus plantar urn 109 - продуцент бактериоцина P 109.

Хранится в лаборатории культур ВНИИА под номером 1601.

Культурально-морфологические признаки. На среде МРС-1 48-часовая культура представляет собой умеренно полиморфные палочки размером ,50,8 мкм, расположенные попарно-последовательно с закругленными концами. Спор и капсул не имеет. Волютиновых зерен не образует. Грам положительны. Неподвижны.

Ацетатный агар через 72 часа роста при 37°С в атмосфере СО2 образует круглые беловато-желтоватого цвета колоНИИ размером до 2 мм в диаметре, с выпуклой кладкой блестящей поверхностью, не прюзрачные, с ровным краем, мелкозернистой структурой, мягкой консистенции.

Жидкая среда МРС-1. Через 24 часа роста при 37°с образует равномерное помутнение и небольшой аморфный осадок.

1,5%-ная агаровая среда МРС-1, скошенная. Через 48 часов роста образует налет беловато-желтоватого цвета с глсщкой блестящей поверхностью, непрозрачный, мягкой консистенции, располагающийся на поверхности среды.

Среда МРС-5. Через 24 часа роста равномерно е помутнение и небольшой аморфный осадок.

Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Оптимальный рост при 32-37°С. На среде МРС-2 растет при , не растет при 50°С.На среде МРС-2 с 0,4% типоля растет через 24 часа. Обезжиренное молоко с 5% дрожжевого автолизата и 1% глюкозы створаживают на 2-е сутки. На среде Дейвиса створаживание и пожелтение среды на 2-е сутки.

Молоко створаживает на 2-е сутки, через 14 суток содержание кислот достигает 0,4%. Желатину не разжижает. Нитраты в нитриты не восстанавливает. Каталазу не образует. На среде Гиб5 771 сона и Абд-Эль-Малека ферментирует глюкозу без образования газа. Ферментирует целлобиозу, сорбит, галактозу, мальтозу, сахарозу, ман.нозу, маннит, лактозу и салицин с образованием кислоты. Рамнозу и крахмал не расщепляет. Антагонистические свойства. Подавляет рост Lact . sa1 ivarius , Lact.ju1526gurti, Lact.fermentt, Lact.lactis, Lact.delbrueckii. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР по заявке 2594015/28-13, кл. С 12 0 9/20, 1978.