1
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма - продуцента бактериоцина.
Известен штамм Lactobaci aci- dophiPus Ь74 - продуцент бактериоцийа А-Ь74 1.
Однако известный штамм, продуцирующий бактериоцин, не проявляет активность в отношении культур.
Цель изобретения - новый штамм Lactobacieeus с с1аорЬ± из,1продуцирующий бактериоцин активный против культур LpCantarum.
Предложенный штамм LactobaciC us acidophitus Ь78 выделен из слюны человека.
Штамм Lactobaci&€us acidophitua 578 (хранится в Музее культур fipoмьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером ЦМПМВ-1910) - продуцент бактериоцина А-Ь78.
Культурально-мОрфологические признаки. На среде МРС-1 (48-часовая культура) представляет собой полиморфные палочки 5-7 0,6-0,8 мкм, располагающиеся поодиночке и попарно последовательно с закругленными концами. Волютиновых -зерен не образуют.
Грамположительны. Спор и капсул не имеют. Неподвижны.
Ацетатный агар. Через 72 ч роста при в атйосфере углекислого газа образуют до 2 мм в диаметре, круглые, сероватого цвета колонии, со слабовыпуклой, морщинистой, тусклой, сухой поверхностью, полупрозрачные, с волнистым краем, волокнистой струк10турой, плотноватой консистенции.
Среда МРС-1. Через 24 ч выращивания при равномерное помутнение и небольшой аморфный осадок.
1,5% агаровая скошенная среда
15 МРС-1. Через 48 ч роста при налет сероватого цвета с шероховатой, тусклой, сухой поверхностью, полупрозрачныйц плотноватой консистенции, располагающийся на поверхности среды.
20
Среда МРС-5. Через 24 ч при культивировании при 37С равномерное помутнение среды и небольшой аморфный осадок.
Среда МПС-2. Не растет при 50 и
25 . Среда МРС-2 с 0,4% типоля. Рост отсутствует. Обезжиренное молоко с 5% дрожжевого автолизаита и 1% глюкозы. Створаживает на 2-3 сут.
Среда Дейвиса. Створаживание и
30 пожелтение среды на 2-3 сут.
Молоко. Створаживает на 4-5 сут.
Физиолого-биохимкческие признаки. Факультативный анаэроб. Оптимальный рост при 32-37 С. Желатину не разжижает. Нитраты в нитриты не восстанавливает. Каталазу не образует.
На среде Гибсона и Абд-эль-Малека ферментирует глюкозу без образования газа. Ферментирует целлобиозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, лактозу и салицин с образованием кислоты. Не расщепляет рамнозу, крахмал, сорбит и маннит.
Молоко. Через 14 сут содержание кислот достигает 0,38%.
Антагонистические свойства. Обрадует бактериоцин А-Ь78 на 1,5 агаровой и жидкой среде МРС-1.
Получение бактериоцина А-578 на 1,5% агаровой среде МРС-1.
Суточную культуру L.acidophifus 578 засевают уколом на чашку с 1,5% агаровой средой МРС-1 и выращивают 3 3 сут при 37 С в ваКуум-эксикаторах, в которых воздух заменен углекислым газом. Выращенную макроколонию стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают вторым слоем 4 мл 0,8 агаровой среды МРС-1, расплавленной и охлажденной до , смешанной с 0,5 мл 4-часовой индикаторной культуры L.actis АТСС 800. Лрсле застывания среды посевы выращивают при 37°С в течение 2 сут. Вокруг макроколонии L.acidophiCus 578 наблюдается прозрачная с не совсем четким краем.зоны подавления роста индикаторного.штамма 16 мм в диаметре. .....
Получение бактериоцина А-578 на жидкой среде МРС-1.
Культуру L.acidophi us 578 засе- . вают в жидкую среду МРС-1 и выращивают при 32 С 2 сут. Для стерилизаци к культуре добавляют 10% хлороформа, перемешивают .и выдерживают .при . в течение 30 мин, после чего жидкост отделяют 6т хлороформа и центрифугируют. Из надосадочной жидкости готовят двукратные серийные разведения. По одной петле каждого разведения наносят.на поверхность чашки с 1,5% .агаровой средой MPC-J., засеянной 4часовой.индикаторной культурой L.басtig.АТСС 800. После выращивания при в течение.2 сут производят учет бактериоцина А-578 на жидкой МРС-1 - 1;4.
Спектор действия бактериоцина А-Ь78. .
Подавляет рост ряда культур L.acidophiCus, L.heCveficus, L.saBivarins L.
L.jugurti, J... actis, L. Beichmannii, L.de6bineckii, L.casei, L.fermentum, L.brevis, L.bucheuri, a также L.pCantarum.
Бактериоцин A-578 инактивируется трипсином, химотрипсином, пепсином и папаином, не разрушается дезоксирибонуклеазой, рибонуклеазой и лозицимом. При автоклавировании при 1,5 ат разрушается через 30 мин. Диффундирует через целлофан. Бактериоцин А-Ь78 реплицируется на индикаторном штамме L.Eactis АТСС 800.
Предлагаемый штамм L.acidophiCus 578 по сравнению с известными продуцирует бактериоцин А-578, который может быть использован не только для бактериоцинотипирования и бактериоциногенотипирования культур L.acidohiCus, L.heKveficus, L.saCivarins, L,jugurti, L.Pactis, L.bichmannii, L.deebmeckii, L.casei, L.fermentvim, L.brevis и L.buchueri, но и культур Ь.рЕапЪагшп.
По чувствительности к бактериоцину А-578 (бактериоцинотипирование) культуры перечисленных выше видолактобацилл подразделяются на следующие бактериоцинотипа: первый - чувствительный к бактериоцину А-578 и второй - устойчивый к бактериоцину А-57
При бактериоцинотипировании 586 культур лактобациил разных видов получены следующие результаты.
Из 187 культур L.acidophiCus 155 относятся к первому бактериоцинотипу и 32 культуры - ко второму..Из 65 культур L.saBivarius 15 относятся к первому бактериоцинотипу и 50 - ко втррому. Из 16 культур L.jugiirti 15. относится к первому бактериоцинотипу и i культура - ко второму. Из Б4 культур L.fermentum 49 относятся к первому бактериоцинотипу и 35 культур - ко второму. Из 13 культур L.burchueri 4 относятся к первому оактериоцинотипу.и 9 культур - ко второму. Из 144 культур L.casci 82 относится к первому бактериоцинотипу и Ь2 культуры - ко второму, из 23 культур L.p anterem 2 относятся к первому бактериоцинотипу и 21 культура .- ко второму.
4 культуры L.heSveticus, 2 культуры L.Eactis и L.6eichmannii, 1 Iкультура Ir.aeCdmeckii и 43 культуры L.brevis принадлежат к первому бактериоцинотипу. 2 культуры L.ceC obiosu устойчивы к действию бактериоцина А-578.
Использование предлагаемого штамма, продуцирующего бактериоцин А-578 дает возможность по генетическим меткам проводить дальнейшее, Солее глубокое и детальное внутривидовое подразделение не только культур L.aci- dophi6us, .leEveticus, L.saCivariVS,, L jugrti, L,6actis, L feichmannii, Jj,deCbmeckii, L.casei, L.fermeotvm, L.brevis и L.buchneri, но и культур L.pCanturum, обладающих одинаковыми биохимическими и физиологическими свойствами, на бактериоцинотипы и бактериоциногенотипы (бактериоцинотипирование и.бактериоциногенотипирование), а также находит применение в исследованиях по генетике н физиологии бактериоциногении лактобацилл, при изучении химического строения и механизма действия бактериоцина А-Ь78.
Формула изобретения Штамм LactobaciCCus acidophiCus 578 (хранится в Музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИ генетика под номером, ЦМПМ В-1910) - продуцент бактериоцина А-Ь78.
J Источники информации,
принятые во внимание при экспертизе
1. Авторское свидетельство СССР по зайвке 2685277, кл. С 12 D 9/22, 10 1978.
