Штамм 574-продуцент бактериоцина а 574 Советский патент 1980 года по МПК C12D9/20 

(54) IllTAMM UACTOBACiftUS ACtDOPHiDUS 574-ПРОЛУ11ЕНТ БАКТЕРИОЦИНА А 574

Изобретение относится к микробиологии и касается получения штамма Lactobacillys . Acidophilus 574-продуцента бактерионина А 574. Предлагаемый штамм новый, в патентной и научно-технической литературе не описан. Штамм выделен из слюны человека н хранит ся в коллекции микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антийтотиксда под номером 1583. . Целью изобретения является получение штам ма L. acidoph.ilus 574, продуцирующего бактериоцин. Бактериоцин А 574 ингибирует рост L. acidophilus - helveticus и L. fermenti, подавляет рост L. jugurti и L. buchneri. Морф о лог о-ку ль ту pa льны е приз и ак и. Полиморфные палочки размером 2-4 х 0,50,6 мкм, располагающиеся поодиночке или попарно-последовательно. Спор и капсул не образует, неподвижен, грамм-положительный. Ацетатный агар. Колонии круглые, серова1-ые, с шероховатой поверхностью и неровными краями.диаметром до 2 мм.& Среда МК.-1. Через 24 ч равномерное по1мутнение и небольшой осадок., Среда МРС-2.Не растет при 15 С и 50С. .Среда МСР-2 с 0,4% типоля. Рост отсутствует. Физиологические свойства. 1акультативный анаэроб,максимум роста при 32-37 С. : Молоко створаживает на 3-й сутки, предельное кислотообразОвание 2,3%. Желатину не разжижает. Нитраты не восста: навливает. Каталазу не образует. Среда Гибсона и Абд-зль-Малека. Глюкозу ферментирует без образования газа. . Целлюбиозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, маинит, лактоз} и салицин ферментирует. Ант аг он и с ти ч е с к не свойства. Подавляет рост L. acidophilus, L. helveticus, L. fermenti, L. jugurtJH L. buchneri. He ингибирует рост L. salivarius, L. casei, L. plantarum, L. brevis. L. cellobiosus, L.vi.ridescens, L. delbmecku, L. leichmanii, L. lactis. Бактериоцин A 574 получают следуюнгим образом. Пример. Суточную культуру L. acidophilus 574 засевают уколом на чашку с 1,5%ной агаровой средой МРС-1 и выращивают 3 сут. при 37 С в вакуум эксикаторах, в атмосферё углекислого газа. Выращенную макроколонню стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают слоем 4 мл 0,8%-ной агаровой средьт МРС-1, расплавленной и охлажденной до 46°С, смешанной с 0,5 мл четырех часовой инЬикаторной культуры L.jugurti NCJB 2889. После аастывания среды посевы вырышвают при 37G в течение 2 сут. Вокруг макроколонии L. acidophilus 574 наблюдается прозра ная, с нечетким краем, диаметром 33 мм зона подавления роста индикаторного цпгамма L. ju.gurti NCJB 2889. | П р и м е р 2. Получение бактериоцина на жидкой среде И1РС-1. Культуру-L. ас d«3ph it us 574 засевают на жидку1& среду МРС-1 и выращивают при 32°С в течение 4 сут. Для стерили зации к культуре добавляют 10% хлороформа, перемешивают и выдерживают при 37° С в течение 30 мин, после жидкость отделяют От хлороформа и ценхриф тируют. Из надосадопюй жидкости готовят двухкратные серийные разведется, йо ошюй петле каждого разведения наносят на поверх1юсть чаижи с 1,5%-ной агаровойсредой MPG-1, засеягаюй четырехчасовой i инд1п аторной культурой L. Jugurti М СО В 2889. После выращивания при 37°С в течение 2 сутрк производят учет. Титром бактериоцина считают его максимальное разведение, подавляющее рост индикаторного штамма. Титр бактериоцина А 574 на жидкой среде MPt-1 1:128. Бактериощш А574 не инактивируется трип сином, химотрш1си1юм, непсином, папаином, ДНК-азой, PFIK-азой, лизоццмом. При 60°С инактивируется в течение 30 мшг, не реплишг-, руется при пассажах на; индикаторном штамме L.ju gurti NCJB 2889 и хорошо диффундирует в агар. Не диффундирует через целлофан. По чувствительности к бактериоцину А 574 культуры L. helveticus, L.fermenti, L. jurgurti u L. buchneri, обладающие одинаковыми биохимическими и физиологтескими свойствами, дифференцируются на 2 бактериотцшотипа: чувствителыгый к бактериоцину А 574 и устой чивый к бактериоцину А 574. При бактериоцинотитфовании 304 лактобацилл разных видов получены следующие дант.1е: из 187 куль тур L. acidophilus 6 кулы ф относились к первому бактериоцинотипу и 181 - ко второму. Из 4 культур L. helveticus 3 принадлежали к первому и одаа - ко второму бак териоцинотнпу. Из 84 культур L. ferment i 6 относились к первому и 78 - ко второму бактериоцинотипу. Из 16 культур L. Jugurti 5 относились к первому и 11 - ко второму бакриощгаотяпу. С помощью бактериоцина А 574 удается проводить не только внутривидовую дифференциацию описанных выше видов лактобацилл, но и подразделять на бактериоцинотипы культуры биохииических и физиологических вариантов некоторых видов: так из 147 культур L acidophilus,. не ферментировавших маннит и не образующих зерен волютина, 1 культура принадлежала к первому и 146 ко втор(Ж1у бактериоцинотипу; из 15 культур L.acrdophilus, не ферментировавших маннит и образующих зерна волютина, 5 культур относились к первому бактериоцинотипу и 10 - ко второму; го 48 культур L. ferment i, не ферментирующих маннит и не образующих зерна волютина, 5 культур относилось к первому и 43 - ко второму бактериоцинотипу; из 16 культур L. fermenti, расщешйющих манннт и не образующих зерна волютина, 1 культура относилась к первому и 15 - ко второму бактериоцинотипу; из 7 культур L.buc- hneri, не растущих при 0,4%типоля,. ферментирующих маннит и не образующих зерна волютина, 2 культуры принадлежали к первому и 5 - ко второму бактериоцинотипу. При способности продуцировать бактерноцин А 574 культуры лактобацигтл зтсазанных выше видов подразделяются на 2 бактериоцшюгенотипа: продущфуюшкй бактериоцин А 574 и не продуцирующий бактериошш А 574. ., , . , Бактериоцин А 574, продуцируемый штаммом L. acidophilus 574, может быть испопьзован для бактериоцинотинирования и бактериоциногенотдаирования L. acidophilus, L.helvettcus, L. fermenti, L.jugurti, L. buchneri, a также в исследованийх по генетике и физиологии лактобацилл. Фбрмула изобретени я Штамм Lactobacillus acidophilus 574-прддуцент б актериоцина А 574. Хранится в М)ллекцйи микроорга1П1змов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков под номером 1583. М о р фол огОку льту ра льр ые признаки. Полиморфные палочки размером 2-4 х X 0,5-0,6 мкм, располагающиеся поодиночке или попарно-последовательно. Спор и капсул не образует, неподвижен, грамм-положительный. Ацетатный агар. Колонии кмпглые, сероватые, с шероховатой поверхностью и неровцыми краям«, диаметром до 2 мм. Среда МГС-1. Через 24 ч равномерное поMjiiieime и небольшой осадок.

Среда МРС-2. Не растет при и .

Среда МРС-2 с 0,4% типоля. Рост отсутствует.

Физиологические свойства.Факультативный анаэроб, максимум роста при 32-37С.

Молоко створаживает на 3-й сутки, предельное кислотообразовжие 23%.

Желатину не. разжижает. Нитраты не восстанавливает. Каталазу не образует. Глюкозу ферментирует без образования газа.

478876

Целлобнозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, маняит, лактозу и салшшн ерментирует.

5 Антагонистяческяе с в о и с т в а.По|дав ляет рост Lacidofrftilus.L-helvet icu8,L. fernwnti, L. Jugurtl u L. buchneri.

He яяг Внруп рост L. salivarius, L. caevt. L. plantarum, L. brevfs, L. ceHobtosut, L. vt10 ridescens, L. delteneckif, L. leichmanlt, t.lacti«.