Изобретение относится к области микробиологии, а именно к получению биологических препаратов. Известен способ получения бруцеллезного эритроцит арного диагностикум путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком о последующим выделением антигена и сенсибилизации формалини-. зированныхэритроцитов 1. Однако известный способ не позволяет получить диагностикум с высокой ртабильной активностью. Целью изобретения является повыше ние активности диагностикума. Эта цель достигается тем, что дазинтеграцию ведут в дистиллированной воде при рН 8,0-9,0 и сенсибилизацию эритроцитов проводят при 70-72 0 в течение 5.10 мин. Пример. Бруцеллы шт. 19, выра щенные на мясопептонном печеночном глюкозо-глицериновом агаре смывают с питательной среды стерильным физиоло гическим раствором поваренной соли, дважды отмывают им же от остатков гГйтательной среды. Затем доводят до концентрации ЮО млрд. микробных тел в 1 мл (по бруцеллезномустандарту мутности) дистилированной водой с рН 8,0-9,0. Полученную взвесь подвер гают воздействию ультразвуковых волн до просветления (10-16 мин) . По окончании озвучивания микробной дезинтеграт центрифугируют 30 млн. при 5-6тыс. об/мин с це.лью осаждения неразрушенных клеток. Надсадочная жидкость в рабочем разведении на обычном физиологическом растворе служит антигеном для сенсибилизации- формалинизированных и таннизиров эритроцитов. Формалинизацию эритроцитов проводят по методу Фили при рН 7,2-7,4 .. С этсзй целью донорскую дефибринированную кровь разводят 1:1 буферно-фйзиологическим раствором: хлористого натрия 0,137 М, Двузамещенного фосфорноКИС.ЛОГО натрия 0,01 М, однозамещенного фосфорнокислого калия 0,003 М (при рН 7,2-7,4) . К 100 мл разведенной крови быстро добавляют смесь, состоящую из 200 мл буферного раствора. Вдательно перемешивэлт и инкубируют, перемешивая каждый 15 мин на водяной бане при 37°С в течение 2 ч.. , В процессе обработки эритроциты постепенно приобретают TeMHo-j opH4Heвый цвет. Смесь центрифугируют при 900-1000 об/мин, четырехкратно отмывают и готовят 2,5%-ную взвесь (примерный выход со 1СО мм крови 500 мл эри- роцитарной взвеси) .
Таннизацию эритроцитов проводят раствором таннина в разведении 1:20000. При этом смешивают равные объемы 2,5%-ной взвеси эритроцитов и раствора таннина. Перед смешиванием обе части смеси нагревают в термостате при водяной бане при и после смешивания В1дцерживают при 37°С в течение 15 мин. Затем эритроциты трижды отмывают от таннина обычным физиологическим раствором хлористого натрия и разбавляют буфернофизиологическим ра:створом с рН 6,06,2 до 2,5%-ной концентрации. После этого взвесь таннизированных эритроцитов соединяют с равным объемом раствора антигена (1:100) и выдерживают в водяной бане при 70с.в течение 5-10 мин.За 2-3 мин до окончания сенсибилизации добавляют 0,5% формалина Результаты испытания эритроцитарных
(38-39% формальдегида). Затем эритроциты дважды отмывают от избытка антигена нормальной кроличьей сыворот кой,разведенной физиологическим раст йором до 1:100 и доводят ею же или 0,4%-ным глицерином до 2,5%-нойконцентрации,
ТГосле этого к эритроцигорнойвзвес добавляют 0,5% формалина (в качестве консерванта) и используют для постановки реакции.
Результатами испытания специфич.ности диагностикумов в реакции нейтрализации на культурах различных возбудителей, патматериале от здоровых и зараженных бруцеллезом животных установлено, что данный диагностикум не уступает по специфичности аналогичным диагностикумам, выпускаемыми ДагНИВИ и ВИЭВ.
Результаты испытания эритроцитарных диагностикумов на активность Ь РИГА представлены в таблице. диагностикумов на активность в РИГА
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) | 2019 |
|
RU2714305C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) | 2016 |
|
RU2667121C2 |
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ R-БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) | 2011 |
|
RU2491553C2 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА | 2008 |
|
RU2415434C2 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ | 2005 |
|
RU2283498C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) ПРИ МИКОПЛАЗМОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2007 |
|
RU2342155C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ R-БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) | 2008 |
|
RU2411041C2 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ | 2011 |
|
RU2484481C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) С ЦЕЛЬЮ ИНДИКАЦИИ БРУЦЕЛЛ В ПАТМАТЕРИАЛЕ | 2012 |
|
RU2493871C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) ПРИ АНАПЛАЗМОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2007 |
|
RU2366453C2 |
Положительно реагирующие26 Процент положительно реагирующих 48,2
Средний титр реакций1:919
Сомнительно реагирующие12 Процент сомнительно,реа
Процент положительно реагирующих
Средний титр реакций Сомнительно реагирующие Процент сомнительно реагирующих
JS-kt -A f-- f-i- - ---- ;-
Предлагаемый спЪсоб позволяет получить бруцеллезный эритроцитарный диа.гностикум, обладающий высокой активностью и специфичностью.
17 5
32
26
16 10
31,5 9,2
29,6 16,5 ;48,2 59,2 1:159 :538 1:270 1:504 1:409
9 8 6 J 6 21
37,8 18,944,6 64,8 37,8 13,5
1:593 1:2641:4411:381 1:141 11 911 7 25 /
14,8 12,214,8 9,5 33,7 Формула изобретения Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком с
57848796
последующим выделением антигена и сен-водят при температуре 70-72 С в течвсибилизацией формгшинизированных эри-. мне 5-10 мин.
троцитов, отличающийсяИсточники информации,
тем, что, с целью повышения активное-принятые во внимание при экспертиза
тй диагностикума,дезинтеграцию ЁедуТ.1. Иванов А.В., Бельченко В.Б.
в дистиллированной воде при рН 8,0-, РИГА для диагностики Бруцеллеза те9,0 и сенсибилизацию эритроцитов про- лят; Ветеринария. , If 1975.
Авторы
Даты
1980-12-07—Публикация
1978-12-26—Подача