Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума Советский патент 1980 года по МПК A61K39/10 

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к получению биологических препаратов. Известен способ получения бруцеллезного эритроцит арного диагностикум путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком о последующим выделением антигена и сенсибилизации формалини-. зированныхэритроцитов 1. Однако известный способ не позволяет получить диагностикум с высокой ртабильной активностью. Целью изобретения является повыше ние активности диагностикума. Эта цель достигается тем, что дазинтеграцию ведут в дистиллированной воде при рН 8,0-9,0 и сенсибилизацию эритроцитов проводят при 70-72 0 в течение 5.10 мин. Пример. Бруцеллы шт. 19, выра щенные на мясопептонном печеночном глюкозо-глицериновом агаре смывают с питательной среды стерильным физиоло гическим раствором поваренной соли, дважды отмывают им же от остатков гГйтательной среды. Затем доводят до концентрации ЮО млрд. микробных тел в 1 мл (по бруцеллезномустандарту мутности) дистилированной водой с рН 8,0-9,0. Полученную взвесь подвер гают воздействию ультразвуковых волн до просветления (10-16 мин) . По окончании озвучивания микробной дезинтеграт центрифугируют 30 млн. при 5-6тыс. об/мин с це.лью осаждения неразрушенных клеток. Надсадочная жидкость в рабочем разведении на обычном физиологическом растворе служит антигеном для сенсибилизации- формалинизированных и таннизиров эритроцитов. Формалинизацию эритроцитов проводят по методу Фили при рН 7,2-7,4 .. С этсзй целью донорскую дефибринированную кровь разводят 1:1 буферно-фйзиологическим раствором: хлористого натрия 0,137 М, Двузамещенного фосфорноКИС.ЛОГО натрия 0,01 М, однозамещенного фосфорнокислого калия 0,003 М (при рН 7,2-7,4) . К 100 мл разведенной крови быстро добавляют смесь, состоящую из 200 мл буферного раствора. Вдательно перемешивэлт и инкубируют, перемешивая каждый 15 мин на водяной бане при 37°С в течение 2 ч.. , В процессе обработки эритроциты постепенно приобретают TeMHo-j opH4Heвый цвет. Смесь центрифугируют при 900-1000 об/мин, четырехкратно отмывают и готовят 2,5%-ную взвесь (примерный выход со 1СО мм крови 500 мл эри- роцитарной взвеси) .

Таннизацию эритроцитов проводят раствором таннина в разведении 1:20000. При этом смешивают равные объемы 2,5%-ной взвеси эритроцитов и раствора таннина. Перед смешиванием обе части смеси нагревают в термостате при водяной бане при и после смешивания В1дцерживают при 37°С в течение 15 мин. Затем эритроциты трижды отмывают от таннина обычным физиологическим раствором хлористого натрия и разбавляют буфернофизиологическим ра:створом с рН 6,06,2 до 2,5%-ной концентрации. После этого взвесь таннизированных эритроцитов соединяют с равным объемом раствора антигена (1:100) и выдерживают в водяной бане при 70с.в течение 5-10 мин.За 2-3 мин до окончания сенсибилизации добавляют 0,5% формалина Результаты испытания эритроцитарных

(38-39% формальдегида). Затем эритроциты дважды отмывают от избытка антигена нормальной кроличьей сыворот кой,разведенной физиологическим раст йором до 1:100 и доводят ею же или 0,4%-ным глицерином до 2,5%-нойконцентрации,

ТГосле этого к эритроцигорнойвзвес добавляют 0,5% формалина (в качестве консерванта) и используют для постановки реакции.

Результатами испытания специфич.ности диагностикумов в реакции нейтрализации на культурах различных возбудителей, патматериале от здоровых и зараженных бруцеллезом животных установлено, что данный диагностикум не уступает по специфичности аналогичным диагностикумам, выпускаемыми ДагНИВИ и ВИЭВ.

Результаты испытания эритроцитарных диагностикумов на активность Ь РИГА представлены в таблице. диагностикумов на активность в РИГА

Положительно реагирующие26 Процент положительно реагирующих 48,2

Средний титр реакций1:919

Сомнительно реагирующие12 Процент сомнительно,реа

Процент положительно реагирующих

Средний титр реакций Сомнительно реагирующие Процент сомнительно реагирующих

JS-kt -A f-- f-i- - ---- ;-

Предлагаемый спЪсоб позволяет получить бруцеллезный эритроцитарный диа.гностикум, обладающий высокой активностью и специфичностью.

17 5

32

26

16 10

31,5 9,2

29,6 16,5 ;48,2 59,2 1:159 :538 1:270 1:504 1:409

9 8 6 J 6 21

37,8 18,944,6 64,8 37,8 13,5

1:593 1:2641:4411:381 1:141 11 911 7 25 /

14,8 12,214,8 9,5 33,7 Формула изобретения Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком с

57848796

последующим выделением антигена и сен-водят при температуре 70-72 С в течвсибилизацией формгшинизированных эри-. мне 5-10 мин.

троцитов, отличающийсяИсточники информации,

тем, что, с целью повышения активное-принятые во внимание при экспертиза

тй диагностикума,дезинтеграцию ЁедуТ.1. Иванов А.В., Бельченко В.Б.

в дистиллированной воде при рН 8,0-, РИГА для диагностики Бруцеллеза те9,0 и сенсибилизацию эритроцитов про- лят; Ветеринария. , If 1975.