Способ определения биомассы живых клеток Советский патент 1980 года по МПК C12B1/00 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОМАССЫ ЖИВЫХ

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано, для определения биомассы в жидких средах.

Известны способы определения био- 5 массы микроорганизмов, предусматривающие прямой подсчет клеток под микроскопом (в счетных камерах, на фиксированных окрашенных мазках, на мембранных Фильтрах), выделение и О учет высевом на плотные (чашечный метод Коха) и в жидкие (метод предельных разведений) питательные среды l.

Недостатки этих методов - учет как живых, так и мертвых клеток в 15 культуральной среде, длительность способов.

Наиболее близким техническим решением к предлагаемому по достигаемому эффекту является спо.соб определения 20 биомассы живых, клеток в культуральной среде путем внесения в нее красителя с последующим подсчетом окрашенных клеток под микроскопом 2 ,

Недостатком способа является то, 25 что он занимает много времени,

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, ит/т, после внесения красителя клетки 30

КЛЕТОК

осаждают из культуральной среды, а подсчет живых клеток осуществляют по количеству адсорбируемого ими красителя. Для этогр.пробу определенного количества культуральной среды (определенного веса для культуральной среды, содержащей пену, или определенного объема для культуральной среды, не содержащей пену) окрашивают згщанным количеством прижизненного красителя, заведомо большим, чем необходимо для окраски живых клеток,перемешивают и осаждают клетки, не разрушая их, известными методами, а затем по интенсивности окраски жидкости прижизненным красителем определяют количество ЖИВЫХ клеток.

Интенсивность окраски может быть определена с помощью фотоэлектрического колориметра или другими методами.

Интенсивность окраски прижизненным kpacитeлeм жидкости пробы культуральиой среды однозначно зависит только от количества живых клеток, так как прижизненный краситель расходуется только для окраски живых клеток. Чем меньше интенсивность окраски жидкости, тем больше в пробе живых клеток, и чем больше интенсивность окраски

жидкости, тем меньше живых клеток в пробе.

Пример. Проводят определение биомассы живых клеток Candida tropical is культивированных на гидролизйых средах.

Отбирают ПЕюбу культуральной сред аесом 20 г. В нее добавляют 5 мл 1%ного водного раствора метиленового синего. Эту смесь перемешивают в течение 5 с и при перемешивании приливают 5 мл жидкости Флемминга. Через 10 с перемешивание прекращают. Среда в течение 30 с отстаивается - клетки выпадают в осадок. По ..интенсивности окраски жидкости определяют биомассу живых клеток при пoмoIIfи специально отградуированного для этой цели фотоколориметра.

Использование предлагаемого способа определения биомассы живых клеток обеспечивает по сравнению с существующими повышение оперативности определения биомассы живых клеток, что дает возможность использования автоматических приборов, например фотокалориметров, (Это значительно повысит качество управления процессом культивирования микроорганизмов. )

Так как предлагаемый способ технологично прост, на его основе возможно создать автоматический прибор.

Формула изобретения

Способ определения биомассы живых клеток в культуральной среде путем внесения в нее красителя с последующим подсчетом окрашенных клеток, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, после внесения красителя клетки осаждают из культуральной среды, а подсчет живых клеток осуществляют по количеству адсорбируемого ими краси.теля.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Практикум по микробиологии. Под pej;. Н. с. Егорова. Учебное пособие. М. , МГУ, 1976, с. 57.

2.Методы экспериментальной микологии. Под ред. В. И. Билай. К., Наукова думка, 1973, с. 56.