Изобретение относится к микробио лргии и может быть использовано при микробиологическом контроле пивоваренного производства. Предложенный способ новый и в научно-технической и патентной лита ратуре не описан. Целью изобретения является получение поливалентной агглютинирующей О-сыворотки для микробиолегичес кого контроля пивоваренного производства, в частности для идентификации молочно-кислых и уксусно-кислых бактерий. Эта цель достигается тем,что животных-продуцентов иммунизируют воз растающими дозами полиантигенного препарата, полученного путем смеше ния в равных соотношениях О-антигенов, выделенных из различных серологических групп одного вида бактерий, предварительно обработанных ки пячением в течение 2,0-2,5 ч, при этом иммунизацию ведут двумя циклами по четыре инъекции с интервалом между циклами 12-14 дней, а между инъекциями 5-6 дней, причем первую инъекцию проводят подкожно, а все последующие - внутривенно. Кроме того, с целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации молочно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют полиантигенным препаратом, содержащим О-антигены молочно-кислых бактерий серологических групп В,С,Д и Е. А с целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации уксусно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют полиантигенным препаратом, содержащим О-антигены, выделенные из Acetobacter aceti, Acetobacter suboxydans, Acetobacter mesoX у d a u s . Пример. Для получения О-антигенов культуры молочно-кислых бактерий серологических групп В,С,Д,Е выращивают на твердой питательной среде. Используют среду следующего состава, г/л: дрожжевой автолизат 50,0 мл, глюкоза 20,0, пептон 10,0г; KHgPQ 2,0, аммоний лимоннокислый 2,0; МдЗОд-7НаО О,2, MnSO -0,05; агар 20,о; неохмеленное солодовое сусло плотностью 6-8 остальное. « Через 48 ч инкубирования при культуры смывают с агара и отмывают 2-3 раза от питательной среды 0,85%
раствором NaCl, доводят микробные суспензии до концентрации 3-4 млрд микробных тел в 1 мл и кипятят 2 2,5 ч на водяной бане при 100°С.
Перед иммунизацией животных О-антигены молочнокислых бактерий серолгических групп В,С,Л,Е смешивают в равных соотношениях по количеству микробных тел. Таким образом получают полиантигенный препарат.
Для получения сыворотки берут следукрщие штаммы молочнокислых бактерий. Lactobacillus case, var case BKM-1144; L.caseJ var. rhamnosu BKM L. plantarum BKH-B-578; L. brevis BKM B-572.
Схема иммунизации следующая.
Iцикл. Инъекция полиантигена подкожно-доза 2 млрд.микр. тел, внутривенно - доза микр.тел 500 мл
1млрд., 2 млрд.
IIцикл. Инъекция полиантигена Внутривенно - доза, млрд. микр.тел: 2,3,4,6.
Интервал между инъекциями в цикле 5 дней,а между циклами 12-14 дне
На седьмые-восьмые сутки после последней инъекции животных обескровливают и отделяют сыворотку крови. Для этого кровь, собранную в стрильные пробки, ставят на 30-40 мин в термостат при 37°с, а затем в холодильник {при 4°С) на 3-4 ч. После полного отделения сыворотки от сгустка крови ее отсасывают пастероской пипеткой.
Для лучшего хранения сыворотку фильтруют через бактериальный фильтр Зейтца или консервируют мертиолятом 1:100000.
Сыворотку проверяют на наличие титра антител ко всем антигенам, входящим в состав полиантигенд.
Титр антител к каждому 0-антигену, входящему в состав полиантигена, должен быть не менее 1:2048.
Поливалентную сыворотку применяют для идентификации молочно-кислых бактерий в исследуемых образцах с помощью реакции агглютинации на стекле. Перед идентификацией бактерий сыворотку разводят 1:5 стерильным 0,85% раствором NaCl. Для постановки реакции агглютинации берут обезжиренные предметные стекла и на поверхность стекла наносят
2капли сыворотки и каплю физиологического раствора (0,85 Рра NaCl).
В каплю физиологического раствора (контроль антигена) и в одну из капель поливалентной агглютирующей 0-сыворотки вносят исследуемую бактериальную суспензию (антиген) .: Ко второй капле (контроль сыворотки) культуру не добавляют. Внесенную суспензию тщательно перемешивают, чтобы капля жидкоЬти сделалась равнмерно мутной. Реакция прогекает при комнатной температуре, но лучше протекает при подогреве до . Результат учитывают с помощью лупы или микроскопа через 5-10 мин. При положительной реакции в капле с сывороткой отмечается скручивание бактерий в виде зернышек или хлопьев хорошо видимых при покачивании стекла. Жидкость в контроле антигена должна быть равномерно мутной, а в контроле сыворотки прозрачной. Положительная реакция агглютинации свидетельствует о присутствии в исследуемых образцах молочно-кислых бактерий серологических групп В,С, Д,Е.
Полиантигенную О-сыворотку для идентификации уксусно-кислых бактерий получают так же, как в примере. Для иммунизации используют полиантигенный препарат, содержащий О-антигены выделенные из Acetobacter aceti Acetobacter suboxydants, Acetobacter mesoxydans.
Полученная сыворотка содержит антитела, которые способны образовывать специфические соединения с микроорганизмами А.aceti, A.suboxydans u А. mesoxydans.
У полученной сыворотки-проверяют наличие титра антител, ко всем антигенам, входящим в состав полиантигена. Титр антител к каждому О-антигену, входящему в состав полиантигена, должен быть не менее 1:1024.
Идентификацию уксуснокислых бактерий проводят так же, как и в примере.
Результаты проверки чувствительности и специфичности поливалентной агглютинирующей О-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства показывают, что 0-сывороткой можно быстро и легко идентифицировать различные молочнокислые и уксуснокислые бактериивредители пивоваренного производства
Предлагаемый способ обеспечивает получение высокоактивной поливалентной сыворотки с помощью которой предприятия пивоваренной и других отраслей пищевой промышленности смогут быстро (в течение 20-30 мин) выяв. лять молочнокислые и уксуснокислые бактерии-вредители на различных стадиях производства, что даст возможность своевременно принимать необходимые меры для устранения возможности распространения инфекции,которая можетпривести к порче большого количества пива.
Формула изобретения
1. Способ получения поливалентной агглютинирующей О-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства, заключающий с я в том, что животных - про5 789 дуцентов иммунизируют возрастающими дозами полиант.игенного препар ата, полученного путем смещения в равных соотношениях О-антигенов, выделенных из различных серологических групп одного вида бактерий, предварительно обработанных кипячением в течение 2,0-2,5 ч, при этом иммунизацию ведут двумя циклами по четыре инъекции с интервалом между циклакм 12-14 дней, а между инъекциями 5-6 дней, причем первую инъекцию проводят подкожно, а последующие - внутривенно. 2. Способ по п. 1, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью повпученкя полиантигенной О-сыворотки для идентификации молочно-кислых бактерий, продуценты имь(унизируют полиантигенным препаратом, содержащим 0-антигены молочно-кислых бактерий серологических групп В,С,Д и Е. .3. Способ поп.1, отличаю щ и и с я тем, что, с целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации уксусно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют поли антигенньлм препаратом, содержащим О-антигены, выделенные из Acetobacter aceti, Acetobacter suboxydaus, Acetobacter mesoxydaus.
