Штамм бактерий РSеUDомоNаS aeRUGI NoSa, используемый для получения диагностической сыворотки Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 C12N1/20 C12R1/385 

Изобретение относится к микробио - логии и может быть использовано в производстве агглютинирующих групповых диагностических сывороток для дифференциации Р.aeruginosa, вызывающих гнойно-септические заболевания .

Цель изобретения - выделение штамма бактерий Pseudomonas aeruginosa BS 3694 серогруппы Oil, обладающий

нтигенной структурой lib, lie, ITc, to позволяет использовать его для олучения групповой поливалентной сыворотки.

Штамм Р. aeruginosa BD 3694 выелен в клинической больнице г.Горького из смыва с оборудования и депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов . Л.А.Тарасевича под номером 158.

Штамм Р. aeruginosa П-1СК № 158 имеет следующие характеристики,

Культурально- орфологические особенности штамма: грамотрицательные папочки, слегка изогнутые, подвижные; на мясопептонном агаре образует через 18 ч при расплывчатые серовато-зеленоватые колонии, слегка выпуклые в центре, с неправильными краями; дает рост на мясопептонном агаре через 18 ч при 42 С . Биохимическая активность: обладает цитохромоксидазой, аргининдегид- родазой, уреазой, цитратазой, нит- ратазой, проявляет протеолитическуго а1ктивность - разжижает желатину и свернутую сыворотку крови, образует . пиоцианин, не образует сероводород И индол, окисляет глюкозу в аэробных условиях, не ферментирует лактозу, сахарозу, мальтозу, глюкозу, маннит. Антигенные свойства: дает агглютинацию с групповой сывороткой 011 и факторными lib и 11с.

Лизируется.синегнойным бактериофагом в титре Ю по методу Аппель- мана. Устойчив к хлорамфениколу (200 мкг/мл), тетрациклину (25 мкг/ /мл), стрептомицину (23 мкг/мл), канамицину (200 мкг/мл), сульфаниламидам (12800 мкг/мл), чувствителен JC гентамицину, карбеницилину,рифам- пицину, Нуклеотидный состав ДНК 67,8iO,4% Гц.

Пример 1. Антигенную структуру штамма Р. aeruginosa ГИСК № 158 изучают в реакции агглютинации на стекле с сыворотками: групповой На и факторными lib и 11с, а также в опытах агглютинации и адсорбции агглютининов из сывороток, полученных к эталонным штаммам На, lib (Habs II), На, lie (170016 Lanyi) и к штамму ГИСК № 158. Получение антигенов и иммунизацию кроликов проводят по схеме Verder и Evans.

5

0

5

0

5

0

45

В табл.1 приведены результаты исследования 0-антигенов Р.aeruginosa серологической группы 011 в опытах перекрестной агглютинации и адсорбции агглютининов.

Как показано в табл.1 штаммы Habs II (На, lib), 170016 Lanyi (На, Не), а также исследуемая культура ГИСК № 158 дают четкую агглютинацию со всеми тремя сыворотками. Адсорбция сывороток к штаммам Habs II и 170016 Lanyi культурой ГИСК № 158 приводит к полному извлечению из сывороток антител как к гомологичному штамму, так и к штамму-адсорбенту. Адсорбция сыворотки к штамму LS 3694 культурой Habs II, а также культурой 170016 Lanyi приводит к истощению сыворотки только к штамму-адсорбенту, с остальными двумя культурами наблюдается четкая агглютинация: в первом случае за счет антигена с, во вто- рОм - Ь. Полученные данные свидетельствуют о наличии у штамма ГИСК № 158, кроме группового антигена На, двух парциальных антигенов lib и Не одновременно. I

Таким образом, штаммы Р. aerugi nosa ГИСК № 158 имеют антигенную структуру На, lib. Не, не отраженную в Международной схеме строения 0-антигенов Р. aeruginosa,

П р и м е р 2. Приготовление диагностических сывороток включает следующие этапы работы: поддержание чистоты и жизнеспособности штамма, изучение биохимических и серологических свойств штамма, приготовление антигена для иммунизации животных, иммунизацию, кровопускание, отделение сыворотки от сгустка крови и фильтрацию, проверку активности сыворотки.

Штамм хранят Б пробирках с агаром на переваре Хоттингера под вазелино-.

вым маслом при 4

Каждые три меся

ца культуру пересевают, проверяют на чистоту по биохимическим и серологическим свойствам.

Для определения чистоты штамма проводят его рассев до отдельных колоний на плотной питательной среде и контролируют однородность выросших колоний.

Биохимические свойства изучают с помощью набора тестов, используемых для идентификации Р.aeruginosa.

5

Серологические свойства изучают в реакции агглютинации на стекле с групповой и факторными сыворотками.

Для приготовления антигена 15 - 20 колоний суточной агаровой культуры, выращенной на переваре Хоттинге- ра, вносят в 100 мл мясопептонного бульона и инкубируют на шоттель-ап- парате (80 кол/мин) при 37 - 38 С в течение 18-20 ч. Выращенную бульонную культуру прогревают в водяной бане при в течение 1,5 ч. Осадок центрифугируют трижды, промывая каждый раз физиологическим раствором, суспендируют в 5 мл Физиологического раствора. Взвесь по оптическому стандарту мутности доводят до 10,5 ед.

Приготовленный антиген используют для иммунизации кроликов. Иммунизацию проводят внутривенно нарастающими дозами - 0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 мл с интервалами в 4 дня. На б-8-й день после последней иммунизации у животных берут кровь. Сыворот10

959016

ку отделяют от сгустка крови,фильтруют через керамические свечи и определяют активность.

Полученная сыворотка к штамму - P.aeruginosa ГИСК № 158 в опытах агглютинации на стекле со штаммами -BS 3694 (Па, lib. Не), 170016 Lanyi (На, Не) и HaBs II (На,lib) дает четкую агглютинацию. В развернутой реакции агглютинации титр полученной сыворотки равен 1:640.

Использование в качестве антигена при производстве групповой поли- J5 валентной сыворотки 011 одного штамма ГИСК № 158 (На, НЬ, Не) вместо двух (На, НЬ и На, Не) на всех указанных этапах позволяет вдвое сократить время, трудовые затраты,питательные среды, материалы, опытных животных.

Формула изобретения

25 Штамм бактерий Pseudomonas aeru- ginosa ГИСК № 158, используемый для получения диагностической сыворотки.

20

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения диагностических О-специфических сывороток Р. AERUGINOSA. Изобретение может быть использовано также для уточнения классификационной схемы О-антигенов (позволяет дополнить схему новой подгруппой 11A, 11B, 11C)

в научно-исследовательской работе для изучения иммунохимического состава антигенов микроорганизмов. Целью изобретения является штамм бактерий PSEUDOMONAS ACRUGINOSA BS 3694 серогруппы 011, обладающий антигенной структурой 11A, 11B, 11C, что позволяет использовать его для получения групповой поливалентной сыворотки. Штамм Р. AERUGINOSA BS 3694, выделенный при санитарном анализе оборудования в клинической больнице, принадлежит к серогруппе 011. В Международной классификационной схеме строения О-антигенов PSNUDOMONAS AERUGINOSA группа 011 представлена двумя подгруппами: штаммами с антигенной структурой 11A, 11B и 11A, 11C. для получения групповой поливалентной сыворотки 011 используются штаммы обеих подгрупп. Отличием штамма является его антигенная структура 11A, 11B, 11C, включающая наряду с групповым антигеном 11A парациальные антигены 11B и 11C одновременно. Использование штамма BS 3694 вместо штаммов двух подгрупп для получения групповой поливалентной сыворотки упрощает и удешевляет процесс ее изготовления. Штамм PSEUDOMONAS AERUGINOSA BS 3694 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича. Штамму присвоен номер 158. 1 табл.