Штамм бактерий YeRSINIa еNтоRосоLIтIса 037 серовара, используемый для получения диагностической агглютинирующей моноварной сыворотки Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 A61K39/40 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к серологической идентификации иерсиний энтероколи- тика.

Возбудитель кишечного иерсиниоза Y. enterocolitica неоднороден в антигенном отношении. Описано 32 серологических варианта, включающих 34 0-антигена. Для получения моноварных диагностических сывороток отечественные исследователи пользуются коллекцией типовых штаммов иерсиний.

Однако.использование для типирова- нйя иерсиний сывороток, полученных к известным типовым штаммам, позволяет определить серологические варианты у 60- 80 % культур, выделяемых от людей, животных и из объектов внешней среды. Поэтому для расширения возможностей серологической идентификации иерсиний необходим

поиск представителей новых антигенных вариантов и приготовление к ним диагностических сывороток.

Целью изобретения являются получения штамма Y. enterocolitica нового 037 се- ровара, что позволит дополнить коллекцию типовых штаммов.

Штамм Y. enterocolitica 170 (Р-12821) выделен в районе г. Сочи 18.07.84 г. от лесной мыши в баклаборатории Сочинского противочумного отделения.

Штамм депонирован в коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером 170 (Р-12821) и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

XI 00

45 СЛ СЛ 00

В мазках из суточных агаровых культур клетки штамма 170 (Р-12821) имеют вид прямых коротких палочек 0,5-0,8 мкм х 1-1,5 мкм, подвижны при 22° С, спор и капсул не образуют,;...

На агаре Хоттингера (рН 7,2-7,6) через 24 ч роста образует сероватые непрозрачные колонии. По Граму не окрашивается.

В бульоне через сутки дает равномерное помутнение и осадок на дне. Иерсинии указанного Штамма,растут на всех средах, используемых для диагностики знтеробак- терий..

Физико-биохимические признаки. Растет при 4-40° С. Оптиум роста 28- 29°, Не обладает оксидазной активностью, ферментирует с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, сахарозу, арабинозу, манно- эу, ксилозу, 1-сорбозу, d-целлобиозу, d-трегалозу, маннйт, глицерин, сорбит, инозит салицин; не активен в отношении лактозы, рамнозы. d-рафинрзы, d-мелибиозы, адонита, дульцйта, -метил-й-глюкозида, салицина. Образует уреазу, -галактозидазу, орнитйндекарбоксилазу, ацетил метил карбинол при 20°, индол; восстанавливает нитраты в нитриты; не синтезирует лизиндекарбоксилазу, {гаргининдигидрола- зу. При ферментации ряда субстратов образуют газ. Штамм является вторым биохимическим вариантом.

Антигенные свойства. Штамм Y. enterocoHtica 170 (Р-12821) не агглютинируется сыворотками к известным 32-м типовым штаммам,

Сыворотки 3-х серий, полученные путем иммунизации кроликов 0-антигеном штамма Y, enterocolitica 170 (Р-12821), агглютинируют культуру гомологичного штамма в разведении 1:2560-1 :5120 и не реагируют ни с одним из 32-х типовых штаммов известных серологических вариантов.

Культура предлагаемого штамма устойчива к поливалентному чумному и псевдоту- беркулезному бактериофагам, к псевдотуберкулезным Котляровой, 2391, к фагу кишечной палочки Т-3. .

Использование штамма иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Использование штамма Y. entergcofitlca 170 (Р-12821) 037 серовара для получения диатностичеекой агглютинирующей моноварной сыворотки.

Суточную агаровую культуру штамма высевают на пластинку агара Хоттингера (рН 7,1-7,2). Через 24 ч инкубации при 28° отбирают 7-10 колоний в -форме и отсевают их на скошенный агар Хоттингера в пробирке. Суточную агаровую культуру пересевают на поверхность скошенного агара Хоттингера во флаконе. Через 24 ч инкубации выросшую культуру проверяют на чистоту в мазке, окрашенным по Граму. При наличии в мазках грамотрицательных прямых коротких

палочек делают с матраца 5-6 мл 0,85 %-го раствора натрия хлорида.

Полученную взвесь доводят до концентрации 20 млрд. м. к. в мл тем же раствором. Взвесь кипятят на водной бане в течение 2,5

0 ч. После остывания делают высев на стерильность в бульон и на пластины агара Хоттингера. За посевами наблюдают 5 суток, делая ежедневно высевы из бульона на агар. При отсутствии специфического и по5 стороннего роста антигены оценивают как стерильные используют для иммунизации кроликов. Микробную взвесь концентрацией 10 м, к, в мл вводят кроликам весом 2,0-2,5 кг внутривенно в объеме 0,,5; 1 ;

0 1 мл с интервалом в 7 дней. Спустя неделю после последней инъекции берут пробно кровь из ушной вены в количестве 0,5-1,0 мл. Полученную сыворотку используют для постановки реакции агглютинации. Сыво5 ротку титруют двукратно в объеме 0,5 мл 0,85 %-го раствора натрия хлорида, начиная от разведения 1 : 25 до Т : 2560. К ряду разведении сыворотки добавляют по 0,5 мл 1 млрд взвеси суточной агаровой культуры

0 штамма Y. enterocolitica 170(12821)037 серовара. Реакцию предварительно учитывают через 2ч инкубации при 37°С. Затем пробирки Оставляют при комнатной температуре на 18ч, после чего окончательно учи5 тывают результаты реакции. Если исследуемая сыворотка агглютинирует гомологичный штамм в разведении не .менее чем 1 : 1600-1 : 3200, то через 8-10 дней после последней инъекции проводят тоталь0 вое кровопускание. В полученной сыворотке окончательно определяют титр антител. Диагностическим считают разведение t ; 400. Перед употреблением сыворотки раз- водят до 1/10 диагностического титра, т. е.

5 1; 40, разливают по 2 мл в ампулы и исполь зуют для серологической идентификации иерсиний. ...

Пример 2. Серологическая идентификация иерсиний.

0 с сывороткой к штамму Y. enterocolitica 170 (Р-12821) 037 серовара изучают штаммы иерсиний энтероколитика, типичные по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам и не агглютинирующи5 еся сыворотками к 3-м типовым штаммам коллекции Wauters с соавт.

Агглютинацию ставят в одной пробирке в диагностическом титре. Сыворотку к штамму Y. enterocolitica 170(Р-12821)разво- дят 0,85 %-ым раствором натрия хлорида 1

: 5, к 0,5 мл сыворотки, добавляют равный объем 1 млрд. взвеси суточной агаровой культуры исследуемого штамма иерсиния энтероколитика. Пробирку помещают на 2 ч в термостат при 37° С, а затем при комнатной температуре. На следующий день учитывают результаты. При наличии в пробирке с указанной сывороткой четкой агглютинации определяют принадлежность исследуемого штамма к 037 серовару.

Новый типовой штамм Y. enterocolitica 170 (Р-12821) обладает специфическим 0-ан- тигеном 037 серологического варианта, отличающимся от антигенов 32-х типовых штаммов известных серологических групп (таблица).

Антигенные свойства штамма стабильны на протяжении 5 лет.

Использование: медицинская микробиология, серологическая идентификация иерсиний. Сущность изобретения: штамм Yerslnia enterocolltlca 170 (Р-12821) выделен от лесной мыши бактериологическим способом. Штамм депонирован в ГИСКим. Л.А.Тарасевича под № 170. Сыворотку получают путем иммунизации кроликов убитой кипячением микробной взвесью штамма 170 (Р-12821). Диагностическое разведение 1 : 400, сыворотку используют для серологической идентификации иерсиний, принадлежащих к серовару 037, 1 табл.

Формул а изобретения Штамм бактерий Yerslnla enterocolitica ГИСК № 170 037 серовара, используемый

Результаты реакции агглютинации с сывороткой к штамму Y. enterocolitica 170

Название групп штаммов

К-во изученных штаммов

Y.enterocolltlca 32-х сероваров Y.enterocolltlca не агглютинирующиеся сыворотками против 32-х серологических вариантов

для получения диагностической агглютинирующей моноварной сыворотки.

Из них агглютинируется сывороткой к штамму У. 170 (Р- 12821)

32

О

157