разогревают до температуры 45-50°С и вводят в него расплавленный агар, который заполняет пространство между гранулами. При дальнейшем охлаждении происходит затвердение всего содержимого сосуда в виде агарового блока, из которого затем вырезают маленькие блочки, содержащие фрагменты корня с окружающими его микроорганизмами. Регидратацию, заливку и дальнейщую обработку для электронной микроскопии производят обычным путем.
Пример. Проросток Alnus glutinosa помещают в химическую пробирку с дном, оттянутым в виде пастеровской пипетки и заполненную до середины гранулами агара, находящимися на марлевом тампоне, помещенном на дно сосуда непосредственно перед его сужением. Питание растения осуществляют путем заполнения средой Крона слоя агаровых гранул с помещенным в него корнем растения при одновременном вытеснении воды, заполнявщей этот слой ранее, с помощью насоса, присоединенного к оттянутому дну сосуда. По истечении суток после помещения растения в сосуд, в слой гранул вводят суспензию растертых клубеньков Alnus glutinosa. После выдерживания ее в слое в течение трех часов производят очередную поливку для удаления компонентов суспензии не адсорбированных на поверхности гранул и корня. Последующие порции питательной среды вводят через каждые 24 ч до окончания опыта, который продолжается до 15 суток. Фиксирование корня с окружающей его ризосферой производят путем последовательного пропускания через сосуд компонентов глютаросмиевой фиксации, после чего сосуд разогревают до температуры 4б°С и заполняют слой гранул 2,0%-ным агаром в расплавленном виде. После охлаждения сосуда и изъятия агарового блока из последнего вырезают маленькие блочки с фрагментами корня и ризосферы, дегидрируют их в серии спиртов, заливают в аралдит, делают ультратонкие срезы, которые затем окрашивают и исследуют на электронном микроскопе. Предлагаемый способ позволяет получить
картину ризосферы большого масщтаба, что дает возможность изучать состояние микроорганизмов на значительно большем расстоянии от корня растения, а также исключает возможность каких-либо искажеНИИ в пространственном расположении элементов прикорневой зоны.
Формула изобретения
Способ подготовки образца для электронномикроскопических исследований ризосферы корней высщих растений, включающий культивирование растений в присутствии суспензии микроорганизмов с последующим
фиксированием, отличающийся тем, что, с целью сохранения пространственного расположения элементов ризосферы корйей, растения культивируют в сосуде с гранулированным агаром, пропуская через него питательную среду, в после фиксирования вводят расплавленный агар в разогретый сосуд с последующим охлаждением сосуда.
Источники информации,
принятые во внимание при экспертизе
1.Возняковская Ю. М. Микрофлора растений и урожай. М.-Л., «Колос, 1967.
2.Lalond М et Qnispel А. Canadian Jurnal of Microbiology, 1977, 23, № 11, p. 1531
(прототип).
