Синтетический амфолит-носитель дляРАздЕлЕНия биОпОлиМЕРОВ МЕТОдОМизОэлЕКТРОфОКуСиРОВАНия и изОТАХОфОРЕзА Советский патент 1981 года по МПК C08G73/02 

(54) СИНТЕТИЧЕСКИЙ АМФОЛИТ-НОСИТЕЛЬ ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ БИОПОЛИМЕРОВ МЕТОДОМ ИЗОЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЯ И ИЗОТАХОФОРЕЗА

1

шении 1:0,5. После центрифугирования при 5000 g в течение 30 мин к центрифугату добавляют при охлаждени и перемешивании акриловую кислоту до //ольного соотношения аминогруппа; Кислота, равного 2:1. Смесь нагрева|от при перемешивании в течение 1620 ч при температуре 60-100 С. Все операции проводят в атмосфере инертного газа.. Для снижения поглощения в ультрафиолетовой области спектра полученных продуктов последние могут С5ыть обработаны активированным углем

Получаемый по предлагаемому способу амофлит-носитель может быть ис- пользован для разделения биополимеров с иэоэлектрическими точками, лежащими в интервале рН от 3,0 до 10,0 с высокой степенью разрешения.

Пример 1. В конической колбе, снабженной патрубками для ввода и вывода инертнохо газа и магнитной мешалкой, при нагревании растворяли 15,4 г N ,N-метиленбисакриламида в 116,8 г 25%-ного водного раствора ТЭТА. После центрифугирования и отделения осадка добавляли акриловую кислоту (до значения рН 7,8 в 1%7ном водном растворе по отбираемым пробам). В круглодонной колбе, снабженной мешалкой, обратным холодильником и патрубком для ввода, аргона, проводили синтез в течение 20 ч при температуре ..Полученный амфолитноситель пропускали при 50°С через колонку емкостью 100 мл с влажным активированным углем и промывали колонку 100 мл дистиллированной воды. Продукт концентрировали на пленочном испарителе до 40%-ной концентрации.

Выход амфолита-носителя 79%.

Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру 1, но порядок операций следующий. После добавления акриловой кислоты к раствору ТЭТА проводили синтез в течение 10 ч при затем добавляли N, N-метиленбисакриламид, дополнительно нагревали с;есь при перемешивании в течение б ч при 100°С. После центрифугирования и очистки активированным углем продукт упаривали до 40%-ной концентрации.

Выход амфолита-носителя 83%.

Амфолит-носитель, полученный по примеру 1, подвергали электрофокусированию на приборе 1Ке-2217 MULTIPHOR (Швеция). Определяли градиент рН и спектры разделения смесей белков.

Параллельно проводили опыт с амфолинами. По разделяющей способности амфолит-носитель, полученный по предлагаемому способу, не уступает импортным амфолитам-носителям.

При титровании фракции амфолитовносителей, полученных при изоэлектрофокусировании в колонках с гелем Молселект Г-50 (Венгрия), получены значения буферной емкости для известного амфолита и амфолита-носителя, полученного по предлагаемому способу.

Буферная емкость амфолита-носителй полученного по примеру 1, в 1,2-2,5 раза выше в интервале рН 5-8, чем буферная емкость известного амфолита.

Преимущества предлагаемого способа получения амфолита-носителя следующие : упрощается процесс и улучшается качество амфолита-носителя, снижается его стоимость по сравнению со стоимостью ныне импортируемых реактивов. Например, цена амфолита-носителя фирмы Serva (ФРГ) согласно рекламному проспекту на март 1977 г. колеблется в пределах 8500-21200 заПс1дногерманских марок в пересчете на 1 кг 100%-ного амфолита-носителя, цена же исходных компонентов для синтеза .амфолитов-носителей .по предлагаемому способу намного ниже: ТЭПА 180 руб/кг, ТЭТА 80 руб/кг, акриловая кислота 30 руб/кг, N ,М-метиленбисакриламид 200 руб/кг. Следовательно, 1 кг 100%-ного амфолита-носителя f(6e3 учета затрат на труд) составит ориентировочно 70-100 руб/кг.

Формула изобретения

Применение сшитых водорастворимых полимеров на основе низкокипящих полиэтиленполиаминов, акриловой кислоты и N ,N-метиленбис я иламида в качестве синтетического амфолита-носителя для разделения, биополимеров методом изоэлектрофокусирования и изотахофореза.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 3485736, 260-75, опублик. 1969 (прототип).