Способ получения иммобилизованныхфЕРМЕНТНыХ пРЕпАРАТОВ Советский патент 1981 года по МПК C07G7/02 

пнрролидона (ВТП) и аллилтиоглицидилового эфира (АТГЭ) варьируют в широких пределах (т : п) от 1 : 9 до 9 : 1 и таким образом изменяют число групп, способных связываться с ферментами. Например, смешивают 9,52 г Л-ВТП и 3,25 г аллилтиоглипидилового эфира и к смеси добавляют 0,055 г динитрила азобисизомасляной кислоты, растворенные в 1 мл хлороформа, и нагревают 30 час при 65°С. Полученный гелеобразный продукт разбавляют 25 мл хлороформа и осажда)от добавлением пятикратного количества диэтиЛОИ01-0 эфп|)а. Образовавшийся осадок высупшвают в вакуумсушильном шкафу. Выход составляет 65,6%. Анализ на содержание .мономеров в полученном сополимере составляет ВТП 72,7, АТГЭ 27,3%. Пример 1. К г сополимера ВТП - АТГЭ .юбаьляют 50 мл ферментного растBOjia (амплоризина Г 10 X), который получают предварительпым растворением 500 мг амилоризина (135 мг по белку) в 50 мл 0,1 М универсал1)ного буфера (М,ВО.,, 11зРО4, СПзСООН, КаОП) при рП 3-4. Смесь тщательно перемешивают и оставляют ири 4°С в течение 6 час. Полученный целевой продукт отмывают от несвязавшегося белка и продуктов реакции 0,1 М универсальным буферным раствором с рН 8,8. Каждую фракцию исследуют иа иоглошение при 645 им на СФ-16 и па амилолитическую активность (ГОСТ 20264.4-74). Определяют количество песвязавшегося белка. Затем иммобилизованиый амилоризин Г 10 X п)омывают водой до иолпого исчезновения оптической плотности в промывной воде. Удельная активность иммобилизованного ферментного препарата составляет 10,0 ед/г. Пример 2. К 800 мг сополимера ВТП - АТГЭ .чобавляют 200 мг амилоризина Г 10 X, предварительно растворенного в 50 мл. буфера. Смееь неремешивают и оставляют при 4С в течение 6 час. Остальные нроцессы нроводят аналогично примеру 1. У.чельпая активность иммобилизованного фермента составляет -7,2 ед/г. Пример 3. К навеске сополимера 1 г добавляют 50 мл ферментного раствора при рП 5,0, содержащего трипсин (125мг). Смесь тщательно перемешивают и оставляют при 4°С в течение 12 час. Остальиые операции проводят, как в примере 1. дёльная активность иммобилизованного трппсина составляет 16 ед/г. Время полуинактивации при 50°С 210 мии. В табл. Г приведены результаты оиисывас гого сиособа и известного ири получении иммобилизованного ферментноГО препарата иа основе амилоризина Г 10 X. обработка для активации носителей фС1)МеНТО 5. Например, ири прочих равных условиях стеиспь гидролиза крахмала при 30°С в течение 30 мин составляет но предлагаемому способу 70%, по известному способу 25%. О преимуществах применення иммобилизованных ферментов в конкретных процессах (гидролиз крах.ала, гидролиз нищевого белка) и данные о применении иммобилнзованного амилоризина для осахаривания и иммобилизованного трипснна для получения гидролизата пищевого белка из щрота хлопчатника приведены в табл. 3. Ф о ) м у л а изобретен и я 1. Способ получения нммобилизованныч ферментных препаратов на основе ферментов или ферментных препаратов связывашкм lix с полимером на основе производного -ги1нилпирролидона и эфнра глици.чплового спирта при ионижеиной температуре II оптпмальном значении рЫ среды, о т .1 и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью увеличения активности и новыщения стабильности препарата, в качестве полимера используют сополимер М-винилтионнр|юлндона и аллилтиоглицидилового эфира, а связывание проводят при 4-б°С. 2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что связывание проводят прн весовом соотношении фер:,1ент или ферментный препарат :нолимер, равном 1 : (2-8). 3.Снособ но п. 1, отличающийся тем, что в качестве фермента используют трипсин, а связывание ведут при рН 4,9-5,1. 4.Способ по п. 1, отличаю щ и и с я тем, что в качестве ферментного препарата используют амилоризин Г 10 X, а связывание проводят при рН 3-4. Источники информации, принятые во вннмание при эксиертизе 1. Таджиев М. X., Ибрагимов Ф.. Хасанов X. Т., Джанбаева И. Р. и Рахимов М. М. Иммобилизация i; стабилизация ферментов полимерами с функциональными эноксигруппами. «Ирикладная биохимия и микробиология-, М.. «Наука, т. XIV, вып. 5, 1978, с. 703-708 (прототип).