Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале Советский патент 1981 года по МПК G01N33/52 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

1

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине для биохимических исследований.

Известен способ определения активности супероксиддиемутазы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления Cll.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Эта цель достигается тем, что способ определения активности cynet oксиддисмутазы в биологическом материале осуществляют путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления, в качестве субдзтрата используют аминопроиэводные 1,2 диоксибензсла формулы

аминоароматический или амигде R RI ноалифатический остаток; алкокси или аминоостаток.

Предлагаемой способ .определения активности супероксиддисмутазы осуществляют следующим образок.

В кювету спектрофотометра помещают забу(1.еренную среду, например, 1/15 М фосфатный буфер рН 7,0 с 0, ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) уравновешенную по кислороду с атмосферным воздухом. Среду постоянно пе10ремещают механической мешалкой, вносят материал, исследуе№1й на активность супероксиддисмутазы, и вводят 20 мкМ 4-анилино-5-метокси-1,2-диоксибензола или другого ами15 нодифенола, из указанных выше. Регистрируют ув.еличение оптической плотности на максимуме поглощения образующегося производного О-бензохинона. Активность супероксиддисмута20зы рассчитывают по степени торможения реакции автоокисления, как принято для непря1« х методов определения активности этого фермента.

Исследования по.казали наличие ли25 нейной зависимости между обратной величиной скорости автоокисления и количеством супероксиддисмутазы в широком диапазоне концентраций фермента, что позволяет, пользуясь этой

30 зависимостью, определить эквивалентнов ксхпичество фермента по величине скорости автоокисления АМОБХН2. Использование предлагаемого способа позволяет проводить определения активности супероксиддисмутазы в фи .зиалогической области значений рН, что невозможно при использовании .известного способа. Тем самлы обеспе чивается возможность контроля активности этого фермента в условиях, бли ким к условиям его функционирования биологических тканях. Способ обеспег чивает большую информативность и дос товерность получаеншх результатов и вместе с тем обеспечивает большую практическую значимость получаемой информации. Формула изобретения Способ определения активности супероксидвдскотазы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления, о т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве субстрата используют аминопроизводное 1,2 диоксибензола формулы ОН,.,;. NHI, где R,, - аминоароматическип или аминоалифатический остаток; R- - алкокси или аминоостаток. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Misra Н.Р. and TrioBovich I The Ко&е of Superoxide anion in the autoxidotion of cpinephrihe aud Siropfe assay ofor Superoxide dismutase Bio&.Chem. 1972, T.247. c.31703175.