Способ снижения иммунологической активности лимфоцитов Советский патент 1981 года по МПК A61K31/47 A61P37/06 

(54) СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ . ЛИМФОЦИТОВ

I

Изобретение относится к медицине, к проблеме трансплантации органов и тканей для лечения депрессий кроветворения.

Известен способ снижения иммунологических свойств лимфоцитов путем обработки клеток кроветворной ткани NHjCB с последующим введением суспензии реципиенту р .

Однако МНлС1 является токсичным веществом и применение его в кли- нической практике связано с известны ми трудностями.

Цель изобретения - упрощение и повышение эффективности способа за... счет ослабления гомотрансплантационной активности лимфоцитов

Эта цель достигается тем, что способ снижения иммунологической активности лимфоцитов осуществляют путем обработки суспензии клеток кроветворной ткани органическим веществом с последующим введением суспензии реципиенту, суспензию клеток обрабатывают 14,9-15%-ным раствором глицерина в течение 15-30 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят суспензию клеток селезенки, лимфоузлов, или Костного мозга экспериментальных животных на консервирующем растворе, в состав которого входит сахароза, глюкоза, ЭДТУМал, натрий лимоннокислый трехзамещенный,

10 10%-ньй раствор желатина, ,К полученной суспензии клеток добавляют глицерин в 14,9-15%-ной концентра ции. Взвесь клеток с глицерином хранится в .холодильнике тфи в теISчение 15-30 мин.,

Для доказательства снижения иммунологической активности лимфоцитов под действием 14,9-15%-ного глицерина использованы методы Ы vivo

учета отмены эндогенного колониеобразования (пример 1), учета инакти вации несингенйых стволовых клеток (пример 2 и З). Пример 1 . 1&ш1ей-гибридов ( СВА X C57B16)f облучают на аппарате ЭГО-2 -лучами дозе 600 р. С целью отмены эндогенного колонн образования через 20 ч :после облучекия мышам вводят суспензию клеток лимфатических узлов мьшей СВА в разной концентрации. Первой группе вводят взвесь клеток без глицерина, вто рой группе - взвесь joieTOK с 14,915%-ным глицерином (при экспозиции 15 Ю1н): третьей грзшпе - взвесь ) . . f клеток с 14,9 %-ным глицерином , (при экспозиции 30 мин); четвертая группа служит контролем облучения. На 9 день после трансплантации клеток у реципиентов извлекают селезенки, фиксируют их в растворе Буэна и 10%-HDM растворе формалина. Подсчитывают число макроскопически види мых колоний в каждой селезенке. Вычисляют индекс инактивации. Установлено, что введение клеток лимфатических узлов (без глицерина} в дозе 1,0x10 ; 2, и 4,0x10 приводит к 53,5; 82,2; и 93,1% инактивации эндогенных колониеобразующих единиц соответственно. После экспозиции клеток лимфатических узлов с глицерином в течение 15-30 мин наблюдается значительное снижение или полное отсутствие инактивирующего эффекта лимфоцитов доноров на стволовые клетки реципиента (табл.1. . В. табл. 1 приведены изменения ингт активации эндогенных КОЕ под влияни ем 15%-ного глицерина при трансплан тации йнтактных клеток лимфатически узлов мышей линии СВА сублетапьно облученным ( 600 р ) реципиентам (СВА X С57В1б)р4 . При трансплантации реципиентам клеточной суспензии йнтактных лимфо цитов производят пересчет на количе во живых (морфологически сохранных) клеток. Пр.имер 2. Свежезаготовлен ные клетки костного мозга мьшей С57В16 в дозе 5,0x10 добавляют к клеткам селезенки мышей линии СВА в разной концентрации. Причем взвес клеток селезенки мьш1ей СВА готовят в трех видах суспензии: свежезагото ленные клетки, свежезаготовленные клетки с 14,9-15%-ным глицерином ( при экспозиции 15 мин и свежезаго товленные клетки с 14,9-15%-ным глицерином при экспозиции 30 мин 4 мешанную суспензию клеток вводят нутривенно мьш1ам-гибридам (СВАх C57B16)F через 20 ч после облучеия Мышей-реципиентов облучают на ппарате ЭГО-2 J -лучами Со в летательной дозе 880 р (опь1ты с экзогенньши колониями). Установлено, что свежезаготовлен- ные клетки селезенки мышей СВА в до6зе 4,0 X 10 инактивируют стволовые клетки мьшей С57В16. Индекс инактивации при этом равен 51,3%. Добавление к клеткам селезенки глицерина (при экспозиции 15 мин ) приводит к снижению индекса инактивации несингенных стволовых клеток до 35,8% (при той же дозе клеток селезенки мышей СВА - 4,0 х 10 X Увеличение времени эквилибрации клеток селезенки с глицерином до 30 мин приводит котмене инактивирующего эффекта стволовых клеток мьш1ей линии С57В16 лимфоцитами селезенки мьш1ей линии СВЛ (табл.2;. В табл.2 приведена инактивация несингенных КОЕ при трансплантации смеси клеток интактного костного мозга мьш1ей С57В16 с интактными (без глицерина и с 15%-ным глицерином ) клетками селезенки мьш1ей СВА летально (880 р) облученным реципиентам (СВА X )F . Пример 3. Свежезаготовленные клетки костного мозга мьш1ей С57В16 в дозе 5,0x10 добавляют к клеткам костного мозга линии СВА в разной концентрации. Условия приготовления суспензий облучения, трансплантации клеток, и исследования селезенок одинаковы с примером 2. Установлено, что при взаимодействии клеток костного мозга мьшей разных линий (сВА и С57В16) инактивации подвергаются стволовые клетки мьшей С57В16. При дозе свежих клеток костного мозга мьш1ей СВА равной 0,5x10 индекс инактивации ... составляет 25,0%, а при дозе 4,0x10 57,0%. Добавление глицерина к костному мозгу мышей СВА (при эксдозиции 15-30 мин) приводит к значительному снижению или отмене эффекта инактивации стволовых клеток мьштей С57В16 лимфоцитами костного мозга мышей СВА Стабл.З). В табл.3 приведена инактивация несингенных КОЕ при трансплантации смеси интактного костного мозга мьш1ей С57В16 с интактными (без глицерина и с 15%-ным глицерином) клетками костного мозга мьшей СВАлетально облученным реципиентам СВА X C5/B16)F.

Предложенный способ позволяет значительно снизить гомотрансплантационную активность лимфоцитов кроветворных тканей.

Таблица 1

Таблица 2

Формула изобретения

Способ снижения иммунологической активности лимфоцитов путем обработки суспензии клеток кроветворной ткани органическим веществом с последующим введением суспензии реципиенту, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения эффективности способа за счет ослабления гомотрансплантационной актив/ ности лимфоцитов, суспензию клеток обрабатьюают 14,9-15%-ным раствором глицерина в течение 15-30 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

I. О.М. Strong at all.Differential susceptib. 11 ty. of Murine T-and B-Lymphocytes to Frelz-Thaw and Hypotonic Shook, Criobiology, 1974, y.l, 12, p.127-138.