Способ выявления менингококкового антигена Советский патент 1982 года по МПК A61K39/02 

(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МЕНИНГОКОККОБОГО АНТИГЕНА

I

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и касается способа выявления менингококкового антигена в биологических субстратах (в крови, ликворе).

Игзвестен способ выявления менингококкового антигена путем фиксации иммуноглобулинов кроличьей антисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемого антигена и инкубирования с последующим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с ферментной меткой 1.

Однако известный способ недостаточно чувствителен для выявления менингококкового антигена в биологических субстратах (в сыворотках, ликворе) и требует большого количества сыворотки.

Цель изобретения - повьиыение чув ствительности способа.

Эта цель достигается тем, что выявление менингококкового антигена проводят путем фиксации иммуноглобулинов кроличьей антисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемой сыворотки, содержащей менингококковый антиген, и инкубирования

10 с последующим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с меткой, при15чем иммуноглобулины используют в концентрации 5-7 мкг/мл, фиксацию проводят при рН 9,4-9,8, а инкубирование с исследуемым антигеном ведут в течение 50-60 мин.

20

Пример. В лунки мнкротитровальных плашек вносят раствор гаммаглобулиновой фракции в концентрации 3-7 мкг/мл (по белку) с содержание 38 антител 0,1 мкг/мл. Плашки с содержанием лунок инкубируют 18-20 ч при +4 - +5°С. Содержимое из лунок удаляют. Лунки промывают от несвязавшихся белков и вносят исследуемый субстрат. Плашки инкубируют 50-60 мин при +37- -38°С. Содержимое из лунок удаляют и лунки отмыва ют от несвязавшихся сывороточных белков, после чего в лунки вносят тот же гаммаглобулин, которым были сенсибилизированы плашки, но меченый ферментом. Инкубируют плашки 50-60 мин при +37°- +ЗУ°С. Содержимое лунок удаляют, лунки отмывают ОТ несвязавшихся меченых антител и вносят в них раствор субстрата на фермент-метку. Результаты учитывают качественно визуально по разнице в окраске раст вора субстрата в лунках, сенсибилизированных менингококковыми антителами и в лунках, сенсибилизирован ных инертным белком, и характеризуют количественно по превышению разности /экстинкций в этих двух лунках двух ошибок измерения используемого спектрофотометрического устройства Использование предложенного спо соба позволяет определять менингококковые антигены с содержанием их в биологических субстратах до 0,0001 жг/мл с целью ранней диагостики менингококковой инфекции ри эпидемиологическом обследовании азличных контингентов для своевреенного выявления опасных источников менингококкОБОЙ инфекции. Формула изобретения Способ выявления менингококкового антигена путем фиксации иммуноглобулинов, кроличьей аитисыворотки против менингококкового антигена на полистироле, внесения исследуемого антигена и инкубирования с последутадим внесением меченых антител к иммуноглобулинам, повторным инкубированием смеси и выявлением менингококкового антигена по образованию комплекса с меткой, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, иммуноглобулины используют в концентрации 3-7 мкг/мл, фиксацию проводят при рН 9,4-9,8, а инкубирование с исследуеь&м антигеном ведут в течение 50-60 мин. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Фримень X. Иммунологические методы. М., Мир, 1979.