Способ получения биомассы еSснеRIснIа coLI м-17 Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 A61K39/108 C12R1/19 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ESCHERICHIA COLI М-17

Изобретение относится к микробиологии и касается производства биомассы Escherichia coli М-17.

Известен способ получения биомассы Escherichia coli М-17 для производства колибактерина путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культивированием в глубинньпс условиях при интенсивном перемешивании и непрерывной аэрации и вьщелением целевого продукта 1.

Однако известный способ не позволяет увеличить выход живой биомассы Е, соП М-17 (выход живой бцомассы из расчета на 1 таблетку весом 0,25 г составляет 10,5 млрд. клеток) .

Цель изобретения - повьшение выхода живой биомассы.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения биомаосы Escherichia coli М-17 для производства колибактерина осуществляют путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культиБ ированием в глубинных условиях при интенсивном перемешивании и непрерывной аэрации и выделением целевого продукта, культивирование ведут в присутствии,ионов двухвалентного железа в концентрации

Г5.

8-10 М при посевной дозе исходной культуры 250-700 млн, микробных клеток на 1 мл среды.

Способ осуществляют следующим образом.

Подготовку ферментера осуществляют, известным путем. Затем в ферментер вводят стерильный казеиновый бульон, содержшций 1,25% желатины с содержанием аминного азота в пределах 220-270 мг и пептона 0,5-0,6%, ,6-7,7. После этого в ферментер добавляют маточную культуру бактерий Е. соП М-17 до концентрации 250-700 млн. микробных тел на 1 мл среды в ферментере. Затем в ферментер вводят необходимую дозу стериль ного раствора ионов двухвалентного железа.; которую рассчитывают с учетом того, чтобы ее концентрация в ферментере была 210 -8-10 М. Культивирование ведут 7 ч при темпе ратуре , скорости вращения мешалки 500-700 об/мин, аэрации стерильным воздухом, поддерживая рН в пределах 7,6-7,9, Причем для коррегирования рН среды используют 40% раствор глюкозы, ноддерлшвая рН в начале выращивания (первые 2,5 ч) в пределах 7,6-7,7 и 7,8-7,9 в конце выращивания, не допуская резких колебаний рН. Общее количество бактерий М-17 в процессе культивирования определяют обычными способами но оптической плотности, а количество жи вых, например, путем высева на чашки Петри с агаром Эндо. Пример. В ферментер рабочей емкостью 2 л вводят стерильный казе иновый бульон в количестве 1,8 л, содержащий 1,25% желатины, 250 мг аминного азота, 0,5% пептона, , После установления температуры 37 в ферментер добавляют маточную куль туру бактерий Е. coii М-I7 до конце трации 250 млн, микробных TejJ на 1 мл среды. Затем в ферментер добав ляют 0,2 мл стерильного раствора FeS04 7Н,0 с концентрацией 5Ш М, при этом концентрация ионов двухва лентного железа в ферментере будет /V 5- . Культивирование ведут 7 ч при те пературе 37°С,, скорости вращения ме шалки 700 об/мин, аэрации стерильным воздухом, поддерживая рН в пред лах 7,6-7,7 первые 2,5 ч и в пределах 7,8-7,9 в конце выращивания путем подачи 40% раствора глюкозы, не допуская резких колебаний рН. Увеличение к концу культивирования выхода живых бактерий Е, coll М-17 по хфедлагаемому способу по сравнению с контролем составляет 21%, Применение предлагаемого способа показало, что после 7 ч культивкрования среднее увеличение выхода живых бактерий Е, coli М-17 по сравнению с контролем составляет 24%, Внедрение пре,цлагаемого способа только в производстве бактерийных препаратов, в частности сухого колибактерина, позволит существенно увеличить выход целевого продукта без дополнительных затрат сырья (в среднем на 18%), что даст значительный экономический эффект. Формула изобретения Способ получения биомассы Escherichia coli М-17 для производства колибактерина путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культивированием Б глубинных условиях при интенсивном перемешивании и непрерывной аэрации и выделением целевого продукта, о т „Г: и ч а ю щ и и с я тем5 что, с целью повышения выхода живой био массь „ культивирование ведут в присутствии ионов двухвалентного железа концентрации 210 -8-10 М при посевной дозе исходной культуры 250-/00 млн о микробных клеток на 1 мл. среды, Источники информации.; принятые во внимание при экспертизе 1 . Авторское свид,етельство СССР № 324771, кл. А 61 К 23/00, С 12 К 3/00. 1971.