Способ получения колибактерина Советский патент 1976 года по МПК A61K23/00 C12K3/00 

Изобретение относится к производству бактерийных препаратов, а именно к способу получения копибактерина.

Известны способы получения колибактерина путем глубинного культивирования бактерий в присутствии глюкозы с последующим высушиванием целевого продукта.

Указанные способы, предусматривающие поддержание концентрации глюкозы в течение всего времени культивирования на уровне О,1-О,2%, связаны с отмиранием большого числа клеток штамма.

Цель изобретения - увеличение концентр ции жизнеспособных клеток в глубинных взвесях и устойчивости их при лиофилизации.

Эта цель достигается тем, что раствор глюкозы начинают вводить к окончанию лагфазы роста бактерий и вводят постоянной дозой в количестве от 0,5 до 1 см с постоянным уменьшением интервала между подачами с 6 мин до 6 сек.

Согласно изобретению колибактерин получают путем глубинного культивирования в реакторе известного типа емкостью 1О-25 л, заполненном на 1/2-2/3 объема средой, содержащей казеиновый бульон с 1,25% желатины при содержании амин- ного азота 22О-27О мг и пептона О,5-О,6% и рН 7,6-7,7. Посевным материалом служит восемнадцати-два.ццатичасшвая агаровая культура, смытая тем же бульоном, или десят -двенадцатичасовая бульонная культура в количестве 10% к среде. Плотность посева 20O-25G млн. микробных тел на 1 мл среды. Культивирование ведут 6-7 час при 37°С, отбирая каждые 2 час пробы для определения гуетоты взвеси и чистоты культуры. К окончанию лаг-фазы роста бактерий начинают вводить 4О9&-ный раствор

глюкозы, вводя через каждые 6 мин по

0,5-1 см . Введение глюкозы обеспечивает поддержание рН среды на уровне 7,6 в начале выращивания и на уровне 7,8-7,9 в конце.

При начале ввода глюкозы через 30 мин после посева указанную частоту ее ввода

выдерживают в течение 1,5 час. Следующие ЗО мин глюкозу вводят такими же порциями, но через каждые 3 мин. Последующие ЗО мин - через 1,5 мин, следующие 30 мин - через 1 мин, следующие ЗО минчерез ЗО сек, следующие ЗО мин - через 20 сек, следующий час - через 8 сек и последний час - через 6 сек. Всего за 6,5-7 час кулнтивирования расходуется О,7-О,9 л 40%-ного раствора глюкозы.

По окончании выращивания микробную взвесь охлаждают до 20°С и переводят в стерильные бутыли, в которые вводят сахарозу до концентрации около 10%, Дальнейшую обработку ведут известными приемами.

Формула изобретения

Способ получения колибактерина путем глубинного культивирования бактерий в присутствии глюкозы с последующим высушиванием целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения концентрации жизнеспособных клеток в глубинных взвесях и устойчивости их при то- филизации, раствор глюкозы начинают вводить к окончанию лаг-фазы роста бактерий и вводят постоянной дозой в количестве от 0,5 до 1 смЗ с постепенным уменьшением интервала между подачами с 6 мин до 6 сек.