Способ выявления ореолообразующих клеток лейкоцитов Советский патент 1982 года по МПК A61B5/00 G01N1/28 G01N33/50 

(54) СПОСОБ ВЫЯВШНИЯ бРЕОЛООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при обследовании больных в клинике. Известен способ выявления клеток лейкоцитов путем приготовления мазко из суспензии клеток периферической крови или лимфатической ll. Однако известный способ не позволяет выявить реактивные ореолообразующие клетки иммунокомпетентной тка ни. Цель изобретения - выявление ореоле образующих реактивных клеток иммунокомпетентной ткани. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выявления ореолообразующих клеток лейкоцитов, осуществляемому путем приготовления мазков из суспензии клеток периферической крови или лимфатической тка ни, суспензию клеток до п|5иготовленй мазков помещают в течение 10-10 мин в раствор, содержащий вес.%: ЛЕЙКОЦИТОВ Хлористый натрий 1-20 Тушь0,6-2,6 или эритроциты 0,02-0,03 ВодаОстальное Способ осуществляется следующим образом. К одной капле крови (0,03 мл) до-. бавляют одну каплю (0,03 мл) клеточной суспензии иммунокомпетентной ткани (например, тимуса, костного мозга, селезенки, лимфатического узла и др.) и капли (0,12 мл) раствора, неорганических ионов (например хлористого натрия) в концентрации 100-200 г/л, В течение 30 с все перемешивают, затем смесь помещают в камеру инкубации (Плакметр специальная камера для инкубации и подсчета бляшек, ореолов и др. объектов). Препарат инкубируют в те-ч чение 10 мин при l8-22f С, затем подсчитывают максимальное количество ореолообразующих клеток иммунокомпетентных тканей в препарате при увеличении микроскопа в 100 раз.

Ореолы вокруг некоторых клеток иммунркомпетентных тканей образуются в результате наблюдаемого отхождения от центральной клетки в радиальных напоавлениях остальных клеток (фоновых клеток:эритроцитов, клеток, дрожжей, т.е. таких, которые сами ореолов не образуют).

Количество исследуемой крови, а именно одна капля - позволяет проводить клинические анализыв массовом масштабе. С целью удешевления способа можно вместо крови (взвесь эритроцитов) --брать суспензию клеток дрожжей, с той же плотностью клеток, что и плотность эритроцитов в крови.

Количество добавляемого раствора неорганических ионов, а именно калли, позволяет в пять раз развести кровь, чтобы создать оптимальные условия для формирования ореолов вокруг некоторых клеток. При большем разведении ореол как фигура существовать не будет. Концентрация электролита в пределах 10-20% (100200 г/л) способствует оптимальным образом выявить ореолообразующие клетки иммунокомпетентных тканей; при концентрации меньше 100 г/л ореолы за мин не образуются, а при концентрации выше 200 г/л происходит высаливание белков, находящихся в плазме, что затрудняет процесс формирования ореолов. Перемешивание необходимо для равномерного распределения клеток и электролита в клеточной суспензии. Помещение капли смеси в плоской микрокамере (Плакметр или камера из предметного и . покровного стекол) необходимо для наблюдения за формированием ореолов. Инкубация при 18-22°С в течение 10 мин необходима для выявления мак. сИмального количества ореолообразуюи их клеток. Среди неорганических ионов, используемых для обнаружения ореолообразующих клеток, можно использовать хлористый натрий, хлористый калий, йодистый калий, бромистый натрий и другие соединения одновалентных катионов.

Пример 1. К одной капле (0,03 мл) крови добавляют 1 каплю (0,03 мл) клеточной суспензии иммунокомпетенгных тканей и k капли (0,12 мл) 15. раствора бромистого

натрия. Все перемешивают и одну каплю (0,03 мл) смеси помещают в плоскую камеру высотой 100 мкм. Камеру изолируют от воздуха вазелином. Через 10 мин инкубации при 18-22 С подсчитывают количество образовавшихся ореолов в поле зрения микроскопа при увеличении в 100 раз.Раствор готовят обычным способом. К 15 г кристаллического порошка добавляют дистиллированную воду до метки 100 мл. Клеточную суспензию иммунокомпетентных тканей готовят, используя метод бесферментной дезагрегации тканей. 5 Плоскую камеру держат в горизонтальном положении. Перемешивание и отмеривание капли проводят с использованием глазной или другой пипетки.

Пример 2. К одной капле (0,03 мл) крови добавляют 1 каплю (0,03 мл) клеточной суспензии иммунокомпетентных тканей и k капли (0,12 мл) 20%-ного раствора хлористого натрия и 0,6% туши. Все пеоемешивают и одну каплю (0,03 мл) смеси помещают в плоскую камеру высотой 100 мкм. Камеру изолируют от воздуха вазелином. Через 10 с инкубации при 18-22 С подсчитывают количество образовавшихся ореолов в поле зрения микроскопа при увеличении в 100 раз.

Предлагаемый способ позволяет выявить ореолообразующие клетки иммунокомпетентных тканей, обладающие свойством не разрушать эритроциты, а только отодвигать их на расстояния до 100 мкм за счет формирования электрически заряженной коллоидной массы из гликокаликса в от

личие от бляшкообразующих клеток, которые синтезируют и выделяют антитела, лизирующие эритроциты. Следовательно, ореолообразующие клетки не синтезируют антитела-гемолизины и этим отличаются от известных иммунологических бляшкообразующих клеток.

В результате применения предлагаемого способа можно в течение 5-15 с выявить ореолообразующие клетки (электрически активные клетки) , количество которых могут свидетельствовать о ранней иммунологической перестройке в организме (исследование пунктатов иммунокомпетент5 ных тканей и органов,крови), в этих тканях ореолы образуют полиморфноядерные лейкоциты, а также бластные клетки, или свидетельствовать о 59300 физиологическом состоянии опухоле- вой ткани - ореолы образуют юные недифференцированные опухолевые клетки, их количество может отражать состояние ткани в динамике. 5 Формула изобретения Способ выявления ореолообразующих Ю клеток лейкоцитов путем приготовления мазков из суспензии клеток пери.ферической крови или лимфатической ткани, о т л и ч а ю щ и и с я тем,. 9 , что, с целью выявления реактивных клеток иммунокомпетентной ткани, суспензию клеток до приготовления мазков помещают в течение 10-10 мин в раствор, содержащий, вес. Хлористый натрий 1-20 Тушь0,6-2,6 или эритроциты 0,02-0,03 ВодаОстальное Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Кост Е.А. Справочник поклиническим лабораторным методам исследования. М., Медгиз, 1975i с. 38-159.