Штамм плесневого гриба aSpeRGILLUS oRyZae-3-продуцент @ -амилазы Советский патент 1982 года по МПК C12N15/00 

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промьпиленнбстн и может быть использовано в хлебопекарной, спиртовой и других областях народного Хозяйства.

Известен ряд штаммов - продуцентов с -амилазы, образующих комплекс амилолитических ферментов как при поверхностном так и при глубинном культивировании .

Известен; штамм AspetgiltBus 3-9-15 активный продуцент д -амилазы, который используется для получения ферментного препарата Амилоризина 2.1С. Активность (,-амилазы 25 ед/мл культуральной жидкости ijНедостатком данного штамма является невысокая активность продуцируемого фермента.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предлагаемому является штамм Ofvlae 74О-А2 - продуцент

Ot-амилазы. Акгивносгьо -Амилазы 200,0 ец/г сухого вещества .

Недостатком известного является нестабилы1а я активность о -амилазы при культивировании его в производственных условиях и повышенная восприимчивость к инфекции.

Цель изобретения - получение высокоактивного, стабильного, устойчивого штамма - гфодуцента амилазы.

Предлагаемый штамм ОУ 9ВДе-3 является активным продуцентом 0,-амилазь. Штамм хранится в коллекции культур промьшдленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коплетспнопный номер Н -115. По активности накопления амилолитнческях ферментов он превышает активность известного и отвечает требованиям современного производства для получения из.него:фермектно1-о препарата Амилоризина П-10Х высшей категории качества.

Предлагаемый штамм получен в результате двух ступенчатой селекции с при3менением мутагенов физической и химич кой природы. На первом этапе селекции используют в качестве мутагена нитрозогуанидин (НГ) в концентрации 2ОО /м на втором этапе - НГ в комбинации с ультрафиолетовыми лучами (УФ-лучи): доза 25 10 эрг/см. В результате многочисленных проверок амилолитической активности вьщелен мутант Ав | efgi Ви% oVVicie -3. Он не только активно синтезирует ci-вмилазу, но и стабильно сохраняет эти свойства в течение 2 лет. Штамм имеет следующие характерист ки, . Морфология. Мицелий сильно разветвлен, с поперечными перегородками, с мелким зернистым включением. Ширина клеток мицелия 2-5 мк. Конидиеносцы длинные, кверху расширяющиеся и. прини мающие грушевидную форму. Ширина конидиеносцев 8-12,5 м. Диаметр головки конидиеносцев 12,5-25,5 мк, но чаще всего встречаются конидиеносцы 18-2О мк. Конидии ровные, мелкие, (блестящие, диаметр конидий 1,5-2,5 м Культурально-бяохимические тфианак Среда сусло-агйр. Белая, пушистая колония с ровными краями. Диаметр колонии 3-4 см на 5 сут роста. Обратная сторона колонии гладкая. Срюда Чапека. Пушистая колония белого цвета с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см. ,На обратной стороне колонии едва заметная радиальная складчатость. . Картофельный агар. Белая пушистая колония с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см. Складчатость на обратной стороне колонии отсутствует. Морковный агар. Белая пушист ая колония, рост очень интенсивный, обратная сторона колонии отличается сильной радиальной складчатостью. Диаметр колонии 6-7 см. I . Сишгетическая агаризованная среда. Мелкая колония, пушистая, серого цвета Диаметр колонии 1-1,5 см. Складчатос oTcyTCTBiyeT. Нитраты восстанавливает. Температурные границы развития: при 2О°С - рост замедленный; ЗО - рост хороший; 40 - рост есть; 50 - рост слабый. Физиологические свойства. РОСТ на молоке. Растет хорошо, молоко цептонизирует. 44 Рост на ломтиках картофеля. Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета. Желатину не разжижает. Маннит, сорбит, декстрины, крахмал, глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, актозу, сахарозу потребляет, при этом 1ц)оисходит закисление среды. При мер. Получение ферментного 1фепарата. Амилсфизина П 10Х при использовании штамма Aspergittus-o tc e-V 1Ч)одуденгга о,-амилазы в поверхностных условиях. Для получения ферментного препарата Амилоризина П 10Х используют штамм .OjVxae - продуцент с -амилазы при культивировании его в поверхностных условиях. Выращивание поверхностной 1риб ной культуры проводят в растительных . камерах на среде из пшеничных отрубей с содержанием в них 19% крахмала и с начальной влажностью .57-58%. Посевной спсррвый материал для засева растительных камер готовят следуюшим образом. Колбу на 750 мл с пшеничными отрубями с толщиной слоя 1,7 см и влажностью 30% засевают суспензией конидий гриба, взятой из пробирки с сусло-агаром Выращивают плесневый гриб в этой колбе 5 сут в термостате до обиль.ного спсфообразования., ;затем из этой культуры готовят спсровую суспензИю. В отделении чистых культур этой споровой суспензией засевают посевные . кюветы со стерильными отрубями для по-, лучения посевного материала, который в свою очередь идет для засева раститель- ньрс камер На одну растительную камеру расходуют ЗОО кг сухих пшеничных отрубей. Для засева одной растительной камеры используют 4 кюветы посевного материала с количеством спор, равным 0,68 « 10 на грамм. При выращивании гриба темп атура в камере . Продолжительность культивирования 36 ч. Начальная влажность питательной среды для растительных камер 59%, конечная влажность готовой культуры гриба 34%. Эту сьфую культуру подвергают экстрагированию водопроводной водой при . Количество воды в экстракторе 4ОО% по отношению к весу воздушносухой культуры. Содержание сухих веществ в экстрактсре колеблются от 5 до 5,8%. Продолжительность экстрагирования 12 ч. Осаждение препарата 1фоводят спирт на установке непрерьюного действия 1ф концекграции его в смеси, 4%. Перед осаждением спирт и экстракт грибной культуры охлаждают до . Температура смесиспирта и экстракта не превьшает 15 С. Осадок отделяют в кларификаторе. Влажность сьфого 60%. Сушку препарата осуществляют в су.& лимационной сушилке КС-30 14ч. Препарат представляет собой порошо светло-серого цвета. Активность препарата по оС-амилазе 2750 ед/г. Полученный препарат А мидориаин П 10Х соответствует высшей категории качества./ Испытания в производственных усло .виях показывают, что штамм устой 1ив к посторонней микрофлоре. 04 Ожидаемая экономическая эффективность от 1фименения полученного штаммамутанта - 1фодвиента d -амилазы составляет 31186 руб. Фор м у л а в 3 о б ре ;г ен и я Штамм плесневого гриба Aspeng-ttCus 0 vzoe-3 (коллекция культур щ омышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный номер Г-115) - (фодуцент о6 амштазы. Источники ив()сфмацяи, принятые во внимание 1фи экспертизе 1.Калу| янц К. А. и Голгер Л. И. Микробные ферментные препараты. М., Пищевая промьшшенность, 1979, . 8-13. 2.Там же, с. 8-9.